一种酶法辅助提取西洋参多糖的方法技术

本发明专利技术公开了一种酶法辅助提取西洋参多糖的方法，采用加入α‑L‑鼠李糖苷酶酶制剂与西洋参和水混合进行酶解，并进行水提和过滤，将上清液进行旋转蒸发浓缩及醇沉之后得到西洋参多糖。本发明专利技术的技术效果是：加入α‑L‑鼠李糖苷酶酶制剂可以提高西洋参多糖的提取率，可使加酶处理的提取率与不加酶处理的提取率相比提高至26.2%；与其他方法相比，酶法辅助提取多糖条件温和，操作方便，经济节约，效果明显，为西洋参多糖的商品化应用提供了基础。

Method for extracting polysaccharide of Panax quinquefolium by enzyme method

The invention discloses a method for enzymatic extraction of American ginseng polysaccharide, by adding alpha L rhamnosidase enzyme and American ginseng and mixed water enzymolysis, and water extraction and filtering the supernatant after rotary evaporation and alcohol precipitation from American ginseng polysaccharide. The technical effect of the invention is: adding alpha L rhamnosidase enzyme preparation can improve the extraction rate of Panax ginseng polysaccharide, the extraction rate of enzyme treatment and without enzyme treatment extraction rate increased to 26.2% compared; compared with other methods, enzymatic extraction of polysaccharide in mild condition, convenient operation, economical, obvious effect, provides the basis for the commercial use of ginseng polysaccharides.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物制剂的
，尤其涉及一种酶法辅助提取西洋参多糖的方法。
技术介绍
西洋参属于五加科人参属多年生植物，又名西洋人参、洋参、花旗参、美国参、广东人参，原产于加拿大和美国，主要集中在加拿大的西安大略大省和美国的威斯康辛州，具有活化石之称。我国应用西洋参已经三百年的历史，但一直依赖进口，20世纪80年代初在我国引种成功后，种植面积逐年扩大，主要集中在吉林，黑龙江、山东、北京等地。我国现已成为世界上生产西洋参的第三大国，亦是世界上最大的西洋参消费国。由于西洋参具广泛的生物活性和独特的药理作用,多年来一直深受世界各国人民的喜爱。西洋参味苦，性凉，功能以补益为主，可滋阴降火、益气生津,治疗多种病症，西洋参的活性成分有皂苷和多糖、微量元素、聚乙炔类、氨基酸、蛋白质和肽类、有机酸、黄酮类、维生素、挥发油等，目前对西洋参的研究主要集中于皂苷，对其他活性成分研究较少。多糖是由多个单糖分子缩合、失水而成的分子结构复杂且庞大的高分子化合物，是一切生命机体必不可缺少的成分，具有多种生物活性。有研究表明西洋参多糖是西洋参中含量最多、免疫活性较强的一类物质。西洋参多糖具有增强免疫力、抗肿瘤、降血糖、抗病毒、抗辐射、抗流感、抗氧化和上呼吸道感染等作用。因此，西洋参多糖具有重要的研究和开发应用价值。有鉴于此，本专利技术人研究和设计了一种酶法辅助提取西洋参多糖的方法。
技术实现思路
