本发明专利技术涉及包含至少一个染色质结合模块和至少一个报告模块的融合蛋白，其中多个融合蛋白能够形成斑；和用于鉴定布罗莫结构域抑制化合物的相关方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】 相关申请的交叉引用 本专利申请要求2013年3月15日提交的美国申请系列第61/798,644号和2013年11 月11日提交的美国申请系列第61/902,690号的优先权的权益，所述申请通过引用并入本 文。[000引背景 染色质是DNA与蛋白质的复杂组合。其在真核细胞的细胞核内被发现并且被分为 异染色质(凝聚的）和常染色质（展开的）形式。组蛋白是染色质的主要蛋白质组分，用作DNA 围其缠绕的线轴。染色质的功能是将DNA包装成更小的体积W容纳进细胞，增强DNAW使得 能够进行有丝分裂和减数分裂，W及用作控制表达和DNA复制的机构。染色质结构由一系列 对组蛋白尤其是组蛋白H3和H4的翻译后修饰（最常见地在延伸至核屯、核小体结构外部的 "组蛋白尾"内）控制。组蛋白尾易于释放出来参与蛋白质间相互作用，并且也是最易受到翻 译后修饰的组蛋白的部分。运些修饰包括乙酷化、甲基化、憐酸化、泛素化、SUMO化。运些表 观遗传标志物通过特殊酶书写和删除，所述酶将标签置于组蛋白尾内的特定残基上，从而 形成表观遗传密码，所述密码随后由细胞解释W允许染色质结构的基因特异性调控，并从 而允许转录。 在所有种类的蛋白质中，组蛋白是其中最易于受到翻译后修饰的。组蛋白修饰是 动态的，因为它们可响应于特定刺激而被添加或除去，并且运些修饰指导染色质的结构变 化和基因转录的变化。不同种类的酶，即组蛋白乙酷基转移酶(HAT)和组蛋白脱乙酷基酶 化DAC)，使特定的组蛋白赖氨酸残基乙酷化或去乙酷化(Str化1 K.，Genes Dev.，1989，12， 5,599-606)〇 组蛋白的共价修饰是基因表达的基本控制机制，和在真核细胞中起作用的主要表 观遗传机制之一化ouzarides,Cell ,128,693-705(2007))。因为不同的转录状态确定基本 细胞过程，诸如细胞类型规范、谱系定型、细胞活化和细胞死亡，所W它们的异常调控是一 系列疾病的核屯、（Medzhi to V等，Nat. Rev . Immunol. ,9,692-703(2009); Porte la等， Nat.Biotech. ,28,1057-1068(2010))。基因表达的表观遗传控制的基本组成部分是具有结 合于此类修饰的专口基序的蛋白质对组蛋白修饰的解释。其中，布罗莫结构域已演化来结 合于乙酷化组蛋白并且通过运样做，他们代表了染色质结构与基因转录之间的根本联系 (Fi 11 ipakoppou 1OS等，Ce 11，149，214-231 (2012))。 布罗莫结构域，其长度约为110个氨基酸，在大量染色质结合蛋白中均有发现，并 且已在约70种人蛋白质中被鉴定，通常与其它蛋白质基序相邻(Jea皿ougin F.等，Trends Biochem.Sci. ,1997,22,5,151-153;和 Tamkun J.W.等，Cell ,1992,7,3,561-572)。布罗莫 结构域与经修饰的组蛋白之间的相互作用可W是染色质结构变化和基因调控背后的重要 机制。含布罗莫结构域的蛋白质已牵设疾病过程包括癌症、炎症和病毒复制。参见，例如， Prinjha等，Trends 陆arm.Sci. ,33(3): 146-153(2012)和Muller等，Expert Rev. ,13(29): 1-20(2011年9月）。 细胞类型特异性和适当的组织功能性需要最终受它们的环境影响的不同转录程 序的严格控制。对该转录稳态的改变与许多疾病状态直接相关，最特别地是癌症、免疫炎 症、神经性障碍和代谢疾病。布罗莫结构域存在于用于控制独特的疾病相关转录途径的关 键染色质修饰复合物内。运通过含有布罗莫结构域的蛋白质中的突变与癌症W及免疫及神 经功能障碍相关的观察得W突显。