基于鞭毛蛋白的新型免疫佐剂化合物及其用途制造技术

本发明专利技术涉及衍自来源于肠道沙门氏菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌｅ　ｅｎｔｅｒｉｃａ）的鞭毛蛋白、显示体内免疫佐剂活性的新型肽化合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及在个人或动物中诱导和/或刺激免疫应答。具体地讲，本专利技术涉及可用于免疫原性组合物和疫苗组合物的新型免疫佐剂化合物。
技术介绍
安全且有效的疫苗的开发仍是全球公共卫生的一个主要目标。具体地讲，已出现被称为“粘膜疫苗”的疫苗，作为可注射疫苗的吸引人的潜在替代品。粘膜给药具有许多潜在地合乎需要的特征。开发粘膜疫苗递送技术的最迫切的理由也许是，通过在许多侵入性病原体的粘膜进入部位产生局部免疫来形成免疫防御的第一道防线。此外，一些研究者已报道存在着普通粘膜免疫系统，凭借该系统，在一个部位诱导的粘膜免疫能导致在远端粘膜部位的免疫(Mciihee，J.R.等人.The mucosal immune system from fundamental concepts tovaccine development (粘膜免疫系统从基石出概念到疫苗开发)· Vaccinel992,10 :75-88)。另外，通过粘膜部位递送抗原具有还能产生全身免疫应答的潜力。这表明，通过以非侵入性方式(例如鼻内途径或其他粘膜途径)递送疫苗，以引发针对可能在不同粘膜部位进入的各种各样的病原体的免疫，可获得极大的益处。现今的疫苗(粘膜疫苗或其他疫苗)大部分是由以下两个主要组分组成的(i) 具有治疗意义的靶标抗原和(ii)能刺激和/或诱导针对所述抗原的免疫原性的免疫佐剂化合物。已知的各种免疫佐剂在性质上相差甚大，但具体地讲包含矿物油、细菌提取物、活的和减毒的生物体以及氢氧化铝金属的悬浮液。即使佐剂能提供增强的免疫应答，但它们的使用也会引起不良副作用，这主要取决于它们的给予途径。因此，得到批准且在人类中有效的佐剂的数目仍相对有限。先天性免疫领域的进展已使人们更好地了解支配着宿主免疫应答的调节的细胞机制和分子机制。这一对免疫系统的更好的认识，已让人们能研究和开发新的潜在有用的免疫佐剂。具体地讲，toll样受体(TLR)有助于哺乳动物体内的先天性免疫和适应性免疫的协同诱导。由于TLR是由多种多样的细胞类型表达的，因此它们能够在全身引发免疫。发生病原微生物感染后，TLR可识别被称为微生物相关分子模式(MAMP)的保守模体。TLR的结合可诱导专事于对病原微生物的先天性清除和获得性免疫的基因表达程序。 例如，TLR可诱导趋化因子的产生，趋化因子进而特异性吸引直接参与先天性微生物清除的多形核嗜中性粒细胞(PMN)。此外，TLR能促进多效性免疫介质(如TNFq)的分泌和专事于将抗原呈递到淋巴细胞的树突细胞(DC)的功能性成熟。因此，TLR激动剂不仅能刺激“广泛特异性的”促炎免疫应答，而且能增强对限定的抗原的适应性免疫应答，因此被认为是免疫佐剂。尽管这些潜在有利的作用，但由于MAMP有全身毒性，这促使了人们努力开发能使 MAMP活性偏向于佐剂作用的衍生物。的确，将分子工程改造成具有独特的性质，这是操纵免疫应答中的一个重大挑战。细菌鞭毛蛋白(许多细菌病原体中的主要鞭毛成分)是用于TLR5活化的特异性、 独特激动剂。来自鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella enterica Serovar Typhimurium, (S. Typhimurium))的FliC鞭毛蛋白是有关鞭毛结构-功能、免疫性和TLR5信号转导的研究的典范。它是具有两个独特结构域的含494个氨基酸的蛋白质。氨基和羧基末端“保守”区域形成对于TLR5活化必不可少的结构域。鞭毛蛋白FliC的中间结构域包含对于TLR5信号转导非必须的氨基酸。它被称为 “超可变”区，因为一级序列在组成和大小上随细菌种类的不同而大大不同。与此相对，已知超可变区为鞭毛蛋白抗原性所必需。已证实静脉内(i. V.)注射鞭毛蛋白能促进全身应答，全身应答由促炎介质(如 TNF α或IL-6)的产生和DC活化来表征。此外，鞭毛蛋白还能引发粘膜特异性的先天性和适应性防御机制。例如，上皮细胞系和肺粘膜能上调趋化因子样CXCL8(IL-8)和CCL20的产生，CXCL8 (IL-8)和CCL20进而分别募集粘膜PMN和DC。