本发明专利技术属医药技术领域，涉及六甲氧基二氢黄酮‑鼠李糖基‑鼠李糖苷及其应用。本发明专利技术是将九里香经溶剂提取和萃取分离，然后采用硅胶柱分离，并利用半制备色谱进一步分离，浓缩冷冻干燥得成品六甲氧基二氢黄酮‑鼠李糖基‑鼠李糖苷。本发明专利技术通过抗肿瘤活性评价发现，六甲氧基二氢黄酮‑鼠李糖基‑鼠李糖苷细胞毒性不大；对结肠癌细胞HT‑29与Fn（粘连蛋白）粘附，以及与HUVECs细胞的粘附有明显抑制作用；对HT‑29迁移能力（划痕愈合实验）和侵袭能力有明显抑制作用；对小鼠体内B16‑F10肺转移有明显抑制作用。因此，六甲氧基二氢黄酮‑鼠李糖基‑鼠李糖苷具有抑制肿瘤转移活性，能用于制备抗癌药物，具有良好的开发应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属医药
，具体涉及一种六甲氧基二氢黄酮-鼠李糖基-鼠李糖苷 及其应用。
技术介绍
肿瘤的转移是一个多步骤和多因素参与的特别复杂的过程，这个全过程会受到多 种因素的影响，比如：肿瘤本身和宿主环境等。转移是癌症中最可怕的一面，它是指细胞从 原发性肿瘤扩散到远处器官，并且不间断地持续增长。目前，尽管在诊断、外科技术、病人 护理和局部与全身辅助治疗方面已有显著改善，但是病人常常由于癌症转移而导致死亡。 原发性肿瘤手术后的"亚健康人"体内残留的循环肿瘤细胞（Circulating tumor cells, CTCs)是未来肿瘤转移的致命根源。 原发性肿瘤多为器官局部性疾病，但许多病人在手术后，其体内的CTCs会通过 血流传播到其它组织器官形成转移，这是导致肿瘤患者死亡的主要原因。CTCs可在如骨 髓、淋巴系统等循环系统中长期以休眠或低活性状态存在。由于其休眠(或低活性)，所以 化疗药物对其不敏感；也由于其在手术后的亚健康人体内含量非常低，因此化疗药物对其 都不起作用。与正常血液细胞相比，CTCs具有抗原特性，因为它的表面存在丰富的生物标 记物，如SialyLewis、上皮细胞粘附分子（EpCAM)、兔抗人增殖细胞核核抗原单克隆抗体 (Ki-67)、人类表皮生长因子受体（HER2)、CD44+和叶酸受体（Folate Rec印tor)等，这些物 质在正常细胞表面不表达或低表达，但是它们在肿瘤细胞表面可以高度表达。 外科手术可以切除早期肿瘤，成功率可以达到95%以上。但是如果一旦肿瘤转移 发生了，外科手术就没有办法一一切除全身的转移的肿瘤，这时使用"抗癌药"一样无效；化 疗药物不能预防肿瘤转移。尽管"抗癌药"已经显示出了一些作用，但是仍然没有显著性的 降低癌症的死亡率，因为手术后病人体内循环肿瘤细胞的数量急剧减少且绝大多数处于静 止状态，而化疗药物只对迅速增长和分裂的肿瘤细胞起作用，反而使用化疗药物却严重地 打击了病人自身的免疫系统，使得病人自身的平衡沿着不利方面倾斜。因此，我们认为，如 果能够药物干预CTCs对内皮细胞的粘附这一重要的肿瘤转移的源头步骤，甚至综合控制 几个关键位点，就有可能有效地预防与CTCs有关的肿瘤手术后的再转移。因此术后预防肿 瘤转移的低毒药物的开发成为亟需解决的任务。 九里香（M/rraja exoiica (L.))为芸香科九里香属植物。与大多数天然植物一 样，九里香中的化学成分也很复杂，以黄酮类、香豆素类和生物碱类等为主。 其中黄酮类化合物已经被大量实验证明有抗多种肿瘤转移的活性，包括甲状腺、 结肠、口腔、宫颈，肺和肝脏等癌症。例如：槲皮黄酮可以抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的迀 移和侵袭。南方医科大学黎春华等研究发现芹菜素可以抑制结直肠癌的生长与转移。肝细 胞生长因子（HGF)和它的受体c-Met的激活在各种各样的肿瘤细胞的癌症的侵袭和转移中 都起着重要作用，在对肝癌ifepG2的研究中通过细胞粘附和Transwell迀移侵袭试验发现 川陈皮素可以显著地抑制由HGF诱导的粘附、侵袭和迀移的能力。 在进行了一系列相关研究后，我们发现了一种有效的可能具有抗肿瘤转移的九里 香黄酮糖苷单一化合物的提取、分离方法，并据此完成了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供化合物六甲氧基二氢黄酮-鼠李糖基-鼠李糖苷及其应 用。 