本发明专利技术属于生物技术及医药领域。涉及一种蛋白Bach1应用于抑制细胞经典Wnt信号途径的用途，本发明专利技术提出了Bach1是干预异常Wnt信号通路有关的疾病(例如，血管发生，癌症，异常细胞增殖，阿耳茨海默病和骨关节炎)的药物靶点。Bach1蛋白通过直接阻断β-catenin/TCF的蛋白结合干扰转录复合体的形成从而抑制Wnt信号通路靶基因表达，抑制细胞增殖并诱导凋亡。本发明专利技术为筛选治疗与异常Wnt信号通路有关疾病的药物提供了新的靶点，进一步蛋白Bach1可用于制备细胞Wnt信号通路抑制剂，和用于制备预防和/或治疗与异常Wnt信号通路有关的疾病的药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术及医药领域，涉及蛋白Bach1的新用途，具体涉及一种蛋白Bach1在用于制备细胞Wnt信号通路抑制剂中的用途。
技术介绍
现有技术公开了Wnt信号通路是细胞内十分重要的信号通路，它与肿瘤、血管再生、细胞增殖、组织再生、胚胎发育、以及神经、骨骼的发生和发展密切相关。研究显示，Wnt信号转导途径主要分为依赖于β-catenin/TCF转录复合物的经典Wnt信号转导途径(Wnt/β-catenin途径)及不依赖于β-catenin/TCF转录复合物的非经典Wnt信号转导途径(Wnt/Ca2+途径和Wnt/JNK途径)。在经典Wnt信号转导途径中，转录激活子β-Catenin是核心成分；在没有Wnt信号的情况下，细胞质中的β-Catenin和许多蛋白形成多蛋白复合物，β-Catenin被泛素化降解；当Wnt信号通路活化时，Wnt与受体Fzd结合激活细胞内的一些蛋白阻止了β-Catenin的降解。有研究报道了β-Catenin在细胞内积累并进入细胞核与T细胞因子TCF淋巴细胞增强因子家族的转录因子形成复合物激活下游基因的转录。业内技术人员认为，由于Wnt/β-catenin信号途径与众多的癌症和疾病有关系，所以调节失控的Wnt/β-catenin信号途径可以作为治疗与Wnt/β-catenin信号途径相关疾病的一个重要手段，因此，Wnt/β-catenin信号通路抑制剂的研究与应用对于异常Wnt信号通路相关疾病的治疗具有重要意义。BTB-CNC同源体1(BTBandCNChomology1，Bach1)是一个转录抑制因子，属于碱性亮氨酸拉链蛋白家族，其结构高度保守，广泛存在于哺乳动物各种组织中；人的Bach1蛋白含736个氨基酸，分子量为92kDa。已知Bach1调控的下游基因有血红素氧合酶-1(hemeoxygenase-1，HO-1)等，但是，目前还未见有关Bach1作为Wnt信号通路抑制剂以及相关应用的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供蛋白Bach1的新用途，具体涉及蛋白Bach1在用于制备细胞Wnt信号通路抑制剂中的用途。本专利技术所述的Bach1蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的多肽。本专利技术中，进行了Bach1抑制细胞Wnt/β-catenin调控路径实验，其中包括：通过Bach1抑制Wnt/β-catenin报告基因TOPFlash的活性和靶基因的表达，Bach1抑制β-catenin与TCF4的蛋白结合，Bach1抑制β-catenin与CBP/P300的蛋白结合，和通过招募HDAC1与Wnt靶基因的启动子区域结合等试验；以及进行了Bach1诱导细胞周期阻滞和凋亡，抑制细胞增殖实验，其中包括：细胞周期分析实验，细胞凋亡实验，和细胞增殖实验；实验结果显示，所述的Bach1通过直接阻断β-catenin/TCF的蛋白结合干扰转录复合体的形成以实现Wnt信号通路抑制；Bach1通过抑制Wnt信号通路实现Wnt信号通路报告基因和靶基因表达抑制；Bach1通过选择性抑制Wnt信号通路诱导细胞周期阻滞和凋亡以实现细胞增殖抑制。本专利技术公开了蛋白Bach1能用于抑制细胞经典Wnt信号途径的新用途，经实验证实，Bach1能抑制经典Wnt信号通路的报告基因或目的基因的表达活性，Bach1蛋白通过直接阻断β-catenin/TCF的蛋白结合干扰转录复合体的形成从而抑制Wnt信号通路靶基因表达，抑制细胞增殖并诱导凋亡，实验结果表明，蛋白Bach1可作为干预异常Wnt信号通路有关的疾病(例如，与Wnt信号通路激活相关的疾病或是Wnt信号通路组分突变所致的遗传疾病)的药物靶点；进一步用于制备调节经典Wnt信号途径的药物，和用于制备细胞Wnt信号通路抑制剂，尤其是用于制备预防和/或治疗与异常Wnt信号通路有关的疾病的药物。