Notch信号通路抑制剂及其在癌症治疗中的用途制造技术

本发明专利技术涉及选自6-(4-(叔丁基)苯氧基)吡啶-3-胺(I3)及其衍生物的Notch信号通路抑制剂在治疗和/或预防癌症中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】Notch信号通路抑制剂及其在癌症治疗中的用途
本专利技术涉及Notch信号通路抑制剂、尤其是6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)(CAS号218457-67-1)及其衍生物在治疗和/或预防癌症中的用途。
技术介绍
Notch信号通路代表在发育、细胞生存和细胞增殖过程中控制细胞命运的分子环路的一个重要的组成部分(ShihIeM，WangTLCancerRes2007；67(5)：1879-82)。该通路的异常激活导致肿瘤发生。Notch家族成员被揭示为越来越多的癌症的致癌基因。近来，通过存在Notch基因在人类癌症中的激活性突变和扩增，以及通过证明Notch信号通路中的基因可为潜在的治疗靶标，已突出Notch在人癌症中的作用。已清楚的是，Notch通路中的主要治疗靶标之一是Notch受体，其中γ-分泌酶抑制剂阻止Notch分子中致癌(细胞内)结构域的生成并抑制Notch活性。虽然在详细分析该信号通路的复杂活动中已取得显著进展，但针对Notch抑制剂可进行的选择非常有限。然而，开创类的Notch抑制剂已在针对少数几个癌症类型的临床试验中使用，例如MerckSharp&DohmeCorp.MK0752的γ-分泌酶抑制剂MK0752，和RO4929097(Roche)，一种抑制Notch信号通路的合成的小分子，其可引起Notch信号通路过度激活的肿瘤细胞的诱导生长停滞(growtharrest)和细胞凋亡。根据目前市场或调查，使用γ-分泌酶抑制剂阻断Notch信号的缺点之一是其具有宽范围的其他靶标如淀粉样前体蛋白，且其在通过全部四个配体(Notch1、2、3和4)阻断Notch信号中无选择性。由于其具有通过全部四个受体(Notch1、2、3和4)阻断Notch信号的能力，γ-分泌酶抑制剂已知引起小肠杯状细胞化生(gobletcellmetaplasia)。另外，一些恶性血液肿瘤和实体瘤包含Notch受体突变(如染色体易位)，导致NICD主要活化形式的组成性表达，独立于通过γ-分泌酶复合物的裂解。因此，这些肿瘤对γ-分泌酶抑制剂的治疗无响应。因此，仍亟需鉴别和开发其他的特异性的且选择性的Notch信号通路抑制剂，其可用于治疗和/或预防癌症。
技术实现思路
本专利技术涉及式I的6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)或其具有Notch信号通路抑制特性的衍生物之一，及其盐、溶剂化物、互变异构体、同分异构体，用于治疗和/或预防癌症。本专利技术的另一目的是提供一种药物组合物，包括含有式I的6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)或其具有Notch信号通路抑制特性的衍生物之一，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同分异构体以及药学上可接受的载体的药物组合物。本专利技术还涉及一种试剂盒，包括一个或多个剂量的6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)或其具有Notch信号通路抑制特性的衍生物之一，任选地还有试剂和/或使用说明，所述试剂盒在治疗和/或预防癌症的方法中使用。本专利技术的另一目的是提供式I的6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)或其具有Notch信号通路抑制特性的衍生物之一用于在体内或体外抑制细胞的Notch信号通路的用途。本专利技术的另一目的是提供一种治疗受试者的Notch依赖性癌症的方法。附图说明图1示出了6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)(CAS号218457-67-1)阻断NICD介导的Notch信号激活。A)N1-HeLa细胞用pcDNA3.Notch1表达质粒、pGL4.26-12xCSL荧光素酶和SV40光素酶(renilla)质粒共转染。DL4-和N1-HeLa细胞以1∶1的比例(20000∶20000细胞/孔)在96孔板中共培养，并用DMSO或用2、5、10μM的I3和DAPT处理24h。Notch通路激活通过将Notch信号驱动的荧光素酶报告子试验定量化而测量。用6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)和DAPT处理DL4：N1共培养试验引起Notch信号激活的浓度依赖性降低。B)HeLa细胞用NICD转染并用DMSO或用2、5、10、20和40μM的6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)处理。作为对照，将共培养的细胞也用5、10、20和40μM的DAPT处理。通路激活用Notch驱动的荧光素酶报告子试验测量。用6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)处理NICD表达细胞引起信号的衰减，而DAPT处理不影响NICD介导的Notch信号激活。C)DL4：N1和DL4：N2共培养试验用I3和DAPT(各10μM)处理24h。6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)和DAPT对DL4-N1和DL4-N2驱动的通路激活的作用通过Notch驱动的荧光素酶活性测量。I3和DAPT处理都阻断Notch1和Notch2诱导的通路激活。D)6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)通过Notch1的细胞内结构域(NICD)和Notch2的细胞内结构域(N2-ICD)抑制通路激活。图2示出了6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)介导的Notch信号抑制可逆转MAML1逐渐升高的浓度。用800ng的NICD+3μg的pCDNA3.1或800ng的NICD+1μg的MAML1-FLAG或800ng的NICD+3μg的MAML1-FLAG的表达载体共转染HeLa细胞。为测量Notch通路激活，pGL4.26-12xCSL荧光素酶质粒也被引入至细胞中。SV40光素酶被用作内参照。将用不同组合和数量的质粒转染的细胞用DMSO或浓度逐渐升高的6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)(1、2.5、5和10μM)处理24h。12xCSL驱动的荧光素酶活性用双荧光素酶试验体系测量。在不存在MAML1的情况下，6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)可阻断Notch信号激活，但6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)的Notch抑制效果被逐渐增加量的MAML1削弱。图3示出了6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)在人癌症细胞株中抑制Notch信号并下调其靶基因。A)RPMI8402细胞用DMSO、6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)和DAPT(10μM)处理24h，并通过qRT-PCR分析Notch靶基因Hes1、cMyc和Dtx1的表达。用HPRT作为管家基因对数据进行标准化。B)将来自6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)处理的细胞的全部细胞裂解物通过蛋白质印迹法分析。使用抵抗NICD(Val1744)、Hes1和cMyc的抗体，测定NICD和Notch靶基因的蛋白质水平。C和D)将人T-ALL细胞株HPBALL和KOPTK1用DMSO或6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)处理24h。使用NICD(Val1744)和Hes1特异性抗体进行蛋白质印迹分析。将微管蛋白作为内参照。E)将来自DMSO、6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)处理的PANC1细胞(胰腺癌细胞株)的全部细胞裂解物用蛋白质印迹法分析。用Hes1特异性抗体测定Hes1蛋白质水平。用学生双尾t检验进行统计学分析。*＝p值＜0.05。图4示出了6-(4-叔丁基本文档来自技高网...

