【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过微小RNA装置进行细菌介导的基因调节相关申请的交叉参考该申请要求2007年6月四日提交的美国临时专利申请系列号60/947，311的优 先权和权益，所述临时专利申请的内容完整引入作为参考。
技术介绍
尽管首先在秀丽新小杆线虫(Caenorhabditis elegans)中发现，但已经在植物和 包括人的动物中发现了微小RNA(miRNA)。miRNA由从DNA转录但不翻译成蛋白质的基因 (非蛋白质编码RNA)编码，已经发现其调节高于30%的哺乳动物基因。成熟的miRNA分子 与一个或多个信使RNA(mRNA)分子部分互补，并且相信其主要功能是调节基因表达。miRNA具有许多潜在的应用用于治疗目的，然而关键的障碍在于向靶细胞中递送 miRNA或其前体。需要新的方法向动物靶标施用安全并可预测的miRNA。专利技术概述本专利技术提供细菌介导的系统，用于通过细菌感染向靶细胞内引入miRNA。在一个实 施方案中，所述细菌含有编码miRNA的DNA，并在所述细菌中通过原核启动子，或在靶细胞 中使用真核启动子表达所述miRNA。在可选的实施方案中，所述细菌含有编码miRNA前体的...
【技术保护点】
１．至少编码微小ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）或ｍｉＲＮＡ前体的ＤＮＡ载体，其中所述ｍｉＲＮＡ能够调节真核、原核或病毒靶基因中至少一个的表达。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2007.06.29 US 60/947,3111.至少编码微小RNA(miRNA)或miRNA前体的DNA载体，其中所述miRNA能够调节真 核、原核或病毒靶基因中至少一个的表达。2.权利要求1的载体，其中所述miRNA前体是初级-miRNA。3.权利要求1的载体，其中所述miRNA前体是miRNA前体。4.权利要求1的载体，其中所述载体编码双链体miRNA，其中所述两条miRNA链包含基 本互补的区域。5.权利要求1的载体，其中所述miRNA是成熟的miRNA。6.权利要求1的载体，其还包含原核启动子。7.权利要求1的载体，其还包含真核启动子。8.权利要求1的载体，其中所述至少一个靶基因是癌相关基因。9.权利要求1的载体，其还编码Hly基因。10.细菌，其包含微小RNA(miRNA)、miRNA前体或至少编码所述miRNA或所述前体的 DNA分子，其中所述miRNA能够调节真核、原核或病毒靶基因中至少一个的表达。11.权利要求10的细菌，其中所述前体是miRNA前体。12.权利要求10的细菌，其中所述前体是初级-miRNA。13.权利要求10的细菌，其中所述细菌是活的侵入性细菌。14.权利要求10的细菌，其中所述细菌是活的侵入性细菌的衍生物。15.权利要求10的细菌，其中所述细菌是非致病性且无毒性的。16.权利要求10的细菌，其中所述细菌是选自利斯特氏菌、志贺氏菌、沙门氏菌、大肠 杆菌和双歧杆菌的减毒菌株。17.权利要求10的细菌，其中所述细菌选自耶尔森菌属物种、大肠杆菌属物种、克雷伯 氏菌属物种、博德特氏菌属物种、奈瑟氏球菌属物种、气单胞菌属物种、弗朗西丝氏菌属物 种、棒杆菌属物种、柠檬酸细菌属物种、衣原体属物种、嗜血菌属物种、布鲁氏菌属物种、分 枝杆菌属物种、军团杆菌属物种、红球菌属物种、假单胞菌属物种、缠绕杆菌属物种、沙门氏 菌属物种、弧菌属物种、芽孢杆菌属物种、利什曼虫属物种和丹毒丝菌属物种，所述细菌已 经经过遗传改造，以模拟志贺氏菌属物种、利斯特氏菌属物种、立克次体属物种和肠侵染性 大肠杆菌属物种的侵入性质。18.权利要求10的细菌，其还包含能够将所述前体加工成接近成熟miRNA的酶或核酶。19.权利要求18的细菌，其中所述酶是内切核酸酶。20.权利要求10的细菌，其还包含细菌核糖核酸酶III、切酶、切酶样酶、Drosha和 Pasha中的至少一种。21.权利要求10的细菌，其还包含酶，所述酶从所述细菌中释放到靶真核细胞的细胞 质后帮助转运遗传物质。22.权利要求21的细菌，其中所述酶是Hly蛋白质。23.权利要求10的细菌，其还包含控制所述DNA分子表达的原核启动子。24.权利要求23的细菌，其中所述启动子是T7启动子。25.权利要求10的细菌，其还包含控制所述DNA分子表达的真核启动子。26.权利要求10的细菌，其中所述DNA分子还编码Hly基因。27.权利要求10的细菌，其中所述真核基因是动物基因。28.权利要求10的细菌，其中所述真核基因是哺乳动物或鸟类基因。29.权利要求10的细菌，其中所述至...
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