培养癌干细胞的方法技术

本发明专利技术提供了培养癌干细胞群的方法。该方法包括将癌干细胞引入到细胞培养基质之上或之中，细胞培养基质为包含糖胺聚糖和取代的苯烷基胺的缀合物的凝胶的形式。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术总体上涉及培养癌干细胞群的方法。本专利技术还涉及凝胶作为细胞培养基质 的用途。
技术介绍
癌干细胞(CSC)是癌细胞的亚群(在肿瘤或血液癌内发现），就它们能够产生特定 癌症中发现的所有细胞类型而言，它们类似于正常的干细胞。这包括诸如自我更新、癌症的 播散或分化成多种类型的癌细胞的特征。这样的细胞据信能够在肿瘤中作为独特的群体持 续存在，由于形成新的肿瘤而导致癌症复发和转移。 在癌症治疗中的一个关键挑战将是根除CSC。癌症患者的不良预后和高死亡率据 信是由CSC的性质引起的，所述性质包括自我更新、转移、药物抗性和抗辐射性。常规的抗癌 药物可以杀死大量肿瘤细胞但最终不能根除CSC。存活的CSC播散并再生出新的肿瘤细胞， 这与患者的不良预后和复发密切相关。为了开发用于根除CSC并筛选新的抗癌药物的有效 方法，已经在通过对标记有不同的单克隆抗体的癌细胞进行荧光激活的细胞分选(FfCS)来 鉴定和表征CSC方面花费了许多努力。CD44是最常研究的CSC标志物之一。具有⑶44?/⑶24 ?、CD4#/CD133 S、CD4#/醛脱氢酶1家族成员Al(ALDHlAl)?和CD4#/上皮细胞粘附分子 (EpCAM)?的癌症细胞亚群显示药物抗性和肿瘤发生。然而，这样的群体在培养中通常很小 且不稳定，使得难以进行标准的高通量细胞活力测定。事实上，通过FACS分选制备的富含 CSC的群体在体外培养过程中快速减少。 存在着提供一种的需求，该方法克服了或至少改善上述的一 种或多种缺点。 存在着提供一种能够支持对癌干细胞的选择、维持和繁殖的细胞培养基质的需 求。
技术实现思路
根据第一个方面，提供了 一种培养癌干细胞群的方法，该方法包括将所述癌干细 胞引入到细胞培养基质之上或之中，其中所述细胞培养基质为包含糖胺聚糖和取代的苯烷 基胺的缀合物的凝胶的形式。 有利地，含有与糖胺聚糖相互作用的标志物的癌干细胞可以在凝胶上选择性地培 养。标志物的表达水平可以控制癌细胞群在凝胶上的增殖。 癌干细胞可以存在于癌细胞系中，并且因此用于也可以用于 培养富含癌干细胞的癌细胞系，所述癌干细胞具有标志物的高表达。因此，在一个实施方案 中，用于培养癌干细胞群的方法可以包括用于培养癌细胞系的方法，该方法包括在细胞培 养基质上或在细胞培养基质中引入癌细胞系，其中细胞培养基质为包含糖胺聚糖和取代的 苯烷基胺的缀合物的凝胶的形式。 凝胶的刚度或交联密度可以改变以促进癌干细胞或癌细胞系的生长和维持。凝胶 的刚度或交联密度还可以影响癌干细胞或癌细胞系对所选的化疗药物的药物抗性。根据第二个方面，提供了 一种从多个癌细胞系中选择性分离癌干细胞群的方法， 该方法包括以下步骤：（a)使多个癌细胞系接触细胞培养基质，其中所述细胞培养基质为包 含糖胺聚糖和取代的苯烷基胺的缀合物的凝胶的形式;和(b)使癌干细胞与细胞培养基质 相互作用从而从多个癌症细胞系中分离癌症干细胞。根据第三个方面，提供了一种筛选用于癌干细胞群的药物的方法，该方法包括在 细胞培养基质上或在细胞培养基质中培养癌干细胞的步骤，其中所述细胞培养基质为包含 糖胺聚糖和取代的苯烷基胺的缀合物的凝胶的形式，并且其中凝胶具有等于或小于l〇〇kPa 的刚度。 根据第四个方面，提供了包含糖胺聚糖和取代的苯烷基胺的缀合物的凝胶作为细 胞培养基质的用途。 根据第五个方面，提供了细胞培养基质用于筛选抗癌药物的用途，所述细胞培养 基质为包含糖胺聚糖和取代的苯烷基胺的缀合物的凝胶的形式，所述细胞培养基质具有在 细胞培养基质上或在细胞培养基质中培养的癌干细胞。 定义 在本文中使用的下列词和术语应当具有所指示的含义： 术语"癌干细胞标志物"或"标志物"要被广义地解释为指可以用来分离和鉴定癌 干细胞的基因和它们的蛋白产物。 术语"选择"或"选择性地"以及它们的语法变体要被广义地解释为指从多个癌细 胞、癌干细胞或癌细胞系或者多种类型的癌细胞、癌干细胞或癌细胞系的混合物中分离所 需类型或目标类型的癌细胞或癌干细胞。 词"基本上"不排除"完全地"，例如"基本上不含"Y的组合物可以完全不含Y。在需 要时，词"基本上"可以从本专利技术的定义中省略。 除非另外指明，术语"包括"和"包含"以及它们的语法变体意在代表"开放式的"或 "包含式的"语言使得它们包含所引述的要素而且允许包含另外的未引述的要素。 当在本文中使用时，术语"约"，在配方的组分的浓度的语境中，典型地意指所述值 的+/-5%，更典型地所述值的+/-4%，更典型地所述值的+/-3%，更典型地，所述值的+/-2 %，甚至更典型地，所述值的+/-1 %，并且甚至更典型地所述值的+/-0.5 %。 在本公开全文中，某些实施方案可以以范围格式公开。应当理解以范围格式的描 述仅为了方便和简便并且不应当被解释为对公开的范围的固定不变的限制。因此，对范围 的描述应当被认为已经具体地公开了所有可能的子范围以及该范围内的单个数值。例如， 对范围诸如1-6的描述应当被理解为已经具体地公开了诸如下列的子范围：1-3、1-4、1-5、 2-4、2-6、3-6等，以及该范围内的单个数字，例如，1、2、3、4、5和6。无论范围的宽度如何这均 适用。 在本文中某些实施方案还可以宽泛地和概括性地描述。落在上位公开内容内的较 窄种类和亚类分组中的每一个也形成本公开的一部分。这包括对具有限制性条款或从上位 概念中去除任何主题的负面限制的实施方案的概括性描述，无论本文中是否具体地描述了 被去除的材料。【具体实施方式】 现在将公开用于培养癌干细胞群的方法的示例性的、非限制性的实施方案。 该方法包括在细胞培养基质之上或之中引入癌干细胞，其中细胞培养基质为包含 糖胺聚糖和取代的苯烷基胺的缀合物的凝胶的形式。 癌干细胞可以包含标志物(也称为癌干细胞标志物）。 癌干细胞可以存在于癌细胞系中，并且因此用于也可以用于 培养富含癌干细胞的癌细胞系，所述癌干细胞具有癌干细胞标志物的高表达。因此，在一个 实施方案中，用于培养癌干细胞群的方法可以包括用于培养癌细胞系的方法，该方法包括 在细胞培养基质上或在细胞培养基质中引入癌细胞系，其中细胞培养基质为包含糖胺聚糖 和取代的苯烷基胺的缀合物的凝胶的形式。 癌干细标志物的表达水平可以控制癌细胞群在凝胶上的增殖。癌干细胞标志物的 表达水平被定义为单个细胞中癌干细胞标志物分子的数目。表达水平可以被表示为当与比 较细胞相比较时癌干细胞标志物的相对表达水平的平均值。平均相对表达水平可以通过流 式细胞分析(FACS)来测量。当确定某个细胞(或细胞系)是否具有癌干细胞标志物的"高"表 达水平时，癌干细胞标志物的相对表达水平的平均值可以是与比较细胞相比大于20的值。 癌干细胞标志物的相对表达水平的平均值可以是与比较细胞比较大于30、大于40、大于50、 大于60、大于70、大于80、大于90、大于100、大于110或大于150。表达水平还可以通过测定癌 干细胞标志物的mRNA表达水平来获得。作为实例，比较细胞可以是Β??ΤΜΑΤ?Χ，HTB-20?，获自美国弗吉尼亚州马内萨斯的ATCC)。癌干细胞可以在细胞培养基质上孵育。孵育条件可以是处于约36°C至约37°C的温 度，约5分钟至约24小时本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种培养癌干细胞群的方法，包括将所述癌干细胞引入到细胞培养基质上或细胞培养基质中，其中所述细胞培养基质为包含糖胺聚糖和取代的苯烷基胺的缀合物的凝胶的形式。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：栗泽元一，山下敦，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：新加坡;SG