本发明专利技术涉及用于制备包含具有受控量的表面偶联的蛋白质或蛋白质化合物的活或死细菌的药物的组合物和制备该组合物的方法。所述的细菌提供了可以用于制备通过粘膜递送的疫苗或药物的多价异源蛋白展示载体。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含展示异源蛋白质化合物的细菌细胞的药物组合物 专利技术背景近年来，粘膜疫苗接种已经受到了越来越多的关注，因为i)对 免疫系统机制的新认识；ii)模拟大部分病原体感染途径的原理，而 且还因为iii)对易于给药和对新的和新出现的疾病有效的疫苗的需 求。此外，全球生物恐怖的威胁要求有效的疫苗，它们易于生产并且 在无受过训练的人员的情况下能够快速给药。粘膜免疫系统对获得有效的免疫反应而言表现理想，因为在粘膜 的一个部位上诱导可以在整个免疫系统中产生特异性反应。在粘膜部 位上诱导通常还可以产生全身免疫反应(Huang J.等，2004 Vaccine 6:794-801 ; Verdonck F.等，2004 Vaccine 31-32:4291-9)。大部 分病原体通过粘膜表面感染其宿主。这一事实使得可以有利地产生在 该感染途径早期阶段发挥其作用的疫苗。因此，尝试集中在研发能够^ 、在近几^年中，已经在使用重组微生物表^展示异源蛋白质的方 法的研发中取得了显著进展。已经使用重组DNA技术(Grangette C. 等2004 Infect Imnrnn. 5: 2731-7)在减毒的致病菌诸如沙门氏菌属 (Arnold H.等2004 Infect Immun. 11: 6546-53)和非致病菌诸如葡萄 球菌属(Wernerus H.等2002 Biotechnol J. 1: 67-78)或乳杆菌属中 证实了异源蛋白质的表面展示。异源蛋白质由重组细胞产生，由此使 该蛋白质定向于细胞表面。已经描述了几种表面锚定微生物中分泌的 蛋白质的方法。在葡萄球菌属中证实的一种手段在于将一段锚定细胞 壁的氨基酸导入分泌的蛋白质。嵌合蛋白在其分泌过程中整合入细胞 壁，在那里它通过锚定氨基酸片段与细胞壁结合(Wernerus H.等2002 Biotechnol J. 1: 67-78)。在可选择的手段中，通过细胞裂解产生的 细菌空胞用作活性物质诸如抗体或治疗有效多肽类的载体或耙向载体 (CA 2, 370, 714)。诱导包含裂解基因例如噬菌体基因E的合适的菌林 进行细胞裂解以便形成空胞。然后将所需的活性物质转入空胞，在其 中它可以被固定在细胞膜内表面上。在这种情况中，活性物质包囊在 细胞空胞的内部而非暴露在细胞表面上。几篇公开文献中描述了使用活细菌的表面展示特性用于疫苗递送 技术的显著生物学潜能(Wernerus H.等2004 Biotechnol Appl Biochem. 40 (3): 209-28)。然而，这些手段依赖于重组微生物，其中 使用和释放遗传修饰的生物体的风险和总体反对已经成为将这种活疫 苗递送技术应用于人和动物的障碍。另外，认为包含重组DNA的灭活 细菌也具有风险，因为它们携带最终可能在环境中播散的重组DNA。 在某些情况下，例如在生物恐怖分子袭击时，可以将基于GMO的技术 的应用视为可接受的风险。对提供不依赖于遗传修饰的菌株的抗原展示载体而言几乎没有进 行尝试。美国专利申请US 2003/0180816 Al中披露了用于从对与AcmA 细胞壁结合结构域融合的蛋白具有改进的结合能力的非-GM革兰氏阳 性菌中获得细胞壁物质的方法(W099/25836)。按照披露的方法，用酸 性溶液处理革兰氏阳性菌以便除去细胞壁成分，包括蛋白质、脂磷壁 酸和碳水化合物。所得细胞壁物质由此大量脱去了天然蛋白，但仍然 保留了对外部环境的屏障，并且命名为空胞。包含AcmA结构域蛋白的 嵌合蛋白可以以非共价方式与这些空胞结合。需要改进的抗原和变应原呈递方式满足为患有变态反应的患者和 那些患有感染性疾病的患者提供治疗而设计的疫苗接种程序的需要。 疫苗接种的构思基于免疫系统的两种基本特征，即特异性和记忆力。 疫苗接种使接受者的免疫系统致敏，并且在反复接触类似蛋白时，免 疫系统将处于对例如微生物感染的攻击起更剧烈的反应的状态。