本发明专利技术涉及肿瘤的细胞免疫治疗，特别涉及一种嵌合抗原受体hCD87-CAR及载有该基因结构的慢病毒及质粒及其应用。在嵌合抗原受体hCD87-CAR基因结构中，所述嵌合抗原受体hCD87表达为hCD87scFv；所述hCD87scFv包括或选自下述scFv:(a)包括SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的scFv；(b)与(a)所示的scFv具有相同功能；(c)与(a)所示的氨基酸序列具有至少90％的一致性的scFv。所述hCD87-CAR用于修饰T淋巴细胞，修饰后的T细胞(CAR-T细胞)能用于细胞膜表面CD87阳性的肿瘤的治疗。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及肿瘤的细胞免疫治疗，特别设及一种嵌合抗原受体hCD87-CAR及载有 该基因结构的慢病毒及质粒及其应用。
技术介绍
垂体腺瘤是临床上常见的烦内良性肿瘤之一，在烦内肿瘤发病中占10% -15%。 近年来，垂体瘤的发生率呈不断上升的趋势，垂体瘤通常发生于青壮年时期。无激素分泌异 常的垂体腺瘤（non-化nctionp;Uuitaryadenoma,NFPA)往往局部占位症状重，常导致失 明等症状。垂体瘤分泌激素亢进，可导致患者催乳素（prolactin,P化)，促肾上腺皮质激素 (a化enocorticotropichormone,ACTH)等激素水平的增高，从而引起患者满月脸、向屯、性 肥胖、瘦疮、毛发增多、高血压、继发性糖尿病和骨质疏松等症状，特别对于女性患者，可导 致流产不孕，月经失调，未孕泌乳等后果，对患者及其家庭带来极大伤害。 对于垂体腺瘤患者，像其它肿瘤患者一样，临床上发现时，患者体内肿瘤细胞已占 优势，机体的抗肿瘤免疫功能已失去平衡。在运样的免疫系统微环境下，专职抗原提呈细 胞-树突状细胞的功能往往受到不同程度的损害，造成抗原提呈激活T细胞的效率降低，导 致攻击肿瘤细胞能力不够，祀向性也不够精准；并且，肿瘤细胞通过低表达或不表达MHC基 因的分子逃逸机制，能够逃脱免疫细胞的攻击。运就需要一种在抗肿瘤作用中，不仅能够克 服MHC介导的细胞免疫机制缺损，同时具备较强特异性杀伤能力并能够对肿瘤细胞具有精 准祀向性的免疫疗法。于是，通过嵌合抗原受体设计的细胞免疫疗法CAR-T应运而生。CAR-T细胞疗法通过外源基因转导技术，把识别肿瘤相关特异性抗原的单链抗体 片段（single-chainantibodyfragment,scFv)和T细胞活化序列的融合蛋白表达到T 细胞表面，运样scFv通过跨膜区与T细胞胞内的活化增殖信号域偶联，经回输患者体内后 大量扩增，能够W非MHC限制性的模式表现出较强的抗肿瘤作用。
技术实现思路
为了治疗垂体无功能腺瘤、垂体泌乳素腺瘤、垂体促肾上腺激素腺瘤，本专利技术提供 。 本专利技术利用基因工程获得编码嵌合抗原受体hCD87-CAR的融合基因，将该基因片 段插入慢病毒表达载体，包装成慢病毒，感染人T细胞，使T细胞表达该嵌合抗原受体的 hCD87scFv。运种嵌合hCD87scFv的T细胞能够识别肿瘤表面的抗原受体hCD87,特异性杀 伤hCD87阳性的肿瘤细胞，用于肿瘤的治疗。 在垂体腺瘤细胞膜表面hCD87基因抗原高表达，而人类各正常组织中基因表达谱 数据集GSE3526，GSE7307W及TCGA数据库中癌旁组织数据分析则表示，hCD87抗原基因在 各正常组织中表达水平极低，几乎与基因忍片背景信号一致运也说明hCD87抗原在垂体腺 瘤中具有较好的表达特异性。 本申请采用下述技术方案： 本专利技术提供一种嵌合抗原受体hCD87-CAR基因结构，所述嵌合抗原受体hCD87表 达为hCD87scFv;所述hCD87scFv包括或选自下述scFv: (a)包括沈QIDNO. 1和沈QIDNO. 2所示氨基酸序列的scFv; (b)与（a)所示的scFv具有相同功能；[001引（C)与（a)所示的氨基酸序列具有至少90%的一致性的scFv。hCD87scFv是抗人CD87单克隆抗体片段。 所述嵌合抗原受体hCD87-CAR基因结构可简称为hCD87-CAR基因结构。 所述hCD87-CAR基因结构用于修饰T细胞，使T细胞表达该嵌合抗原受体的 hCD87scFv。 本专利技术还提供一种核酸序列，所述核酸用于编码上述的hCD87scFv。 