一种基因组DNA提取试剂盒及提取方法技术

本发明专利技术提供了一种基因组DNA提取试剂盒及提取方法，其中基因组DNA提取试剂盒包括消化液、裂解液、纳米磁珠、洗涤液A、洗涤液B和洗脱液，以及本发明专利技术的提取方法具有提取纯化步骤简单、操作过程安全便捷、基因组DNA产物含量高，完整度好，纯度高的特点。可以在1‑2小时内快速消化处理胃黏膜样本，通过简单的操作步骤得到高纯度、完整的基因组DNA，方便研究人员进行后续的实验。

【技术实现步骤摘要】
一种基因组DNA提取试剂盒及提取方法
本专利技术涉及DNA提取
，具体涉及胃黏膜组织基因组DNA提取试剂盒及其提取方法。
技术介绍
随着分子生物学技术的发展，基因组水平上的研究已成为热点。在分子遗传学和分子流行病学中，无论是全基因组关联分析(GWAS)、候选SNP位点基因分型，还是基因组文库的建立，都需要从各类样本中提取基因组DNA。所抽提得到的DNA浓度、纯度和一级结构的完整性都会影响到后续的研究，因此高效、可靠的基因组DNA提取方法是分子遗传学基础研究迫切需要的。目前基因组DNA提取纯化的方法有很多种，如碱裂解法、煮沸法、盐析法、离心柱法和磁珠法。这些方法各有优缺点，但都应考虑以下原则：防止和抑制DNase对DNA的降解；尽量减少对溶液中DNA的机械剪切破坏，保持DNA分子的完整；将蛋白质、脂类、糖类等物质分离干净。碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的，但得到的基因组DNA含有较多的杂质。煮沸法是经过高温煮沸将样品中的DNA通过核酸裂解液的作用释放出来，离心沉淀后将杂质去除，上清液即可用作一些后续实验的模板使用。盐析法是利用DNA和蛋白质在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M氯化纳提取,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡，使其乳化，再离心除去蛋白质。此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中，用2倍体积95％乙醇可将DNA钠盐沉淀出来。离心柱法是基因组DNA在高盐条件下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗+离心的步骤，将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后使用低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。磁珠法所使用的纳米磁珠是一种新型的功能化固体载体，其表面包被有活性基团，可以与多种生物活性物质发生偶联，兼具有液体的流动性和固体磁性材料等特点，在外磁场的作用下可以定向移动和集中，当撤去外磁场后，稍加振荡或抽吸又可均匀分散于液体中，从而使固液相的分离变的十分快捷方便，通过简单的洗脱可以得到纯度很高的靶向物质。例如，在充分裂解的样本溶液中，纳米磁珠可以特异性吸附DNA，该种吸附特异性与DNA结构及片段大小无关。通过洗涤液洗涤去除溶液中的蛋白和盐离子，最后在仅留有特异吸附DNA的磁珠中加入洗脱液，将DNA释放于洗脱液中。磁珠法提取基因组DNA与上述其它方法相比，不使用有毒试剂，操作简单，不易污染。
技术实现思路
为了解决上述不足的缺陷，本专利技术提供了一种基因组DNA提取试剂盒及提取方法，具有消化处理胃黏膜样本速度快，提取纯化步骤少，操作简便，整个过程不涉及有毒试剂，安全便捷，所得基因组DNA含量高，完整度好，纯度高，可直接用于后续检测。本专利技术提供了一种基因组DNA提取试剂盒，包括消化液、裂解液、纳米磁珠、洗涤液A、洗涤液B和洗脱液。上述的试剂盒，其中，所述消化液包括Tris-HCL、EDTA二钠、NaCL和SDS，所述裂解液包括异硫氰酸胍、柠檬酸三钠、Tween20，所述纳米磁珠包括包裹有二氧化硅的Fe3O4,洗涤液A包括异硫氰酸胍、Tris-HCL和无水乙醇，所述洗涤液B包括Tris-HCL、NaCL和无水乙醇，所述洗脱液包括Tris-HCL、EDTA二钠。上述的试剂盒，其中，所述消化液包含pH7.0-9.0浓度1-5mM的Tris-HCL、pH8.0-9.0浓度3-7mM的EDTA二钠、浓度50-200mMNaCL和0.5％-3％SDS。上述的试剂盒，其中，所述裂解液pH值为4.0-7.0，包含浓度3-5mM的异硫氰酸胍、浓度50-200mM的柠檬酸三钠和1％-5％Tween20。上述的试剂盒，其中，所述纳米磁珠包括包裹有二氧化硅的Fe3O4，直径为200-2000nm，浓度为50-200mg/ml。上述的试剂盒，其中，所述洗涤液A包含浓度1-4mM的异硫氰酸胍、pH7.0-9.0浓度10-50mM的Tris-HCL和20％-50％的无水乙醇。上述的试剂盒，其中，所述洗涤液B包含pH7.0-9.0浓度1-5mM的Tris-HCL、浓度10-50mMNaCL和50％-80％的无水乙醇。上述的试剂盒，其中，所述洗脱液包含pH为7.0-9.0浓度5-20mM的Tris-HCL和pH8.0-9.0浓度0.5-3mM的EDTA二钠。本专利技术的另一面，本专利技术还提供了一种基因组DNA提取试剂盒的提取方法，包括以下步骤：步骤S1：取5-300mg新鲜胃黏膜组织样本于1.5ml离心管中，使用无菌移液枪头向离心管中加入100-300ul消化液，震荡混匀1min，65℃水浴1-2h，其间每隔15min震荡混匀1min，直至胃黏膜组织样本完全消化；步骤S2：使用无菌移液枪头向水浴后的离心管中加入300-500ul裂解液和50-200mg/ml的纳米磁珠10-30ul，震荡混匀1min，室温静置10min；步骤S3：将步骤S2中的离心管置于磁力架上30s，待纳米磁珠完全吸至管壁之后，使用无菌移液枪头吸弃上清溶液；步骤S4：使用无菌移液枪头向步骤S3离心管中加入500-800ul洗涤液A，将该离心管震荡混匀1min，置于磁力架上30s，待纳米磁珠完全吸至管壁之后，使用无菌移液枪头吸弃上清溶液；步骤S5：使用无菌移液枪头向步骤S4离心管中加入500-800ul洗涤液B，将该离心管震荡混匀1min，置于磁力架上30s，待纳米磁珠完全吸至管壁之后，使用无菌移液枪头吸弃上清溶液，室温开盖干燥10-20min直至管内无液体残留；步骤S6：使用无菌移液枪头向步骤S5离心管中加入100-300ul洗脱液，65℃水浴5-10min；步骤S7：将步骤S6离心管震荡混匀1min，置于磁力架上30s，待纳米磁珠完全吸至管壁之后，使用无菌移液枪头吸取上清至新的离心管，即获得基因组DNA。本专利技术具有以下优点：提取纯化步骤简单、操作过程安全便捷、基因组DNA产物含量高，完整度好，纯度高。可以在1-2小时内快速消化处理胃黏膜样本，通过简单的操作步骤得到高纯度、完整的基因组DNA，方便研究人员进行后续的实验。附图说明通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本专利技术及其特征、外形和优点将会变得更明显。在全部附图中相同的标记指示相同的部分。并未刻意按照比例绘制附图，重点在于示出本专利技术的主旨。图1为本专利技术的胃黏膜组织基因组DNA提取方法与QIAampDNAMiniKit和上海生工磁珠法基因组DNA抽提试剂盒(动物)提取方法的基因组DNA完整度比较示意图。图2是本专利技术的胃黏膜组织基因组DNA提取方法与QIAampDNAMiniKit和上海生工磁珠法基因组DNA抽提试剂盒(动物)提取方法的基因组DNA中β-actin荧光PCRCt值比较示意图。具体实施方式在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本专利技术更为彻底的理解。然而，对于本领域技术人员而言显而易见的是，本专利技术可以无需一个或多个这些细节而得以实施。在其他的例子中，为了避免与本专利技术发生混淆，对于本领域公知的一些技术特征未进行描述。为了彻底理解本专利技术，将在下列的描述中提出详细的步骤以及详细的结构，以便阐释本专利技术的技术方案。本专利技术的较佳实施例详细描述如下，然而除了这些详细描述外，本专利技术还可以具有其他实施方式。本专利技术提供了本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，包括消化液、裂解液、纳米磁珠、洗涤液A、洗涤液B和洗脱液。