本专利技术涉及一种酶法辅助提取西洋参多糖的方法，即通过α-L-鼠李糖苷酶辅助提取西洋参多糖。为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题的技术方案是：一种酶法辅助提取西洋参多糖的方法，包括以下步骤：步骤一、酶液发酵：将含有α-L-鼠李糖苷酶基因的毕赤酵母GS115接种到YPD培养基中进行活化后，转入BMGY培养基中继续活化，收集OD600为2.0-3.0的菌体，并转入到BMMY培养基中，置于30°C诱导表达；每隔24 h加无菌甲醇诱导表达7天，离心收集酶液；步骤二、酶制剂制备：设定喷雾压力为0.2 Mpa，进风温度为135°C，进风速度为4 m³/min，进料速率为800 ml/h，100 mLα-L-鼠李糖苷酶酶液加入15 g的麦芽糊精，进行喷雾干燥制备α-L-鼠李糖苷酶酶制剂；步骤三、酶处理：将西洋参浸泡于8-20倍水中，再添加0.5%-2%的α-L-鼠李糖苷酶酶制剂，并在50°C-60°C中温浴0.5 h-1.5 h；步骤四、水提：将步骤三得到的溶液进行两次水提，第一次加水量为西洋参质量的1-10倍，水提时间为0.5 h-2.5 h；第二次加水量为西洋参质量的1-6倍，水提时间为0.5 h -1.5 h；步骤五、浓缩及醇沉：将步骤四得到的西洋参多糖水提液通过旋转蒸发浓缩，然后加入3倍浓缩液体积的无水乙醇，静置15 h，然后过滤得到不溶物，将不溶物干燥后即可得到西洋参多糖。优选地，步骤三中，水与西洋参的质量比为20：1。优选地，步骤三中，酶制剂的添加量为1%。优选地，步骤三中，酶解温度为50°C，酶解时间为1.5 h。优选地，步骤四中，水提两次，第一次加水量为西洋参质量的8倍，水提时间为0.5 h；第二次加水量为西洋参质量的2倍，水提时间为0.5 h。本专利技术的技术效果是：加入α-L-鼠李糖苷酶酶制剂可以提高西洋参多糖的提取率，可使多糖的提取率与不加酶处理的提取率相比可提高至26.2%；与其他方法相比，酶法辅助提取多糖条件温和，操作方便，经济节约，效果明显，为西洋参多糖的商品化应用提供一定的基础。具体实施方式本专利技术的实施例以酶法辅助提高西洋参多糖的提取率的方法说明本专利技术的工艺，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：实施例1：步骤一、酶液发酵：将含有α-L-鼠李糖苷酶基因的毕赤酵母GS115接种到YPD培养基中进行活化后，转入BMGY培养基中继续活化，收集OD600为2.0-3.0的菌体，并转入到BMMY培养基中，置于30°C诱导表达；每隔24 h加无菌甲醇诱导表达7天，离心收集酶液。所述YPD培养基、BMGY培养基及BMMY培养基均为培养酵母菌的常规培养基。步骤二、酶制剂制备：设定喷雾压力为0.2 Mpa，进风温度为135°C，进风速度为4 m³/min，进料速率为800 ml/h，100 mLα-L-鼠李糖苷酶酶液加入15 g的麦芽糊精，进行喷雾干燥制备α-L-鼠李糖苷酶酶制剂。实施例2：步骤一、酶处理：将西洋参浸泡于20倍水中，再添加1%的α-L-鼠李糖苷酶酶制剂，并在50°C中温浴1.5 h；步骤二、水提：将步骤一得到的溶液进行两次水提，第一次加水量为西洋参质量的8倍，水提时间为0.5 h；第二次加水量为西洋参质量的2倍，水提时间为0.5 h；步骤三、浓缩及醇沉：将步骤二得到的西洋参多糖水提液通过旋转蒸发浓缩，然后加入3倍浓缩液体积的无水乙醇，静置15 h，然后过滤得到不溶物，将不溶物干燥后即可得到西洋参多糖，多糖含量为19.99%。步骤四、对照组：将西洋参浸泡于20倍水中并在50°C中温浴1.5 h，再进行同步骤二、步骤三的水提、浓缩及醇沉处理，得到西洋参多糖，测定多糖含量为15.69%。可见，加酶处理的多糖的提取率与不加酶处理的提取率相比提高26.2%。实施例3：步骤一、酶处理：将西洋参浸泡于10倍水中，再添加2%的α-L-鼠李糖苷酶酶制剂，并在60°C中温浴0.5 h；步骤二、水提：将步骤一得到的溶液进行两次水提，第一次加水量为西洋参质量的10倍，水提时间为1 h；第二次加水量为西洋参质量的5倍，水提时间为1 h；步骤三、浓缩及醇沉：将步骤二得到的西洋参多糖水提液通过旋转蒸发浓缩，然后加入3倍浓缩液体积的无水乙醇，静置15 h，然后过滤得到不溶物，将不溶物干燥后即可得到西洋参多糖，多糖含量为19.87%。