六甲氧基二氢黄酮-鼠李糖基-鼠李糖苷，其结构式为： 所述六甲氧基二氢黄酮-鼠李糖基-鼠李糖苷制备方法包括以下步骤： (1)取干燥的九里香药材(嫩枝)4. 2 Kg粉碎，5 L 75%的乙醇中回流提取3次，每次 3小时。过滤，合并滤液； (2) 将（1)中得到的滤液减压浓缩，得到糖浆状总浸膏。总浸膏用水超声悬浮，悬浮液 用二氯甲烷萃取，萃取体积比例为1: 1，萃取4次，减压浓缩溶剂部分得九里香粗提物； (3) 粗提取物于硅胶柱上以乙酸乙酯-石油醚进行梯度层析分离，收集乙酸乙酯洗脱 部分，旋转蒸发除去溶剂，得到九里香黄酮组分，其收率为〇. 05-0. 1% ; (4) 采用半制备高效液相色谱将（3)中组分进行分离，得到九里香黄酮糖苷单体提取 物；经鉴别，结构为：六甲氧基二氢黄酮-鼠李糖基-鼠李糖苷。 步骤（4)中的制备液相分离条件为，色谱柱：Agela Venusil XBP C18 ;流速：1-4 mL /min ;柱温：35° C ;检测荧光激发波长352 nm、发射波长458nm ;流动相为甲醇和纯水混 合液，甲醇和纯水的体积比例9:11，等度洗脱。 所述的六甲氧基二氢黄酮-鼠李糖基-鼠李糖苷在肿瘤转移预防药物上的应用。 本专利技术的优点在于：六甲氧基二氢黄酮-鼠李糖基-鼠李糖苷该单体化合物在低 毒浓度下具有以下优点：1.明显的抗肿瘤细胞与基质成分Fn (粘连蛋白）的粘附及其与内 皮细胞HUVECs粘附；2.明显的抗肿瘤细胞迀移与侵袭能力；3.促进肿瘤细胞凋亡。【附图说明】 图1九里香黄酮糖苷粗提取物的紫外-可见吸收光谱图。 图2九里香黄酮糖苷粗提取物的荧光发射光谱图。 图3九里香黄酮组分的半制备HPLC色谱图，内插为制备得到的单体HPLC分析图。 图4六甲氧基二氢黄酮-鼠李糖基-鼠李糖苷的质谱图。 图5六甲氧基二氢黄酮离子示意图（A)。六甲氧基二氢黄酮-鼠李糖苷裂解离子 示意图⑶。 图6六甲氧基二氢黄酮-鼠李糖基-鼠李糖苷的核磁共振碳谱图。 图7六甲氧基二氢黄酮-鼠李糖基-鼠李糖苷的核磁共振氢谱图。 图8六甲氧基二氢黄酮-鼠李糖基-鼠李糖苷对结肠癌细胞HT-29细胞活性的影 响。 图9采用MTT法检测六甲氧基二氢黄酮-鼠李糖基-鼠李糖苷对结肠癌细胞HT-29 与Fn (粘连蛋白）粘附能力的影响（**p < 0· 01)。 图10六甲氧基二氢黄酮-鼠李糖基-鼠李糖苷（1，10, 30 μ g/mL)对结肠癌细胞 HT-29与HUVECs细胞的粘附率的影响（#p < 0. 01)。 图11六甲氧基二氢黄酮-鼠李糖基-鼠李糖苷对结肠癌细胞HT-29迀移能力(划 痕愈合实验）的影响（*P < 〇. 05, #p < 0. 01)。 图12六甲氧基二氢黄酮-鼠李糖基-鼠李糖苷（1，10, 30 μ g/mL)对结肠癌细胞 HT-29侵袭能力的影响（#p < 0· 01)。 图13六甲氧基二氢黄酮-鼠李糖基-鼠李糖苷对C57BL/6小鼠体内B16-F10肺 转移的作用及肺组织形态的影响的典型照片（A)。六甲氧基二氢黄酮-鼠李糖基-鼠李糖 苷对小鼠体内B16-F10转移的影响的柱状图（B)。【具体实施方式】 本专利技术提供了所述黄酮类提取物的研究和单体新化合物的分离纯化方法，该研究 及方法包括以下步骤。预分离工序为： (1) 取干燥的九里香药材(嫩枝)4. 2 Kg粉碎，在5 L 75%的乙醇中加热回流煮沸，提取 3次，每次3小时。过滤，合并滤液； (2) 将（1)中得到的滤液减压浓缩，得到糖浆状总浸膏。总浸膏用水超声悬浮，悬浮液 用二氯甲烷萃取，萃取体积比例为1: 1，萃取4次，减压浓缩溶剂部分得九里香粗提物； (3) 粗提取物于硅胶柱上以乙酸乙酯-石油醚进行梯度层析分离，收集乙酸乙酯洗脱 部分，旋转蒸发除去溶剂，本文档来自技高网...
【技术保护点】
六甲氧基二氢黄酮‑鼠李糖基‑鼠李糖苷，化学结构式如下：。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：江舟，庞雅琼，周素霞，王建，贾力，
申请(专利权)人：福州大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
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