具有多能性(pluripotency)的干细胞的培养方法技术

技术编号:12293991 阅读:50 留言:0更新日期:2015-11-11 06:20
提供一种可以除去在具有多能性的干细胞的培养中的集落中产生的脱离未分化状态的细胞的方法。在一实施方式中涉及一种具有多能性的干细胞的培养方法,其包括在可阻碍细胞间粘接的物质的存在下进行细胞培养。在其它实施方式中涉及一种除去在具有多能性的干细胞的培养中产生的或可产生的脱离未分化状态的细胞的方法,其包括在可阻碍细胞间粘接的物质的存在下进行细胞培养。在其它实施方式中涉及一种维持具有多能性的干细胞的未分化状态的方法,其包括在可阻碍细胞间粘接的物质的存在下进行细胞培养。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及一种具有多能性的干细胞的培养方法、除去在具有多能性的干细胞的 培养中产生的或可产生的脱离未分化状态的细胞的方法、维持具有多能性的干细胞的未分 化状态的方法、这些方法中使用的组合物、及这些方法中使用的试剂盒。
技术介绍
在大量培养人iPS细胞等多能性干细胞时,通过一系列的扩增培养(继代培养) 的重复制备许多未分化的细胞。已知有在该一系列的培养中,从未分化状态脱离的细胞"脱 未分化细胞"偶发地产生。 已知有该脱未分化细胞具有与未分化细胞大致同等分裂能力,且诱发从未分化细 胞向脱未分化细胞的转换。即,脱未分化细胞产生时,其增殖速度超过未分化细胞的增殖速 度,未分化细胞的增殖得到抑制。 脱未分化细胞的产生在不熟练的培养操作者的培养中较多地观察到。另外,已知 有集落尺寸的过大或集落彼此的合并成为产生的一个原因。因此,通过低汇合下的继代、维 持播种时的均匀性,可以某种程度上降低脱未分化细胞的产生频率。另外,利用近年来所开 发的培养基,也某种程度上抑制脱未分化细胞的产生频率。但是,尽管如此,脱未分化细胞 偶发地产生,在产生的情况下,除去含有脱未分化细胞的集落还是必须的。 为了维持未分化状态,含有脱未分化细胞的集落在继代时通过显微镜下的吸量管 操作而慎重地被除去。模仿有这种集落除去的方法的装置、例如组合有利用观察装置和机 器人操作的吸量管的装置也被开发。 另外,在专利文献1中,公开有:为了一边维持iPS细胞等多能性干细胞的未分化 一边增殖,在活化素存在下将多能性干进行细胞培养。 现有技术文献 专利文献 专利文献1 :日本特开2012-143229号公报
技术实现思路
专利技术所要解决的课题 如上所述,在人iPS细胞等多能性干细胞的继代培养中,容易引起脱未分化现象, 未分化维持困难,在数次的继代后,许多iPS细胞集落引起脱未分化现象,可以成为含有脱 离未分化状态的细胞的劣化集落。因此,慎重的培养及慎重的集落的挑选这样的繁琐的操 作不可缺少。从促进干细胞产业的方面考虑点,也期望繁琐的操作少、即使没有熟练者也可 以的、多能性干细胞的未分化维持方法。 本公开在一实施方式中,提供一种可以除去在具有多能性("pluripotency"、以下 同样)的干细胞的培养中的集落中产生的"脱离未分化状态的细胞"的方法。 用于解决课题的手段 本公开在一实施方式中涉及一种具有多能性的干细胞的培养方法,其包括在可阻 碍细胞间粘接的物质的存在下进行细胞培养。本公开在其它实施方式中涉及一种除去在 具有多能性的干细胞的培养中产生的或可产生的脱离未分化状态的细胞的方法,其包括在 可阻碍细胞间粘接的物质的存在下进行细胞培养。本公开在其它实施方式中涉及一种维持 具有多能性的干细胞的未分化状态的方法,其包括在可阻碍细胞间粘接的物质的存在下进 行细胞培养。本公开在其它实施方式中涉及一种用于在本公开中所述的上述的方法中使用 的、含有可阻碍细胞间粘接的物质的组合物。本公开在其它实施方式中涉及一种含有具有 多能性的干细胞用的培养基成分和可阻碍细胞间粘接的物质的试剂盒。 专利技术效果 根据本公开,在一实施方式中,能够起到可以除去在具有多能性的干细胞的培养 中的集落产生的"脱离未分化状态的细胞"的效果。【附图说明】图1是说明本公开的一实施方式中的、在具有多能性的干细胞的培养中的集落产 生的"脱离未分化状态的细胞"通过可阻碍细胞间粘接的物质的添加而被除去的情形的图。