【技术特征摘要】
1.一种基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，包括消化液、裂解液、纳米磁珠、洗涤液A、洗涤液B和洗脱液。2.如权利要求1所述的一种基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述消化液包括Tris-HCL、EDTA二钠、NaCL和SDS，所述裂解液包括异硫氰酸胍、柠檬酸三钠、Tween20，所述纳米磁珠包括包裹有二氧化硅的Fe3O4,洗涤液A包括异硫氰酸胍、Tris-HCL和无水乙醇，所述洗涤液B包括Tris-HCL、NaCL和无水乙醇，所述洗脱液包括Tris-HCL、EDTA二钠。3.如权利要求1-2任一项所述的一种基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述消化液包含pH7.0-9.0浓度1-5mM的Tris-HCL、pH8.0-9.0浓度3-7mM的EDTA二钠、浓度50-200mMNaCL和0.5％-3％SDS。4.如权利要求3所述的一种基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液pH值为4.0-7.0，包含浓度3-5mM的异硫氰酸胍、浓度50-200mM的柠檬酸三钠和1％-5％Tween20。5.如权利要求3所述的一种基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述纳米磁珠包括包裹有二氧化硅的Fe3O4，直径为200-2000nm，浓度为50-200mg/ml。6.如权利要求3所述的一种基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述洗涤液A包含浓度1-4mM的异硫氰酸胍、pH7.0-9.0浓度10-50mM的Tris-HCL和20％-50％的无水乙醇。7.如权利要求3所述的一种基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述洗涤液B包含pH7.0-9.0浓度1-5mM的Tris-HCL、浓度10-50mMNaCL和50％-80％的无水乙醇。8.如权利要求3所述的一种基因组DNA提取试剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈春峰，郜恒骏，张小燕，沈维祥，牟晓庆，
申请(专利权)人：上海芯超生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31