步骤四、对照组：将西洋参浸泡于10倍水中并在60°C中温浴0.5 h，再进行同步骤二、步骤三的水提、浓缩及醇沉处理，得到西洋参多糖，测定多糖含量为15.65%。可见，加酶处理的多糖的提取率与不加酶处理的提取率相比提高24.44%。实施例4：步骤一、酶处理：将西洋参浸泡于8倍水中，再添加0.5%的α-L-鼠李糖苷酶酶制剂，并在50°C中温浴1.5 h；步骤二、水提：将步骤一得到的溶液进行两次水提，第一次加水量为西洋参质量的1倍，水提时间为2.5 h；第二次加水量为西洋参质量的6倍，水提时间为1.5 h；步骤三、浓缩及醇沉：将步骤二得到的西洋参多糖水提液通过旋转蒸发浓缩，然后加入3倍浓缩液体积的无水乙醇，静置15 h，然后过滤得到不溶物，将不溶物干燥后即可得到西洋参多糖，多糖含量为21.02%。步骤四、对照组：将西洋参浸泡于8倍水中并在50°C中温浴1.5 h，再进行同步骤二、步骤三的水提、浓缩及醇沉处理，得到西洋参多糖，测定多糖含量为17.20%。可见，加酶处理的多糖的提取率与不加酶处理的提取率相比提高22.21%。本专利技术采用加入α-L-鼠李糖苷酶酶制剂提高西洋参多糖的提取率，可使多糖的提取率与不加酶处理的提取率最高提高26.2%，且酶法提取条件温和，操作方便，经济节约，为西洋参多糖的广泛应用提供基础。以上所述，仅为本专利技术较佳实施例而已，故不能依此限定本专利技术实施的范围，即依本专利技术专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种酶法辅助提取西洋参多糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、酶液发酵：将含有α‑L‑鼠李糖苷酶基因的毕赤酵母GS115接种到YPD培养基中进行活化后，转入BMGY培养基中继续活化，收集OD600为2.0‑3.0的菌体，并转入到BMMY培养基中，置于30°C诱导表达；每隔24 h加无菌甲醇诱导表达7天，离心收集酶液；步骤二、酶制剂制备：设定喷雾压力为0.2 Mpa，进风温度为135°C，进风速度为4 m³/min，进料速率为800 ml/h，100 mLα‑L‑鼠李糖苷酶酶液加入15 g的麦芽糊精，进行喷雾干燥制备α‑L‑鼠李糖苷酶酶制剂；步骤三、酶处理：将西洋参浸泡于8‑20倍水中，再添加0.5%‑2%的α‑L‑鼠李糖苷酶酶制剂，并在50°C‑60°C中温浴0.5 h‑1.5 h；步骤四、水提：将步骤三得到的溶液进行两次水提，第一次加水量为西洋参质量的1‑10倍，水提时间为0.5 h‑2.5 h；第二次加水量为西洋参质量的1‑6倍，水提时间为0.5 h ‑1.5 h；步骤五、浓缩及醇沉：将步骤四得到的西洋参多糖水提液通过旋转蒸发浓缩，然后加入3倍浓缩液体积的无水乙醇，静置15 h，然后过滤得到不溶物，将不溶物干燥后即可得到西洋参多糖。...

【技术特征摘要】
1.一种酶法辅助提取西洋参多糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、酶液发酵：将含有α-L-鼠李糖苷酶基因的毕赤酵母GS115接种到YPD培养基中进行活化后，转入BMGY培养基中继续活化，收集OD600为2.0-3.0的菌体，并转入到BMMY培养基中，置于30°C诱导表达；每隔24 h加无菌甲醇诱导表达7天，离心收集酶液；步骤二、酶制剂制备：设定喷雾压力为0.2 Mpa，进风温度为135°C，进风速度为4 m³/min，进料速率为800 ml/h，100 mLα-L-鼠李糖苷酶酶液加入15 g的麦芽糊精，进行喷雾干燥制备α-L-鼠李糖苷酶酶制剂；步骤三、酶处理：将西洋参浸泡于8-20倍水中，再添加0.5%-2%的α-L-鼠李糖苷酶酶制剂，并在50°C-60°C中温浴0.5 h-1.5 h；步骤四、水提：将步骤三得到的溶液进行两次水提，第一次加水量为西洋参质量的1-10倍，水提时间...

【专利技术属性】
技术研发人员：李利君，杨岩，杨远帆，倪辉，冷晓冬，于越，陈艳红，杜希萍，黄高凌，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：福建;35