NOTCH途径抑制制造技术

本发明专利技术提供了具有降低的毒性的Notch途径抑制。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求于2014年12月9日提交的美国临时申请号62/089,425和于2014年7月11日提交的美国临时申请号62/023,554的优先权，所述美国临时申请的全部内容各自以引用的方式并入本文以用于任何目的。序列表本申请包含已经通过EFS-Web提交的序列表，并且其全部内容通过引用的方式并入本文。2015年7月8日创建的所述ASCII拷贝，命名为2015-07-09_01146-0036-00PCT_seq_listing.txt，并且大小为370,446字节。专利
本专利技术涉及Notch途径抑制。
技术介绍
Notch信号传导途径调节多样的细胞功能(Kopan等人，Cell137,216–233(2009))。已经在哺乳动物中鉴定了四种Notch受体，即Notch1-4，它们共享包括胞外结构域，跨膜结构域和胞内结构域的基本结构元件。类似地，Notch的规范配体(canonicalligand)共享某些结构相似性，但也已鉴定了Notch的许多非规范配体(Kopan等人，Cell137,216–233(2009))。哺乳动物中的五种规范的配体是δ样1，δ样3，δ样4，Jagged1和Jagged2。Notch配体与Notch受体的胞外结构域的结合设定了运动中的信号传导级联，其开始于在胞外S2位点处被ADAM(解联蛋白和金属蛋白酶)家族的α分泌酶蛋白水解裂解。S2处的裂解之后是γ分泌酶在胞内S3位点处的蛋白水解裂解，其导致胞内结构域的释放和最终激活Notch依赖性转录因子如Hes1和Hey的下游事件。由于异常Notch表达和信号传导已涉及许多疾病，包括癌症(Koch等人，Cell.Mol.LifeSci.64,2746–2762(2007))，已经研究了Notch信号传导的调节剂作为用于这些疾病的可能的治疗剂。例如，已经在临床试验中测试γ分泌酶抑制剂在治疗各种恶性肿瘤中的有效性(Shih等人，CancerRes.67,1879–1882(2007))。γ分泌酶抑制剂阻止S3处的裂解，从而阻止通过Notch受体的信号传导。然而，γ分泌酶抑制剂不区分单个Notch家族成员，因此同时抑制通过多个受体，以及通过无关途径的信号传导(Beel等人，Cell.Mol.LifeSci.65,1311–1334(2008))。此外，γ分泌酶抑制剂的施用与由重量减轻和肠杯形细胞化生为标志的肠毒性有关，指示Notch在通过维持肠隐窝祖细胞的增殖和阻止分化成分泌细胞命运来确定细胞命运中的作用(参见vanEs等人，Nature435:959-963(2005))。类似地，通过条件性Notch基因敲除(Riccio等人，EMBORep.9:377-383(2008))或通过拮抗性抗体抑制(美国专利申请公开号2010/0080808)来抑制Notch1和Notch2信号传导两者也引起肠杯形细胞化生。小鼠肠上皮提供了用于研究组织再生的重要模型。上皮的连续周转由位于隐窝基部附近的肠干细胞(ISC)支持。遗传谱系示踪研究已经鉴定了独特的ISC群体，包括以Lgr5表达(Wnt靶基因)为标志的隐窝基底柱状细胞(CBC)(Barker，vanEs等人，2007)。CBC位于隐窝底部，占据从基部起的细胞位置+1到+5，在那里它们插入到构成干细胞小生境的有丝分裂后的帕内特细胞(Panethcell)间(Sato，vanEs等人2011)。CBC通过称为短暂扩充(transit-amplifying，TA)细胞的快速增殖中间体的群体有助于所有肠细胞类型，包括分泌和吸收谱系(Barker，vanEs等人，2007)。对衰老细胞的连续替换和腐肉形成(sloughing)导致肠上皮大约每5天更新。小肠和成年肠稳态的发展需要规范的Wnt信号传导。Lef/Tcf4(介导规范的Wnt信号转导的转录因子)对于在新生小鼠的预期隐窝区域中形成增殖区室是必不可少的(Korinek，Barker等人1998)。Lef/Tcf4也是成年肠稳态必需的(vanEs，Haegebarth等人2012)，Wnt效应物(effector)β-连环蛋白也是如此(Fevr，Robine等人2007)。相反，Wnt信号传导激动剂R-spondin1的施用导致ISC区室的扩张(Yan，Chia等人2012)，其可以减缓放化疗期间ISC的损失(Zhou，Geng等人2013)。在成年动物中，Wnt信号传导的中心作用由许多ISC标志物(包括Lgr5)的Wnt依赖性表达突出显示(deLau，Barker等人2011)。除了其在维持ISC中的作用外，Wnt信号传导赋予分泌命运决定的能力。Wnt信号传导在帕内特细胞分化中起特定作用(Andreu，Colnot等人2005；vanEs，Jay等人2005；Andreu，Peignon等人2008；vanEs，Haegebarth等人2012)，而Wnt抑制剂DKK1的过表达导致所有分泌细胞的丧失(Pinto，Gregorieff等人2003)。Notch途径通过调节CBC和通过促进吸收性细胞命运来影响肠稳态。用γ-分泌酶抑制剂DAPT(其阻断Notch受体转化为其转录活性状态)危害成年小鼠中的Notch信号转导导致增殖性Lgr5阳性CBC的丧失和分泌细胞的总体增加(VanDussen，Carulli等2012)。肠道中的分泌性细胞增生也在缺失Notch效应物Rbp-j的情况下发生(vanEs，vanGijn等人2005；VanDussen，Carulli等人2012)。相反，在围产期小鼠的小肠中组成性Notch信号传导的激活导致增殖区室的扩充以及分泌细胞数目的减少(Fre，Huyghe等人2005；Stanger，Datar等人2005)。遗传证据表明Notch信号传导完全通过抑制Math1/Atoh1(一种分泌细胞形成所需的转录因子)对分泌细胞分化施加其负调节作用(Yang，Bermingham等人，2001)，因为Math1的条件缺失拯救Rbp-j功能丧失表型(Kim和Shivdasani2011)。然而，尽管Math1在缺乏Notch的情况下上调(VanDussen，Carulli等人2012)，但是在小肠中积极维持Math1的正常水平所需的信号是未知的。本领域中需要缺乏与抑制Notch受体有关的毒性的抗Notch途径治疗方案。