【技术保护点】
式I的6‑(4‑叔丁基苯氧基)吡啶‑3‑胺(I3)或其具有Notch信号通路抑制特性的衍生物之一，其盐、溶剂化物、互变异构体、同分异构体，其用于治疗和/或预防癌症。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.12.21 EP 11010130.01.化合物在制备用于治疗和/或预防Notch依赖性癌症的药物中的用途，其中具有Notch信号通路抑制特性的所述化合物选自：式I的6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)式IIIa的4-(4-环己基苯氧基)苯胺、式IVa的6-(4-((3r,5r,7r)-金刚烷-1-基)苯氧基)吡啶-3-胺、式IIe的6-(3-(叔丁基)苯氧基)吡啶-3-胺、式IIf的4-(4-(叔丁基)苯氧基)-3-氟苯胺、式IIg的6-(4-(叔戊基)苯氧基)吡啶-3-胺、式IIh的6-(4-丁基苯氧基)吡啶-3-胺、式IIi的3-氟-4-(4-(叔戊基)苯氧基)苯胺、式IIIb的4-(4-环己基苯氧基)-3-氟苯胺、式IVb的4-(4-((3r,5r,7r)-金刚烷-1-基)苯氧基)苯胺、式IIIc的6-(4-环己基苯氧基)吡啶-3-胺、或其盐之一、或其立体异构体。2.权利要求1的用途，其中Notch依赖性癌症选自：T细胞急性淋巴性白血病(T-ALL)、慢性粒细胞性白血病(CML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、黑色素瘤、脑肿瘤、肿瘤血管发生和结直肠癌。3.权利要求1-2中任一项的用途，其中Notch依赖性癌症对γ-分泌酶抑制剂治疗具有抗性。4.一种药物组合物，其包含具有Notch信号通路抑制特性的化合物，及药学上可接受的载体，其中所述化合物选自：式I的6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)式IIIa的4-(4-环己基苯氧基)苯胺、式IVa的6-(4-((3r,5r,7r)-金刚烷-1-基)苯氧基)吡啶-3-胺、式IIe的6-(3-(叔丁基)苯氧基)吡啶-3-胺、式IIf的4-(4-(叔丁基)苯氧基)-3-氟苯胺、式IIg的6-(4-(叔戊基)苯氧基)吡啶-3-胺、式IIh的6-(4-丁基苯氧基)吡啶-3-胺、式IIi的3-氟-4-(4-(叔戊基)苯氧基)苯胺、式IIIb的4-(4-环己基苯氧基)-3-氟苯胺、式IVb的4-(4-((3r,5r,7r)-金刚烷-1-基)苯氧基)苯胺、式IIIc的6-(4-环己基苯氧基)吡啶-3-胺、或其药学上可接受的盐或立体异构体。5.一种试剂盒，其包括一个或多个剂量的用于治疗和/或预防Notch依赖性癌症的具有Notch信号通路抑制特性的化合物，任选地包括试剂和/或使用说明，其中所述化合物选自：式I的6-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-胺(I3)式IIIa的4-(4-环己基苯氧基)苯胺、式IVa的6-(4-((3r,5r,7r)-金刚烷-1-基)苯氧基)吡啶-3-胺、式IIe的6-(3-(叔丁基)苯氧基)吡啶-3-胺、式IIf的4-(4-(叔丁基)苯氧基)-3-氟苯胺、式IIg的6-(4-(叔...

【专利技术属性】
技术研发人员：F·拉特克，R·利哈尔，V·莱因穆勒，祝介平，
申请(专利权)人：洛桑联邦理工学院EPFL，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH