提取动物基因组DNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种提取动物基因组DNA的方法。本发明专利技术适用于任何动物，其提取效率高效、方便快捷、经济省时，尤其对于不易获得组织肉样、血液的动物，或为了减小动物应激，保护珍惜物种等。本发明专利技术成本低廉，一个样品仅需花费0.5元，且提取时间短，单个样品的提取时间为90分钟。

Method for extracting animal genomic DNA

The invention discloses a method for extracting animal genomic DNA. The invention is applicable to any animal, the extraction efficiency of efficient, convenient and time-saving, especially for the organization is not easy to get the meat, animal blood, or in order to reduce the stress of animal species protection, etc.. The invention has the advantages of low cost, only 0.5 yuan for a sample and short extraction time, and the extraction time of a single sample is about 90 minutes.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生命科学
，尤其是一种提取动物基因组DNA的方法。
技术介绍
众所周知，基因组DNA是最基本的遗传物质，是生物个体遗传信息的载体，在分子生物学、分子遗传学试验中，获取、使用高质量的基因组DNA是试验成功的基础。自上世纪50年代，Watson和Crick成功构建DNA双螺旋模型以来，分子生物学在广度和深度上都获得空前的发展。DNA作为分子生物学研究的基础，在生物领域尤其是遗传学方面的研究日渐深入，在此基础上产生的基因工程技术已在医药、农业、畜牧业等领域获得广泛应用。目前，随着分子生物技术的高速发展，研究和应用DNA的基础是提取纯化结构完整的DNA，为此针对不同来源的DNA建立了不同的提取纯化方法。最为经典的苯酚-氯仿法虽然能获得很高质量的基因组DNA，能够满足各种分子试验的实验要求，但其操作繁琐，用时较长(3天)；玻璃棒缠绕法虽然操作简单，但实验要求较高，需要的时间也长(1天)；近年来，不少生物试剂公司研发了不少针对不同样品基因组DNA提取的试剂盒，这些试剂盒操作简单快捷，能在较短的时间内(1小时左右)获取基因组DNA，但样品质量不佳用试剂盒提取很难达到理想状态，且费用较高，一个样品约花费6元左右。因此，寻找一种高效、经济的DNA提取方法显得尤为必要。
技术实现思路
本专利技术的目的是：提供一种提取动物基因组DNA的方法，它无需纯化，所得DNA可直接用于分子试验，显著降低了DNA提取成本。本专利技术是这样实现的：提取动物基因组DNA的方法，包括如下步骤：1)样品采集：采集动物肌肉组织或毛囊，并放置在质量百分比为70％的酒精中，在-20℃进行保存；2)细胞裂解液配制：细胞裂解液中，按浓度为3.770g/LEDTA-Na2、1.5764g/L Tris-HCl、0.5844g/L氯化钠、2.884g/L十二烷基硫酸钠，以ddH2O为溶剂进行配置，配置的溶液充分溶解后，在37℃孵育5min；3)DNA萃取液配制：称取0.6041g的氯化锂溶于950mL的ddH2O中充分溶解，然后定容至1000mL；4)DNA提取：a)取肌肉组织放置于的离心管中，并用充分剪碎；若是毛囊则取5-8根带毛囊的毛发，用剪去毛干部分，将毛囊置于离心管中；b)向离心管中加入细胞裂解液，轻轻晃荡使组织样品完全浸泡在裂解液中；c)再向离心管中加入蛋白酶K，充分吹打后，振荡18-22s，在4000-5000rpm下离心3-5s；d)之后将离心管在20-60℃水浴10-15min；e)向离心管中加入氯化锂，振荡10-15s，在4000-5000rpm离心下8-10s，立即冰浴10-15min；f)在转速为13000-14000rpm离心10-15min，将上清液转移至洁净的离心管中，弃沉淀；g)向上清液中加入预先冷冻过的无水乙醇，轻轻上下颠倒摇晃，室温静置10-15min沉淀DNA。h)在转速为13000-14000rpm离心10-15min，弃上清，用相同体积的质量百分比为70％或75％乙醇洗涤一次；重复上述步骤；i)弃上清，在滤纸上倒置离心管20min，使管内液体与酒精完全去除；或直接置于40-45℃烘箱烘干10min；j)加入TE或ddH2O溶解DNA，完成DNA的提取。所述的预先冷冻过的无水乙醇是将无水乙醇在-20℃下放置30min以上。所述的细胞裂解液现配现用。由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本专利技术适用于任何动物，其提取效率高效、方便快捷、经济省时，尤其对于不易获得组织肉样、血液的动物，或为了减小动物应激，保护珍惜物种等。本专利技术成本低廉，一个样品仅需花费0.5元，且提取时间短，单个样品的提取时间为90分钟。附图说明附图1为本专利技术的DNA琼脂糖凝胶电泳检测图；附图2为本专利技术的PCR扩增凝胶电泳检测图。具体实施方式本专利技术的实施例1：提取动物基因组DNA的方法，包括如下步骤：1、实验样品采集采取新鲜肌肉组织(高坡猪)于70％酒精中，由冰盒带回实验室置于-20℃冰箱保存。2、细胞裂解液配制细胞裂解液配制(现配现用)：配置1000mL细胞裂解液，分别称取3.770g的EDTA-Na2、1.5764g的Tris-HCl、0.5844g的NaC(氯化钠)l、2.884g的SDS(十二烷基硫酸钠)溶于950mL的ddH2O中充分溶解，然后定容至1000mL，37℃孵育5min。3、DNA萃取液配制称取0.6041g的LiCl(氯化锂)溶于950mL的ddH2O中充分溶解，然后定容至1000mL。4、DNA提取操作步骤①取10-30mg肌肉组织于1.5mL的离心管中，用眼科剪充分剪碎。②向离心管中加入200μL的细胞裂解液，轻轻晃荡使组织样品完全浸泡在裂解液中。③向离心管中加入20μL的蛋白酶K，用枪头充分吹打，旋涡振荡器振荡20s，简短离心(4000-5000rpm离心5s)。④55℃水浴10min。⑤向离心管中加入100μL的LiCl，旋涡振荡器振荡10s，简短离心(4000-5000rpm离心10s)，立即冰浴10min。⑥13400rpm离心10min，将上清液转移至洁净的离心管中，弃沉淀。⑥向上清液中加入400μL预先冷冻过的无水乙醇(在-20℃冰箱放置30min以上即可)，轻轻上下颠倒摇晃，室温静置10min沉淀DNA。⑦13400rpm离心10min，弃上清，用相同体积(400μL)70％或75％乙醇洗涤一次。⑧重复第7步。⑨弃上清，此时可能会有白色沉淀，若看不到也不影响后续实验，在滤纸上倒置离心管20min，使管内液体与酒精完全去除；或直接置于42℃烘箱烘干10min。⑩加入30-50μL的TE溶解DNA。1.0％琼脂糖凝胶检测DNA(图1)。本专利技术的实施例2：提取动物基因组DNA的方法，包括如下步骤：1、实验样品采集采取带毛囊的毛发(高坡猪)于70％酒精中，由冰盒带回实验室置于-20℃冰箱保存。2、细胞裂解液配制细胞裂解液配制(现配现用)：配置1000mL细胞裂解液，分别称取3.770g的EDTA-Na2、1.5764g的Tris-HCl、0.5844g的NaC(氯化钠)l、2.884g的SDS(十二烷基硫酸钠)溶于950mL的ddH2O中充分溶解，然后定容至1000mL，37℃孵育5min。