本发明专利技术公开了一种亲和温敏聚合物在双水相体系中的应用。所述的亲和温敏聚合物为PNIPAAm-co-AAm-Cu，所述的双水相体系是PNIPAAm-co-AAm-Cu和葡聚糖4万双水相体系。本发明专利技术的双水相体系纯化BSA后，上相中得到的BSA蛋白的特征谱带颜色加深，而其杂质蛋白明显变淡，而下相中几乎不含有BSA分子的谱带，表明该亲和温敏双水相体系能有效的用于BSA的富集和分离。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种亲和温敏聚合物在双水相体系中的应用。所述的亲和温敏聚合物为PNIPAAm-co-AAm-Cu，所述的双水相体系是PNIPAAm-co-AAm-Cu和葡聚糖4万双水相体系。本专利技术的双水相体系纯化BSA后，上相中得到的BSA蛋白的特征谱带颜色加深，而其杂质蛋白明显变淡，而下相中几乎不含有BSA分子的谱带，表明该亲和温敏双水相体系能有效的用于BSA的富集和分离。【专利说明】一种亲和温敏聚合物在双水相体系中的应用
本专利技术涉及高分子聚合物领域，尤其涉及一种亲和温敏聚合物在双水相体系中的 应用。
技术介绍
聚（N-异丙基丙烯酰胺）简称PNIPAAm，分子结构式如下： 【权利要求】1. 一种亲和温敏聚合物在双水相体系中的应用，其特征在于：所述的亲和温敏聚合物 为PNIPAAm-c〇-AAm-Cu，所述的双水相体系是PNIPAAm-c〇-AAm-Cu和葡聚糖4万双水相体 系。2. 如权利要求1所述的亲和温敏聚合物在双水相体系中的应用，其特征在于：所述的 亲和温敏聚合物PNIPAAm-co-AAm-Cu的制备方法如下： (1) 将N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酸溶解在去离子水中，N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酸的 重量体积比为l:50-150g/iil，N-异丙基丙烯酰胺和去离子水的重量体积比为l:20-30g/ ml，然后真空脱气lOmin，再加入N，N，N'，N'_四甲基乙二胺和过硫酸铵溶液，N，N，N'，N'-四 甲基乙二胺与N-异丙基丙烯酰胺的体积重量比为40-80:1 yl/g，过硫酸铵溶液与N-异丙 基丙烯酰胺的体积重量比为〇. 1-1: lml/g，通氮气鼓泡15min后密封，于50°C恒温水浴中反 应2h ; (2) 反应结束后，将上层清液轻轻倒出，加入去离子水将沉淀溶解，待沉淀完全溶解后， 置于50°C恒温水浴中30min，离心收集聚合物沉淀，重复上述步骤3次，以去除未反应的单 体，得到 PNIPAAm-co-AAm聚合物，在真空干燥箱中将所得的聚合物在50°C干燥； ⑶然后将聚合物PNIPAAm-co-AAm加入到2. Og/L硫酸铜溶液中，PNIPAAm-co-AAm与 硫酸铜溶液的重量体积比为〇. 1-0. 5: 2g/ml，调节pH至4. 5,在室温下进行铜离子的吸附实 验lh，待吸附平衡后置于50°C的恒温水浴中，保温10min至金属螯合温敏聚合物受热凝集 沉淀，8000rpm离心5min使之完全沉淀得到亲和温敏金属螯合聚合物PNIPAAm-co-AAm-Cu。3. 如权利要求2所述的亲和温敏聚合物在双水相体系中的应用，其特征在于：步骤（1) 中，N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酸的重量体积比为l:100g/iil ;N-异丙基丙烯酰胺和去离子 水的重量体积比为1:25g/ml ;N，N，N'，N' -四甲基乙二胺与N-异丙基丙烯酰胺的体积重量 比为60:1 ii 1/g ;过硫酸铵溶液与N-异丙基丙烯酰胺的体积重量比为0. 6: lml/g,过硫酸铵 溶液的浓度为10% w/v。4. 如权利要求2所述的亲和温敏聚合物在双水相体系中的应用，其特征在于：步骤（3) 中，PNIPAAm-co-AAm与硫酸铜溶液的重量体积比为0. 2:2g/ml。5. 如权利要求1所述的亲和温敏聚合物在双水相体系中的应用，其特征在于：所述的 双水相体系对BSA的分离纯化方法如下： (1) 将成相物质亲和温敏聚合物PNIPAAm-co-AAm-Cu配制成浓度为5. 50% w/w的浓溶 液，葡聚糖4万配制成浓度为20% w/w的浓溶液； (2) 将BSA配制成15. 0mg/ml的溶液； (3) 将步骤（1)配制的PNIPAAm-co-AAm-Cu溶液和葡聚糖4万混合得到双水相体系，使 双水相体系中葡聚糖4万的浓度为6. 0% w/w，亲和温敏聚合物的浓度为3. 5 % w/w，振荡混 合均匀。 (4) 往双水相体系中加入步骤（2)配制的BSA溶液，并用0. 05mpl/L Tris-HCl缓冲液 调节体系的pH值=6,然后加蒸馏水，在旋涡混合器上混合lmin，室温下静置30min，体系分 成两相，使BSA在两相中进行分配，读取上下两相的体积，计算相体积比R(R = Vt/Vb); (5) 分别取一定量的上下两相，分别测定两相中BSA的浓度，亲和温敏聚合物相置于 40°C水浴中保温10min，使亲和温敏聚合物受热凝聚至完全沉淀，8000rpm离心5min弃上 清，将所得沉淀用pH 6. 0的0. 05mol/L Tris-HCl缓冲溶液洗涤数次，除去未吸附的蛋白 质，最后用2ml，pH 4. 0的0. 05mol/L Tris-HCl缓冲溶液在4°C下将温敏聚合物充分溶解， 在40°C水浴下保温lOmin，使亲和温敏聚合物完全沉淀，8000rpm离心5min取上层清液，分 别测定洗脱前后溶液中蛋白质的含量。6. 如权利要求5所述的亲和温敏聚合物在双水相体系中的应用，其特征在于：步骤（2) 中，BSA 溶液用 pH6. 0,0. 05mol/L Tris-HCl 缓冲液配制。7. 如权利要求5所述的亲和温敏聚合物在双水相体系中的应用，其特征在于：步骤（5) 中，Tris-HCl 缓冲溶液中含有 0? 20mol/L NaCl 和 0? 050mol/L EDTA。【文档编号】C08F220/06GK104474737SQ201410746578【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年12月9日 优先权日:2014年12月9日 【专利技术者】李树白, 马迪, 张启蒙, 薛叙明, 陆敏, 姚晨, 赵昊昱, 刘英莉, 聂华丽 申请人:常州工程职业技术学院本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种亲和温敏聚合物在双水相体系中的应用，其特征在于：所述的亲和温敏聚合物为PNIPAAm‑co‑AAm‑Cu，所述的双水相体系是PNIPAAm‑co‑AAm‑Cu和葡聚糖4万双水相体系。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李树白，马迪，张启蒙，薛叙明，陆敏，姚晨，赵昊昱，刘英莉，聂华丽，
申请(专利权)人：常州工程职业技术学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。