因此，跨家族的布罗莫结构域的选择性抑制为作为人功 能障碍的新型治疗剂创造各种机会。 存在对癌症、免疫性病症和其它布罗莫结构域相关疾病的治疗的需要。运样，需要 用于鉴定为布罗莫结构域抑制化合物的化合物的方法。 本文中引用的所有参考资料，包括专利申请和出版物通过引用整体并入。[00川概述 本文中提供了包含至少一个染色质结合模块和至少一个报告模块的融合蛋白和 其使用方法。本专利技术的一个方面是包含至少一个染色质结合模块和至少一个报告模块的融 合蛋白，其中多个融合蛋白能够再定位和/或形成斑。 在任何融合蛋白的某些实施方案中，融合蛋白包含含有至少一个染色质结合模块 的第一染色质结合多肤，其中所述第一染色质结合多肤的染色质结合模块的至少一个已被 缺失、被第二染色质结合多肤的至少一个染色质结合模块取代和/或替代。在某些实施方案 中，融合蛋白包含含有至少一个染色质结合模块的第一染色质结合多肤，其中所述第一染 色质结合多肤的染色质结合模块的至少一个已被第二染色质结合多肤的至少一个布罗莫 结构域模块替代。 在任何融合蛋白的某些实施方案中，融合蛋白包含1、2、3、4、5和/或6个染色质结 合模块中的约任一个。 在任何融合蛋白的某些实施方案中，所述报告模块是巧光报告模块。在某些实施 方案中，所述报告模块包括EGFP、TurboGFP、dsRed2、dsRed-Express2或ZsGreen。 在任何融合蛋白的某些实施方案中，所述融合蛋白包含核定位信号(NLS)。在某些 实施方案中，所述化S是SV40大T-抗原化S或核浆素的化S。 在任何融合蛋白的某些实施方案中，所述染色质结合模块位于报告模块的5'。在 任何融合蛋白的某些实施方案中，所述染色质结合模块位于报告模块的3'。 在任何融合蛋白的某些实施方案中，所述染色质结合模块是布罗莫结构域模块， P皿指模块、染色质域模块、MBT结构域模块、tudor结构域模块、PWWP结构域模块、A孤结构域 模块、Zf-CW结构域模块、错蛋白重复模块或WD40模块。在某些实施方案中，所述染色质结合 模块是布罗莫结构域模块。 在任何融合蛋白的某些实施方案中，所述至少一个布罗莫结构域模块包含BRG1、 PCAF/KAT2B、BAZ2B、B畑1、B畑8、BRFP1、BRFP3、BRG1、CBP/CREBBP、PCAF/KAT2B、TRIM24和/或 ZMYND8的任一个的至少一个布罗莫结构域。在某些实施方案中，所述至少一个布罗莫结构 域模块包含B畑2、B畑3、B畑4、BRD9、B畑T和/或BRG1的任一个的至少一个布罗莫结构域。在 某些实施方案中，所述至少一个布罗莫结构域模块包含81?61、81?^1八60?2、？〔4。和/或了八尸1 的任一个的至少一个布罗莫结构域。在某些实施方案中，所述至少一个布罗莫结构域模块 包含BRD4和/或BRD9的至少一个布罗莫结构域。 在任何融合蛋白的某些实施方案中，所述布罗莫结构域多肤包含BRGUPCAF/ ZMYND8的任一个或包含至少一个布罗莫结构域模块的其片段的氨基酸序列。在某些实施方 案中，布罗莫结构域多肤包含BRD2、B畑3、BRD4、B畑9、BRDT和/或服G1的任一个或包含至少 一个布罗莫结构域模块的其片段的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述布罗莫结构域多 肤包含81?61、81?^1^60?2、？〔4。和/或了4。1的任一个或包含至少一个布本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种融合蛋白，其包含至少一个染色质结合模块和至少一个报告模块，其中多个融合蛋白能够形成斑。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄宏仁，罗伯特·J·西姆斯三世，S·F·贝洛，
申请(专利权)人：星座制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。