技术实现思路
在一些实施方案中，提供了减轻与Notch途径抑制有关的毒性的方法。在一些实施方案中，方法包括向用Notch途径抑制剂治疗的个体施用有效量的至少一种Wnt途径抑制剂。在一些实施方案中，在已经向所述个体施用至少一剂Notch途径抑制剂后施用所述Wnt途径抑制剂。在一些实施方案中，在向所述个体施用Notch途径抑制剂同时施用所述Wnt途径抑制剂。在一些实施方案中，在向所述个体施用Notch途径抑制剂前施用所述Wnt途径抑制剂。在一些实施方案中，毒性包括分泌性化生、肝毒性、肺毒性、心脏毒性、皮下肿瘤和胸腺萎缩中的一种或多种。在一些实施方案中，毒性包括腹泻或胃肠出血或两者。在一些实施方案中，至少一种Wnt途径抑制剂的施用减轻腹泻或胃肠出血或两者。在一些实施方案中，肝毒性包括窦状扩张、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种减轻与Notch途径抑制有关的毒性的方法，所述方法包括向用Notch途径抑制剂治疗的个体施用有效量的至少一种Wnt途径抑制剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.07.11 US 62/023,554;2014.12.09 US 62/089,4251.一种减轻与Notch途径抑制有关的毒性的方法，所述方法包括向用Notch途径抑制剂治疗的个体施用有效量的至少一种Wnt途径抑制剂。2.根据权利要求1所述的方法，其中在已经向所述个体施用至少一剂Notch途径抑制剂后施用所述Wnt途径抑制剂。3.根据权利要求1所述的方法，其中在向所述个体施用Notch途径抑制剂同时施用所述Wnt途径抑制剂。4.根据权利要求1所述的方法，其中在向所述个体施用Notch途径抑制剂前施用所述Wnt途径抑制剂。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述毒性包括分泌性化生、肝毒性、肺毒性、心脏毒性、皮下肿瘤和胸腺萎缩中的一种或多种。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述毒性包括腹泻或胃肠出血或两者。7.根据权利要求6所述的方法，其中至少一种Wnt途径抑制剂的施用减轻所述腹泻或胃肠出血或两者。8.根据权利要求5所述的方法，其中所述肝毒性包括窦状扩张、小叶中心肝细胞萎缩、胆管增殖和丙氨酸转氨酶升高中的一种或多种。9.根据权利要求5所述的方法，其中所述心脏毒性和/或肺毒性包括坏死性病灶。10.一种治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的个体施用有效量的至少一种Notch途径抑制剂和有效量的至少一种Wnt途径抑制剂。11.根据权利要求10所述的方法，其中与单独用所述至少一种Notch途径抑制剂观察到的毒性相比，所述方法导致毒性降低。12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述Notch途径抑制剂是γ-分泌酶抑制剂。13.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述Notch途径抑制剂抑制选自Notch1、Notch2、Notch3、Notch4、DLL1、DLL4、Jagged1和Jagged2的至少一种蛋白质。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述Notch途径抑制剂抑制选自Notch1、Notch2、Notch3和Notch4的至少两种蛋白质。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述Notch途径抑制剂抑制Notch1和Notch2。16.根据权利要求14所述的方法，其中所述Notch途径抑制剂抑制Notch2和Notch3。17.根据权利要求13至16中任一项所述的方法，其中所述Notch途径抑制剂是抗Notch抗体。18.根据权利要求17所述的方法，其中所述抗Notch抗体是抗NotchNRR抗体。19.根据权利要求17所述的方法，其中所述抗Notch抗体结合Notch的EGF样重复结构域。20.