3、DNA萃取液配制称取0.6041g的LiCl(氯化锂)溶于950mL的ddH2O中充分溶解，然后定容至1000mL。4、DNA提取操作步骤①取5-8根毛发(带毛囊)，用剪刀剪去毛干部分，将毛囊置于1.5mL的离心管中。②向离心管中加入200μL的细胞裂解液，轻轻晃荡使组织样品完全浸泡在裂解液中。③向离心管中加入20μL的蛋白酶K，用枪头充分吹打，旋涡振荡器振荡20s，简短离心(4000-5000rpm离心5s)。④55℃水浴10min。⑤向离心管中加入100μL的LiCl，旋涡振荡器振荡10s，简短离心(4000-5000rpm离心10s)，立即冰浴10min。⑥13400rpm离心10min，将上清液转移至洁净的离心管中，弃沉淀。⑥向上清液中加入400μL预先冷冻过的无水乙醇(在-20℃冰箱放置30min以上即可)，轻轻上下颠倒摇晃，室温静置10min沉淀DNA。⑦13400rpm离心10min，弃上清，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提取动物基因组DNA的方法，其特征在于：包括如下步骤：1)样品采集：采集动物肌肉组织或毛囊，并放置在质量百分比为70％的酒精中，在‑20℃进行保存；2)细胞裂解液配制：细胞裂解液中，按浓度为3.770g/LEDTA‑Na2、1.5764g/L Tris‑HCl、0.5844g/L氯化钠、2.884g/L十二烷基硫酸钠，以ddH2O为溶剂进行配置，配置的溶液充分溶解后，在37℃孵育5min；3)DNA萃取液配制：称取0.6041g的氯化锂溶于950mL的ddH2O中充分溶解，然后定容至1000mL；4)DNA提取：a)取肌肉组织放置于的离心管中，并用充分剪碎；若是毛囊则取5‑8根带毛囊的毛发，用剪去毛干部分，将毛囊置于离心管中；b)向离心管中加入细胞裂解液，轻轻晃荡使组织样品完全浸泡在裂解液中；c)再向离心管中加入蛋白酶K，充分吹打后，振荡18‑22s，在4000‑5000rpm下离心3‑5s；d)之后将离心管在20‑60℃水浴10‑15min；e)向离心管中加入氯化锂，振荡10‑15s，在4000‑5000rpm离心下8‑10s，立即冰浴10‑15min；f)在转速为13000‑14000rpm离心10‑15min，将上清液转移至洁净的离心管中，弃沉淀；g)向上清液中加入预先冷冻过的无水乙醇，轻轻上下颠倒摇晃，室温静置10‑15min沉淀DNA。h)在转速为13000‑14000rpm离心10‑15min，弃上清，用相同体积的质量百分比为70％或75％乙醇洗涤一次；重复上述步骤；i)弃上清，在滤纸上倒置离心管20min，使管内液体与酒精完全去除；或直接置于40‑45℃烘箱烘干10min；j)加入TE或ddH2O溶解DNA，完成DNA的提取。...

【技术特征摘要】
1.一种提取动物基因组DNA的方法，其特征在于：包括如下步骤：1)样品采集：采集动物肌肉组织或毛囊，并放置在质量百分比为70％的酒精中，在-20℃进行保存；2)细胞裂解液配制：细胞裂解液中，按浓度为3.770g/LEDTA-Na2、1.5764g/L Tris-HCl、0.5844g/L氯化钠、2.884g/L十二烷基硫酸钠，以ddH2O为溶剂进行配置，配置的溶液充分溶解后，在37℃孵育5min；3)DNA萃取液配制：称取0.6041g的氯化锂溶于950mL的ddH2O中充分溶解，然后定容至1000mL；4)DNA提取：a)取肌肉组织放置于的离心管中，并用充分剪碎；若是毛囊则取5-8根带毛囊的毛发，用剪去毛干部分，将毛囊置于离心管中；b)向离心管中加入细胞裂解液，轻轻晃荡使组织样品完全浸泡在裂解液中；c)再向离心管中加入蛋白酶K，充分吹打后，振荡18-22s，在4000-5000rpm下离心3-5s；d)之后将离心管在20-60℃水...

【专利技术属性】
技术研发人员：李辉，赵忠海，张蓉，易恒洁，彭邦星，师新彩，卜小雁，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52