本专利技术所述的与Wnt信号通路激活相关的疾病，选自：癌症，血管发生，异常细胞增殖，糖尿病性视网膜病，肺纤维化，类风湿性关节炎，硬皮病，霉菌或病毒感染，骨或软骨疾病，阿尔茨海默病或骨关节炎等；本专利技术所述的Wnt信号通路组分突变所致的遗传疾病，选自：结肠息肉病、骨质疏松-假性神经胶质瘤综合征、家族性渗出性玻璃体视网膜病变、视网膜血管发生、早期冠心病、先天性四肢切断综合征、2型糖尿病、富尔曼综合征、维尔姆斯瘤、骨骼发育异常、灶性皮肤发育不全、常染色体隐性甲缺如、神经管缺陷或α地中海贫血(ATRX)综合征。附图说明图1为Bach1抑制细胞经典Wnt信号途径报告基因TOPFlash的活性和靶基因的表达，其中，图1A显示，Bach1基因过表达抑制Wnt3a激活的TOPFlash报告基因活性；图1B显示，Bach1基因过表达抑制β-catenin激活的TOPFlash报告基因活性；图1C显示，Bach1基因抑制增加基础或Wnt3a激活的TOPFlash报告基因活性；图1D显示，Bach1基因过表达抑制，Bach1基因减少促进Wnt/β-catenin信号途径靶基因的表达。图2为Bach1与TCF4结合，抑制β-catenin与TCF4的蛋白结合，其中，图2A显示了利用免疫共沉淀法分析Bach1与TCF4的相互作用，Bach1全长或Bach1N-段与TCF4有结合；图2B显示Bach1对β-catenin与TCF4结合的影响，Bach1抑制β-catenin与TCF4的蛋白结合。图3为利用免疫共沉淀法分析Bach1对β-catenin与CBP/P300结合的影响，其中，图3A和3B显示了Bach1抑制β-catenin与CBP/P300的蛋白结合；图3C显示了Bach1抑制β-catenin的乙酰化水平。图4为Bach1通过招募HDAC1与Wnt靶基因的启动子区域结合，抑制靶基因转录，其中，图4A显示了利用免疫共沉淀法分析Bach1与HDCA1的相互作用，结果表明，Bach1与组蛋白去乙酰化酶1(HDCA1)有结合；图4B显示了Bach1对组蛋白去乙酰化酶活性的影响，结果表明，Bach1过表达增加组蛋白去乙酰化酶活性，酶活性的增加可以被特异性的组蛋白去乙酰化酶抑制剂TrichostatinA(TSA)所抑制；图4C显示了利用染色质免疫共沉淀法分析Bach1是否与IL-8启动子区结合，结果表明，Bach1与IL-8启动子区(-1—-193)有结合；图4D显示了利用染色质免疫共沉淀法分析Bach1过表达对β-catenin，HDAC1与IL-8启动子区结合的影响，结果表明，Bach1过表达招募HDAC1与IL-8的启动子区域结合，抑制β-catenin与IL-8的启动子区域结合，从而抑制IL-8基因转录。图5为Bach1诱导细胞周期阻滞和凋亡，抑制细胞增殖，其中，图5A显示了Bach1过表达引起细胞S期阻滞；图5B显示了Bach1过表达诱导细胞的凋亡；图5C显示了Bach1过表达在48和72小时后抑制细胞增殖。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1Bach1抑制细胞Wnt/β-catenin调控路径试验试验例1-1:Bach1抑制Wn本文档来自技高网...
【技术保护点】
蛋白Bach1在用于制备细胞Wnt信号通路抑制剂中的用途；所述的Bach1蛋白其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽。
【技术特征摘要】
1.蛋白Bach1在用于制备细胞Wnt信号通路抑制剂中的用途；所述的Bach1蛋白其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的多肽。2.按权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的蛋白Bach1作为靶点在用于制备预防和/或治疗与异常Wnt信号通路有关的疾病的药物中的用途。3.按权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述的蛋白Bach1抑制经典Wnt信号通路的报告基因或目的基因的表达活性。4.按权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述的蛋白Bach1直接阻断Wnt信号通路中β-catenin/TCF的蛋白结合干扰转录复合体的形成抑制细胞增殖。5.按权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的与异常Wnt信号通路有关的疾病是与W...
【专利技术属性】
技术研发人员：孟丹，蒋丽，牛琮，魏香香，陈思锋，王新红，刘俊许，赵凤娣，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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