根据权利要求17所述的方法，其中所述抗Notch抗体选自：a)包含分别示于SEQIDNO:35至40的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的抗体；b)包含分别示于SEQIDNO:33和34的重链可变区和轻链可变区的抗体；c)包含分别示于SEQIDNO:27至32的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的抗体；d)包含分别示于SEQIDNO:25和26的重链可变区和轻链可变区的抗体；e)包含分别示于SEQIDNO:43、46、48、49、50和53的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的抗体；f)包含分别示于SEQIDNO:41和42的重链可变区和轻链可变区的抗体；g)包含分别示于SEQIDNO:58至60、64、67和71的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的抗体；h)包含分别示于SEQIDNO:55和56的重链可变区和轻链可变区的抗体；i)包含分别示于SEQIDNO:74、75、77和79-81的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的抗体；和j)包含分别示于SEQIDNO:72和73的重链可变区和轻链可变区的抗体k)包含分别示于SEQIDNO:243至248的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的抗体；和l)包含分别示于SEQIDNO:241和242的重链可变区和轻链可变区的抗体。21.根据权利要求17至20中任一项所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。22.根据权利要求21所述的方法，其中所述抗体是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。23.根据权利要求13所述的方法，其中所述Notch途径抑制剂抑制选自Jagged1和Jagged2的至少一种蛋白质。24.根据权利要求23所述的方法，其中所述Notch途径抑制剂抑制Jagged1和Jagged2。25.根据权利要求23或权利要求24所述的方法，其中所述Notch途径抑制剂是抗Jagged抗体。26.根据权利要求25所述的方法，其中所述抗Jagged抗体选自：a)包含分别示于SEQIDNO:108-113的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的抗体；b)包含分别示于SEQIDNO:106和107的重链可变区和轻链可变区的抗体；c)包含分别示于SEQIDNO:116-121的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的抗体；d)包含分别示于SEQIDNO:114和115的重链可变区和轻链可变区的抗体；e)包含分别示于SEQIDNO:124-129的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的抗体；f)包含分别示于SEQIDNO:122和123的重链可变区和轻链可变区的抗体；g)包含分别示于SEQIDNO:130和131的重链可变区和轻链可变区的抗体；h)包含分别示于SEQIDNO:134-139的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的抗体；i)包含分别示于SEQIDNO:132和133的重链可变区和轻链可变区的抗体；j)包含分别示于SEQIDNO:142-147的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的抗体；k)包含分别示于SEQIDNO:140和141的重链可变区和轻链可变区的抗体；l)包含分别示于SEQIDNO:150-155的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的抗体；m)包含分别示于SEQIDNO:148和149的重链可变区和轻链可变区的抗体；n)包含分别示于SEQIDNO:158-163的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的抗体；o)包含分别示于SEQIDNO:156和157的重链可变区和轻链可变区的抗体；p)包含分别示于SEQIDNO:166-171的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的抗体；q)包含分别示于SEQIDNO:164和165的重链可变区和轻链可变区的抗体；r)包含分别示于SEQIDNO:174-179的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的抗体；s)包含分别示于SEQIDNO:172和173的重链可变区和轻链可变区的抗体；t)包含SEQIDNO:258的HVR-H1、和选自SEQIDNO:259和260的HVR-H2、和SEQIDNO:261的HVR-H3、和SEQIDNO:262的HVR-L1、和选自SEQIDNO:263至266的HVR-L2；和SEQIDNO:267的HVR-L3的抗体；u)包含选自SEQIDNO:273至277的重链可变区和选自SEQIDNO:268至272的轻链可变区的抗体；v)包含SEQIDNO:278的HVR-H1、和选自SEQIDNO:279至281的HV...

【专利技术属性】
技术研发人员：F·德索瓦热，C·西贝尔，B·比尔斯，H·田，O·克莱恩，
申请(专利权)人：基因泰克公司，加利福尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：美国;US