人参多糖在制备保护血管内皮细胞药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种人参多糖在制备保护内皮细胞的药物中的应用，实验证实通过致癌化学物质和/或机械损伤对内皮细胞进行处理后，该药物对血管内皮细胞具有一定的保护作用，同时还可以上调一氧化氮(NO)分泌，减少内皮素‑1(ET‑1)表达，改善内皮细胞分泌功能。进一步发现，D900能够逆转内皮诱导的肿瘤细胞刺激，比如通过降低内皮细胞中致癌物质的诱导活化。故可以证实，本发明专利技术中药组合物可有效保护内皮细胞。

The application of ginseng polysaccharide in the preparation of protective endothelial cell drugs

The invention discloses a pharmaceutical preparation of ginseng polysaccharide in protecting endothelial cells in experimental application, confirmed by carcinogenic chemical and / or mechanical injury to the endothelial cells after the treatment, the drug has a protective effect on vascular endothelial cells, but also can increase the nitric oxide (NO) secretion, reduce endothelial in 1 (ET 1) expression, improve endothelial cell secretion function. It is also found that D900 can reverse the stimulation of endothelial induced tumor cells, such as by reducing the induced activation of carcinogens in endothelial cells. It can be proved that the traditional Chinese medicine composition can effectively protect the endothelial cells.