图2是说明本公开的一实施方式中的、在具有多能性的干细胞的培养中的集落产 生的"脱离未分化状态的细胞"通过可阻碍细胞间粘接的物质的添加而被除去的情形的图。图3是说明本公开的一实施方式中的、在具有多能性的干细胞的培养中的集落产 生的"脱离未分化状态的细胞"通过可阻碍细胞间粘接的物质的添加而被除去的情形的图。 图4是说明本公开的一实施方式中的、在具有多能性的干细胞的培养中的集落上 产生的"脱离未分化状态的细胞"通过可阻碍细胞间粘接的物质的添加而被除去的情形的 图。 图5是说明实施例中进行的实验的程序表的图。 图6为将终浓度100nM的HA-1添加于day3时的显微镜观察照片的一例。 图7为将终浓度50nM的HA-1添加于day3时的显微镜观察照片的一例。 图8为将终浓度10nM的HA-1添加于day3时的显微镜观察照片的一例。 图9为将终浓度InM的HA-1添加于day3时的显微镜观察照片的一例。 图10为将终浓度100nM的HA-2添加于day3时的显微镜观察照片的一例。 图11为将终浓度50nM的HA-2添加于day3时的显微镜观察照片的一例。 图12为将终浓度InM的HA-2添加于day3时的显微镜观察照片的一例。 图13为将终浓度100nM的HA-2添加于day3时的显微镜观察照片的一例。 图14为将终浓度50nM的HA-3添加于day3时的显微镜观察照片的一例。 图15为将终浓度10nM的HA-3添加于day3时的显微镜观察照片的一例。 图16为将终浓度100、50、及10nM的HA-4添加于day3时的显微镜观察照片的一 例。 图17为使用有MEF饲养细胞的具有多能性的干细胞的培养时的显微镜观察照片 的一例。 图18为将Rac-linhibitor添加于day3之后、将终浓度50nM的HA-1添加于day5 时的显微镜观察照片的一例。 图19为具有多能性的干细胞的无饲养层培养时的显微镜观察照片的一例。 图20为使用有201B7株或454E-2株时的显微镜观察照片的一例T。图21为说明实施例中进行的实验的程序表的图。图22为表示继代培养时的未分化集落的比例的坐标图。【具体实施方式】 本公开在一实施方式中,基于如下见解:将具有多能性的干细胞在可阻碍细胞间 粘接的物质的存在下进行培养时,可以除去在培养中的集落内已产生和/或将产生的脱离 未分化状态的细胞。另外,本公开在一实施方式中,基于如下见解:在培养细胞中混合未分 化细胞和脱离未分化状态的细胞的情况下,可阻碍细胞间粘接的物质可以将脱离未分化状 态的细胞选择性地除去。 对本公开中的通过可阻碍细胞间粘接的物质的添加而除去在具有多能性的干细 胞的培养中的集落产生的"脱离未分化状态的细胞"的没有限定的一个或多个实施方式基 于图1进行说明。图1A表示在板上培养的未分化状态的细胞集落的中央部产生脱离未分化 状态的细胞的状态。在该状态下在培养液中添加"可阻碍细胞间粘接的物质"时,开始除去 脱离未分化状态的细胞(图1B),不久,脱离未分化的细胞从集落中央部消失(图1C)。其 后,通过继续培养而未分化状态的细胞增殖,形成未分化状态的集落(图1D)。如同图所示, 根据本公开,在没有限定的一个或多个实施方式中,可以将"脱离未分化状态的细胞""如用 橡皮擦擦掉那样"除掉。 在图1的实施方式中,脱离未分化状态的细胞被除去的机制如下地推定,但本公 开可以不限定于这些机制而被解释。首先,可以认为,脱离未分化状态的细胞与未分化状态 的细胞相比、细胞间粘接及对立足点的粘接弱、在细胞间容易形成间隙(图2A)。可以认为, 通过在该细胞间的间隙中进入可阻碍细胞间粘接的物质,脱离未分化状态的细胞的细胞间 粘接进一步消弱,产生形态变化,抑制细胞增殖(图2B)。另外,此时,本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种具有多能性(pluripotency)的干细胞的培养方法,其中,包括在可阻碍细胞间粘接的物质的存在下进行细胞培养。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员:纪冈正博金美海藤永由佳子菅原庸
申请(专利权)人:国立大学法人大阪大学
类型:发明
国别省市:日本;JP

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