一种海洋细菌基因LfliZ及应用制造技术

本发明专利技术涉及一种海洋细菌基因LfliZ及其应用。一种海洋细菌基因LfliZ，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；本发明专利技术还涉及该基因LfliZ表达的重组蛋白LfliZ及在制备2′,3′‑环形核苷单磷酸中的应用。本发明专利技术克隆的基因LfliZ编码的蛋白LfliZ能够在大肠杆菌胞内结合四种2′,3′‑环形核苷单磷酸。通过提纯重组LfliZ蛋白，可以实现从大肠杆菌中同时直接提取四种2',3'‑环形核苷单磷酸。经计算每升培养液可提取约2.5mg的四种纯品2',3'‑环形核苷单磷酸，有较好的应用潜力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种海洋细菌基因LfliZ及其应用，属于生物技术

技术介绍
海洋微生物数量巨大，新种资源极其丰富，也存在大量新基因资源。随着技术的进步，海洋微生物资源的开发成为各国研究的焦点。但是，由于采样和培养等困难，目前对海洋微生物资源及其基因资源的开发利用还很有限。发现海洋中新基因并研究其功能，对开发和利用海洋微生物基因资源具有重要意义。环形核苷酸是细胞内重要的第二信使，参与细胞内多种信号转导途径的调控。现已知发现的第二信使包括环形腺苷单磷酸(3′,5′-cAMP)、环形鸟苷单磷酸(3′,5′-cGMP)、环形胞苷单磷酸(3′,5′-cCMP)、环形尿苷单磷酸(3′,5′-cUMP)、环形二鸟苷酸(c-di-GMP)，环形二腺苷酸(c-di-AMP)及环形鸟苷腺苷酸(cGAMP)。除了上述已发现的环形核苷酸类第二信使外，在2009年埃德温(Edwin)等人还首次在人的肾脏细胞中发现了腺苷-2',3'-环形单磷酸(2′,3′-cAMP)，随后人们又在哺乳动物的大脑等组织细胞中发现了腺苷-2',3'-环形单磷酸的存在。科研人员还从植物细胞中检测到腺苷-2',3'-环形单磷本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种海洋细菌基因LfliZ，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种海洋细菌基因LfliZ，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.权利要求1所述海洋细菌基因LfliZ表达的重组蛋白LfliZ，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。3.一种重组载体，在质粒中插入含有权利要求1所述海洋细菌基因LfliZ。4.如权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述的质粒为pET-22b(+)质粒。5.一种重组细胞，将权利要求3所述重组载体转化入宿主细胞中获得。6.如权利要求5所述的重组细胞，其特征在于，所述的宿主细胞为大肠杆菌；进一步优选的，所述的宿主细胞为大肠杆菌BL21(DE3)。7.权利要求1所述海洋细菌基因LfliZ在制备2′,3′-环形核苷单磷酸中的应用。8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤如下：(1)制备核酸序列如SEQ ID No.1所示的海洋细菌基因LfliZ；(2)构建含有SEQ ID No.1所示核苷酸序列的重组载体；(3)构建含有步骤(2)所示重组载体的重组细胞；(4)发酵培养上述重组细胞，经提取纯化，制得2',3'-环形核苷单磷酸。9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述步骤(2)的重组载体采用的质粒为pET-22b(+)质粒；所述步骤(3)中的重组细胞采用的宿主细胞为大肠杆菌；进一步优选的，所述的宿主细胞为大肠杆菌BL21(DE3)。10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述步骤(4)中，发酵培养步骤如下：先在35～38℃、150～200rpm条件下扩大培养至菌液在波长为600nm时的吸光度为0.8；然后在18～22℃、100～140rpm继续培养25～35min；然后加入IPTG至浓度为0.1mM，继续诱导培养22～25小时；所述发酵培养采用的培养基为LB液体培养基，每升组分如下：10g NaCl，10g蛋白胨，5g酵母粉，蒸馏水定容至1L...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈秀兰，张玉忠，刘昂，宋晓妍，于洋，李平一，张熙颖，石梅，解彬彬，苏海楠，秦启龙，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东;37