【技术实现步骤摘要】
人参多糖在制备保护血管内皮细胞药物中的应用
本专利技术涉人参多糖的用途，具体的，涉及人参多糖在制备保护内皮细胞药物或保健食品中的应用。
技术介绍
人参是一种在亚洲和北美发现的生长缓慢的植物，它的根和叶被认为具有重要的医药价值，几个世纪以来，人参被广泛的应用于植物药、传统医药和保健品中。研究发现,从人参中分离出的多糖成分具有杀伤肿瘤细胞和诱导巨噬细胞产生细胞因子的活性。人参多糖中的人参果胶是人参中的另一种有效成分，表现出多种生物活性，如增强机体免疫能力、辅助防治肿瘤、显著抑制肝损伤和降血糖等。人参多糖是由糖醛酸及各种中性糖组成的酸性杂多糖，酸性多糖(RGAP)分离自人参不溶于乙醇而溶于水的部分,化学成分检测发现其含有56.9%酸性糖和28.3%中性糖,蛋白质含量低于0.1%，研究表明糖醛酸本身或含有糖醛酸结构单元的低聚糖或多糖常显示出十分重要的生物活性。近年来，我国类似人参等的名贵中药材资源越来匮乏，但是利用方式依然相当的落后。例如，每年有数十吨人参用于生产人参精、人参酒等保健产品或中成药制剂中，在生产中仅利用人参有效成分的4％～5％，但是多数都是利用醇提的人参皂苷入药使用，而醇提后的废渣则被遗弃，其余的则被废弃或作为饲料添加剂，十分可惜。其实，在常规的人参提取废料中含有一些具有显著保健作用的有效成分，如人参酸性多糖，则并没有得到合理的利用。本专利技术工艺本着变废为宝的理念，以人参醇提后的药渣的为原料对人参酸性多糖的制备工艺进行了研究，尤其涉及一种从人参醇提后药渣中提取人参酸性多糖的制备方法。人参发挥作用的确切机制还在研究之中，但目前已分离出其中的一些成分。例如，研究发现从人参中分离得到的人参皂苷和gintonins对包括肿瘤细胞在内的一系列细胞具有生物学作用。gintonins是溶血磷脂酸受体配体，可以抑制由ATX诱导的黑色素瘤细胞的趋化作用。ATX是肿瘤细胞趋化作用的诱导剂(Hwangetal2013)。gintonins可以通过减少淀粉样蛋白的沉积抑制阿尔茨海默病(Hwangetal2012)。其还可以通过Ca2+/CaM复合物与KCNQ1亚基C端的结合激活人心脏延迟整流钾通道(Choietal2014)。人参多糖是从人参中提取的另一种成分，人参多糖具有不同的分子量。北美人参中分离得到的高分子量多糖，能够通过MAPK、PI3K及p38通路介导的细胞因子的表达刺激免疫调节(Lemmonetal2012)，其可以通过提高细胞的新陈代谢减弱缺血再灌注损伤(Chenetal2012)。该多糖对结肠癌细胞具有毒性(Kingetal2009)。目前已有大量的关于人参多糖的体内外作用的研究，但关于其对内皮细胞作用的研究却很少。人参中的其它成分如人参皂苷能够抑制LPS诱导的血管内皮细胞黏附因子的表达(Choetal2014)。来自人参三七的阿拉伯半乳聚糖具有抑制血管生成的作用(Wangetal2015)。在体内，健康志愿者给予人参皂苷提取物和人参根后可以改善血流介导的血管舒张(Jonanovskietal2014)。上述结果与该作者的另一篇文献一致，人参皂苷及人参多糖都可以影响动脉的舒张活性(Jonanovskietal2010)。人参皂苷也可以抑制HUVEC细胞的增殖活性(Yueetal2006)。人参皂苷对内皮细胞的作用似乎是依赖于不同的组分，如Rg3抑制生长和血管生成(Yueetal2006)，而Rg1刺激生长和血管生成(Yueetal2005)。同一植物的一种化合物中的不同组分具有完全不同的效果。该研究还有一个令人关注的发现，人参多糖提取物不影响血流调节的血管舒张。人参皂苷还可以抑制LPS诱导的肠系膜小静脉漏出(Zhangetal2014)。内皮细胞，是分布在脑、淋巴结、肺、肝脏、脾脏等等器官组织中的一些有共同特点的吞噬细胞的总称，他们吞噬异物、细菌、坏死和衰老的组织，还参与集体免疫活动。内皮细胞能合成和分泌多种生物活性物质，调节机体功能。内皮素(ET)是1988年从猪的主动脉内皮细胞中分离纯化出的一种21个氨基酸组成的血管活性多肽。主要分布于肾、肝、心、脑、主动脉和静脉血管内皮细胞中,是一种内源性常效和强效的血管收缩剂,能引起血管收缩、血小板聚集和平滑肌细胞增殖。1980年首次发现的血管内皮舒张因子(EDRF)现已证实为一氧化氮(NO)。它来源于内皮细胞、脑神经细胞、非肾上腺非胆碱能神经上皮细胞(NANC)及被毒素、细胞因子激活的巨噬细胞和平滑肌细胞。NO一方面具有舒张血管作用,另一方面作为细胞内部及细胞间传递生物信息的信使在缺血等病理条件下发挥作用。内皮素和一氧化氮都是重要的内皮因子。研究提示血浆ET水平变化反应了缺血性脑血管疾病的病情严重程度。本研究发现人参提取成分对内皮细胞的作用，研究人参多糖对血管内皮细胞功能、相关信号通路及与肿瘤细胞相互作用三个方面的的潜在影响。本研究的目的是对人参多糖在内皮细胞完整性、功能提供一个全面的评价，并为以后的生物学和药理学研究提供坚实的基础。
技术实现思路
本专利技术涉及人参多糖的新用途，具体地，涉及人参多糖在制备保护内皮细胞药物或保健食品中的应用。本专利技术所述的人参多糖是人参药材经提取得到，或者人参经制药后的副产物。本专利技术所述人参多糖的制备方法由以下步骤组成：a、药材提取：取人参药材，粉碎，加水提取，提取液浓缩得浓缩液，备用；b、醇沉：将步骤a所得浓缩液加入乙醇，至乙醇浓度到50%-80%，0-4℃冷藏静置24-48小时，得醇沉液；c、离心：将步骤b所得醇沉液离心，收集沉淀，得人参多糖沉淀；d、干燥：将步骤c所得的人参多糖沉淀40-80℃减压干燥，得人参多糖。本专利技术优选的人参多糖的制备方法如下：a、药材提取：取人参药材，粉碎过20目筛，加药材量的6-10倍量水提取2次，每次2小时，提取液浓缩至1ml含有1g药材的浓缩液，备用；b、醇沉：将步骤a所得浓缩液加入乙醇，至乙醇浓度到70%，0-4℃冷藏静置48小时，得醇沉液；c、离心：将步骤b所得醇沉液离心，收集沉淀，得人参多糖沉淀；d、干燥：将步骤c所得的人参多糖沉淀60℃减压干燥，得人参多糖。本专利技术所述人参多糖的制备方法为采用超临界辅助热水浸提法。本专利技术所述人参多糖的制备方法为纤维素酶法。人参多糖的制备方法优选为：人参醇提后药渣经水提取，水提液离心，上清液浓缩后醇沉，沉淀以水溶解后，酶解，脱色、离心，取上清液，滤膜过滤后浓缩、醇沉，得人参多糖。人参多糖的制备方法还为：称取人参醇提后的药渣，每次加入15-25倍量的水，水提2次，合并水提液离心去沉淀，上清液经减压浓缩，加入乙醇制成醇浓度为45-75%醇溶液，醇沉过夜，离心，沉淀经60%醇洗脱两次，沉淀用水充分溶解，65℃时，加入0.19%-0.31%的中温淀粉酶，酶解22-37分钟，加入0.75%-1.25%的多糖专用大孔径活性炭，脱色30-50分钟，离心，去除活性炭，上清液经微孔滤膜过滤，溶液减压浓缩，加入乙醇制成醇浓度为45-75%醇溶液，醇沉过夜，离心，沉淀经60%醇洗脱两次，沉淀挥尽乙醇，得人参多糖。人参多糖优选为酸性人参多糖，所述酸性人参多糖是由以下步骤制成：A．制备人参粗多糖：称取人参醇提后的药渣，每次加入15-25倍量的水，水提2次，合并水提液离心去沉淀，上清本文档来自技高网...