进一步的，所述嵌合抗原受体hCD87-CAR基因结构，其中，所述hCD87scFv包括轻 链可变区和重链可变区；所述重链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQIDNO. 1所示，所述 轻链可变区的氨基酸序列如序列表中的SEQIDNO. 2所示。 上述hCD87scFv可通过CAR结构在T细胞表面表达，将T细胞导至肿瘤细胞。CAR 结构是用于保证T细胞在体内存活和增殖的基因。CAR结构用于激活T细胞，使T细胞增殖 的同时，特异性结合并杀伤肿瘤细胞。CAR结构还可使T细胞产生记忆，便于清除W后产生 的肿瘤细胞。 将hCD87scFv进行密码子优化，优化后的基因片段，插入到合成慢病毒表达载体 的骨架质粒中，构成hCD87scFv表达质粒，利用慢病毒的包装质粒将该骨架质粒在293T细 胞中包装，构建完整的含有hCD87-CAR的慢病毒载体，感染T细胞，使T细胞表达该嵌合抗 原受体hCD87的scFv。 进一步的，所述重链可变区的核酸序列如序列表中的SEQIDNO. 3所示。 进一步的，所述轻链可变区的核酸序列如序列表中的SEQIDNO. 4所示。 进一步的，在嵌合抗原受体hCD87-CAR基因结构中，所述结构由所述的嵌合抗原 受体hCD87scFv和CAR结构串联而成。 进一步的，所述CAR结构包括CD8a较链区、CD28、4-1BB、CD3z、和IL12,所述CD8a 较链区的氨基酸序列如序列表中的SEQIDNO. 5所示。 进一步的，所述CAR结构包括CD8a较链区、CD28、4-1BB、CD3z、和IL12,所述CD8a 较链区的核酸序列如序列表中的SEQIDNO. 6所示。进一步的，所述hCD87scFv的氨基末端含有一个CD8a信号肤，所述CD8a信号肤的 氨基酸序列如序列表中的SEQIDNO. 7所示。 进一步的，所述hCD87scFv的氨基末端含有一个CD8a信号肤，所述CD8a信号肤的 核酸序列如序列表中的SEQIDNO. 8所示。 进一步的，在hCD87scFv中，所述重链可变区和轻链可变区之间有连接肤。 进一步的，在hCD87scFv中，所述重链可变区和轻链可变区之间的连接肤的氨基 酸序列如序列表中的SEQIDNO. 9所示。 进一步的，在hCD87scFv中，所述重链可变区和轻链可变区之间的连接肤的核酸 序列如序列表中的SEQIDNO. 10所示。 进一步的，所述CAR结构中，所述IL12的核酸序列及连接序列如序列表中的SEQ IDNO. 13 所示。 进一步的，所述hCD87-CAR基因结构由CD8a信号肤、hCD87scFv的重链可变区、 连接肤、hCD87scFv的轻链可变区、连接肤、CD8a较链区、CD28、4-1BB、CD3z、连接肤、和 IL12(白介素）串联而成。[003引进一步的，所述hCD87-CAR的氨基酸序列如序列表中的SEQIDNO. 11所示。[003引进一步的，所述hCD87-CAR的核酸序列如序列表中的SEQIDNO. 12所示。 本专利技术还提供一种质粒，所述质粒载有所述的hCD87-CAR基因结构。 本专利技术还提供一种慢病毒，所述慢病毒载有所述的hCD87-CAR基因结构。 进一步的，所述的hCD87-CAR在制备hCD87-CAR-T细胞中的应用，及hCD87-CAR在 肿瘤治疗药物中的应用。 用所述hCD87-CAR结构基因修饰后的T细胞，在hCD87scFv将T细胞导至肿瘤细 胞后，T细胞活化、增殖，特异性结合并杀伤肿瘤细胞，并产生白介素12(Interleukin12， I本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种嵌合抗原受体hCD87‑CAR基因结构，其特征在于，所述嵌合抗原受体hCD87表达为hCD87scFv；所述hCD87scFv包括或选自下述scFv:(a)包括SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的scFv；(b)与(a)所示的scFv具有相同功能的scFv；(c)与(a)所示的氨基酸序列具有至少90％的一致性的scFv。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王任直，任远，冯铭，
申请(专利权)人：王任直，任远，冯铭，
类型：发明
国别省市：北京;11
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