不同的作者还报道了鞭毛蛋白是强效的全身和粘膜免疫佐剂，其能引起(i)血清和/或分泌性抗体应答和(ii)对鞭毛蛋白本身和共给予的抗原的Thl和Th2细胞应答。由于鞭毛蛋白的强效的全身和粘膜免疫佐剂活性，它们对于疫苗尤其是粘膜疫苗类型的开发来说可特别值得关注。但是，大多数的所述鞭毛蛋白型佐剂不完全适合于这种疫苗应用，特别是适合于所述粘膜疫苗策略。的确，已知的鞭毛蛋白佐剂呈现重大的副作用，具体而言是当体内给予时，呈现固有的抗原活性和全身促炎性质。此外，大多数的已知的鞭毛蛋白型免疫佐剂需要与靶标抗原物理连接，以便当体内给予时能引起强效的免疫应答。这个要求迫使需要额外的复杂操作以便获得合适的鞭毛蛋白抗原连接和最终的有用的免疫原性物质。因此，需要这样的新的化合物，它们可用作免疫佐剂，特别是用于诱导和/或增强对抗原的粘膜免疫应答，引人注目的是又不会引起任何重大的全身炎症副作用。有利地，这些新的化合物还应能够简单地与靶标抗原混合就能引发免疫应答。本专利技术于是提出能满足这个需要且尤其可用于生产免疫原性组合物和疫苗(特别是粘膜型疫苗)的新的免疫佐剂化合物。专利技术_既述根据本专利技术，已发现了衍自来源于SEQ ID N° 1类型的鼠伤寒沙门氏菌的鞭毛蛋白的新型肽化合物呈现出体内免疫佐剂活性，这在本文的实施例中进行说明。根据本专利技术，还证实这些新型佐剂化合物尤其呈现出粘膜佐剂性质，而又不会造成显著的全身促炎作用。本专利技术的所述新的衍自鞭毛蛋白的化合物因此尤其可用作免疫佐剂物质，有利地用以诱导和/或增强粘膜免疫应答。本专利技术因此涉及这样的免疫佐剂化合物，其包含a)与起始于位于SEQ ID N0 1的位置1的氨基酸残基、终止于选自位于SEQ ID N0 1的位置99至173的氨基酸残基中的任何一个的氨基酸残基的氨基酸序列具有至少 90%氨基酸同一性的N末端肽；和b)与起始于选自位于SEQ ID N。1的位置401至406的氨基酸残基中的任何一个的氨基酸残基、终止于SEQ ID N0 1的位置494的氨基酸残基的氨基酸序列具有至少90% 氨基酸同一性的C末端肽，其中-所述N末端肽和C末端肽直接互相连接，或者-所述N末端肽和C末端肽通过间隔链间接互相连接。本专利技术的免疫佐剂化合物的优选实施方案在下文的描述中进行详细说明。本专利技术还涉及包含上文中(或者下文的描述中)所定义的免疫佐剂化合物以及一种或多种药物可接受的赋形剂的药物组合物。根据本专利技术的药物组合物包含上文中所定义的免疫佐剂化合物以及一种或多种抗原。所述药物组合物因此有利地为免疫原性组合物(即旨在引起针对抗原的免疫应答以(例如)产生抗体的组合物)或者疫苗组合物(即旨在在受试者或动物中引起免疫应答以治疗或预防疾病的组合物)。根据本专利技术的一个优选实施方案，所述免疫原性组合物或所述疫苗有利地包含不与所述一种或多种抗原共价连接的本专利技术所述免疫佐剂化合物。本专利技术还涉及供用作药物的上文中所定义的免疫佐剂化合物(特别是用以诱导和/或增强粘膜佐剂活性)。本专利技术还涉及本专利技术的免疫佐剂化合物用于制造这样的药物组合物的用途，该药物组合物尤其用于引起和/或增强针对鞭毛蛋白之外的一种或多种的抗原的免疫应答(尤其是在通本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种免疫佐剂化合物，所述免疫佐剂化合物包含：ａ）与起始于位于ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎ°１的位置１的氨基酸残基、终止于选自位于ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎ°１的位置９９至１７３的氨基酸残基中的任何一个的氨基酸残基的氨基酸序列具有至少９０％氨基酸同一性的Ｎ末端肽；和ｂ）与起始于选自位于ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎ°１的位置４０１至４０６的氨基酸残基中的任何一个的氨基酸残基、终止于ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎ°１的位置４９４的氨基酸残基的氨基酸序列具有至少９０％氨基酸同一性的Ｃ末端肽，其中：－所述Ｎ末端肽直接连接到所述Ｃ末端肽，或者－所述Ｎ末端肽和所述Ｃ末端肽通过间隔链间接互相连接。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：JC·西拉，
申请(专利权)人：法国国家健康和医学研究所，
类型：发明
国别省市：FR