【技术保护点】
人参多糖在制备保护内皮细胞药物或保健食品中的应用。

【技术特征摘要】
1.人参多糖在制备保护内皮细胞药物或保健食品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述人参多糖的制备方法为人参药材经提取得到。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述人参多糖的制备方法由以下步骤组成：a、药材提取：取人参药材，粉碎，加水提取，提取液浓缩得浓缩液，备用；b、醇沉：将步骤a所得浓缩液加入乙醇，至乙醇浓度到50%-80%，0-4℃冷藏静置24-48小时，得醇沉液；c、离心：将步骤b所得醇沉液离心，收集沉淀，得人参多糖沉淀；d、干燥：将步骤c所得的人参多糖沉淀40-80℃减压干燥，得人参多糖。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述人参多糖的制备方法如下：a、药材提取：取人参药材，粉碎过20目筛，加药材量的6-10倍量水提取2次，每次2小时，提取液浓缩至1ml含有1g药材的浓缩液，备用；b、醇沉：将步骤a所得浓缩液加入乙醇，至乙醇浓度到70%，0-4℃冷藏静置48小时，得醇沉液；c、离心：将步骤b所得醇沉液离心，收集沉淀，得人参多糖沉淀；d、干燥：将步骤c所得的人参多糖沉淀60℃减压干燥，得人参多糖。5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于人参多糖的制备方法为采用超临界辅助热水浸提法或纤维素酶法。6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于人参多糖的制备方法为：人参醇提后药渣经水提取，水提液离心，上清液浓缩后醇沉，沉淀以水溶解后，酶解，脱色、离心，取上清液，滤膜过滤后浓缩、醇沉，得人参多糖。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于人参多糖的制备方法为：称取人参醇提后的药渣，每次加入15-25倍量的水，水提2次，合并水提液离心去沉淀，上清液经减压浓缩，加入乙醇制成醇浓度为45-75%醇溶液，醇沉过夜，离心，沉淀经60%醇洗脱两次，沉淀用水充分溶解，65℃时，加入0.19%-0.31%的中温淀粉酶，酶解22-37分钟，加入0.75%-1.25%的多糖专用大孔径活性炭，脱色30-50分钟，离心，去除活性炭，上清液经微孔滤膜过滤，溶液减压浓缩，加入乙醇制成醇浓度为45-75%醇溶液，醇沉过夜，离心，沉淀经60%醇洗脱两次，沉淀挥尽乙醇，得人参多糖。8.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述人参多糖为酸性人参多糖，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏聪，赵韶华，姚兵，常丽萍，葛兰，徐蓓，
申请(专利权)人：河北以岭医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13