疫苗 为旨在在目的在于在接受者中产生这类保护性免疫反应的疫苗接种中 使用的蛋白质的混合物。这种保护将仅包含存在于疫苗和同源性抗原 中的成分。与其它类型的疫苗接种相比，变态反应疫苗接种因在过敏患者中 存在进行中的免疫反应而复杂化。这种免疫反应的特征在于存在接触变应原时介导过敏性症状释放的变应原特异性IgE。因此，使用来自 天然来源的变应原的变态反应疫苗接种存在内在副作用的风险，其对 患者而言最产重的后果是威胁生命。可以将防止发生这一问题的手段分成三类。实践中，通常合并来 自一类以上的措施。第一类措施包括在延长时间期限内给予几个小剂 量以便达到实质性的累积剂量。第二类措施包括通过将变应原引入凝 胶物质诸如氢氧化铝对变应原进行物理修饰。氢氧化铝制剂具有佐剂 作用和緩慢变应原释放的长效作用，从而降低活性变应原成分的组织 浓度。第三类措施包括对变应原进行化学修饰，目的在于减少变应原 性，即IgE结合。常规的特异性变态反应疫苗接种为过敏性疾病的病因治疗。它可 以干扰基本的免疫机制，从而对患者的免疫状态产生持续的改善。因 此，特异性变态反应疫苗接种的保护作用可以延长超过治疗期限，这 与症状性的药物治疗形成对比。某些接受这种治疗的患者得到治愈， 且此外，大部分患者经历了所发生疾病严重程度和症状的緩解，或至 少使疾病恶化得以抑制。因此，特异性变态反应疫苗接种在降低花粉 热发展成哮喘的风险和降低发生新的易感性的风险中具有预防作用。成功变态反应疫苗接种潜在的免疫学机理尚未得到详细了解。特 异性免疫反应，诸如产生针对特定病原体的抗体，称作适应性免疫反 应。该反应可以区分于对病原体而言为非特异性反应的先天性免疫反 应。变态反应疫苗旨在针对适应性免疫反应，包括具有抗原特异性的 细胞和分子，诸如T-细胞和产生抗体的B-细胞。B-细胞在无来自具有 相应特异性的T-细胞辅助下不能发育成熟为产生抗体的细胞。参与刺 激过敏性免疫反应的T-细胞主要为Th2类型。已经提出在Thl与Th2 细胞之间建立新的平衡对特异性变态反应疫苗接种的免疫学机理而言 是有益的和关键的。这是因Th2细胞减少，从Th2转移至Thl细胞， 还是Thl细胞的增量调节引起是有争论的。近来，已经提出调节T-细 胞对变态反应疫苗接种机理而言是重要的。根据这一模型，调节T-细 胞，即Th3或Trl细胞，减量调节具有相应抗原特异性的Thl和Th2 细胞。尽管存在这些不明确的情况，但是一般认为活性疫苗必需具有 刺激变应原特异性T-细胞优选TH1细胞的能力。尽管其存在优点，但是特异性变态反应疫苗接种并未广泛应用， 主要是两个原因。 一个原因在于与包含在几个月内反复疫苗接种尤其 是注射的传统疫苗接种程序相关的不便利性。更重要的是，另一个原 因在于过敏性副反应的风险。使用单一或几次高剂量免疫接种可有效 进行对感染因子的普通疫苗接种。然而，这一策略不能用于变态反应 疫苗接种，因为已经发生了病理性免疫反应。特异性变态反应疫苗接种。将该过程分成两个阶段，增加剂量期和维 持期。在增加剂量期中，从最小剂量开始通常在16-周期限内施用增 加的剂量。当达到推荐的维持剂量时，将该剂量施用维持期， 一般每 6周进行一次注射。在每次注射后，患者必须处于医疗护理下保持30 分钟，因为存在过敏性副反本文档来自技高网...
【技术保护点】
用作包含表面展示一种或多种异源蛋白质化合物的生物载体的药物的药物组合物，包括： ａ．一种或多种非致病菌株的细胞；和 ｂ．通过双官能交联剂与所述细胞表面上的易接近的化学实体结合的一种或多种蛋白质化合物； 其中所述的细胞不包含编码所述一种或多种蛋白质化合物的转基因核酸分子，并且所述的双官能交联剂与所述细胞的氨基通过希夫碱共价键合，且 所述的蛋白质化合物和所述的交联剂对所述细胞而言为异源来源的。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：J格伦廷，F约恩森，SM马德森，H伊斯拉埃尔森，
申请(专利权)人：阿尔克阿贝洛有限公司，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]
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