含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法技术
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种精华液的制备方法，具体涉及含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法。
技术介绍
间充质干细胞是指具有三胚层分化潜能的一类干细胞亚群，在特定环境下，理论上可以诱导分化为人体任何一种组织细胞，主要来源于人体中广泛存在的间质组织，特别是骨髓、脂肪、脐带和胎盘等，由于其具有强大的增殖能力，较强的分化能力，低免疫原性和免疫调节功能，其在临床上的应用价值越来越受人们关注。随着对间充质干细胞研究的不断深入，其分泌因子已成为研究的热点。间充质干细胞可以分泌多种细胞因子，这些细胞因子可有效地调控机体细胞信号传导、活化人体干细胞，进而生理性修复或替代机体损伤、病变及衰老的细胞。同时干细胞内部含有大量的生物活性物质，已报道的干细胞裂解液中包含血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、IL-6与IL-7、巨核细胞集落刺激因、肿瘤坏死因子、干扰素等因子、脱氧核糖核酸及核糖核酸、活性多肽、以及免疫蛋白IgG、IgA、IgM、IgD、IgE等，这些物质可以促进机体干细胞生长、增殖，起到活化干细胞作用。细胞因子和活性物质添加到美容化妆品，不仅具有保湿美白功效，...
【技术保护点】
含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法，其特征在于：经过人间充质干细胞因子冻干粉的制备、溶媒的制备和混合步骤完成含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法，所述步骤具体如下：a.人间充质干细胞因子冻干粉的制备：经过人间充质干细胞的分离与培养、细胞传代、间充质干细胞的鉴定、上清液的收集、上清液的浓缩和冻干粉的制备步骤完成人间充质干细胞因子冻干粉的制备；所述具体步骤如下：（1）人间充质干细胞的分离与培养：将健康的人脐带、胎盘、脂肪组织放入百级超净台内，洗涤消毒后，加入浓度为0.1‑0.5%混合胶原酶，在37℃，120‑180rpm震荡消化6‑50 min，补充等量生理盐水，150目...
【技术特征摘要】
1.含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法，其特征在于：经过人间充质干细胞因子冻干粉的制备、溶媒的制备和混合步骤完成含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法，所述步骤具体如下：a.人间充质干细胞因子冻干粉的制备：经过人间充质干细胞的分离与培养、细胞传代、间充质干细胞的鉴定、上清液的收集、上清液的浓缩和冻干粉的制备步骤完成人间充质干细胞因子冻干粉的制备；所述具体步骤如下：（1）人间充质干细胞的分离与培养：将健康的人脐带、胎盘、脂肪组织放入百级超净台内，洗涤消毒后，加入浓度为0.1-0.5%混合胶原酶，在37℃，120-180rpm震荡消化6-50min，补充等量生理盐水，150目筛网过筛，收集细胞初悬液，将细胞初悬液经三次梯度离心后，取离心得到的沉淀加入专用培养基重悬，将细胞悬液接种于培养瓶内，放入37℃，5%的CO2培养箱内培养，待细胞长至85%汇合度，进行细胞传代；（2）细胞传代：倒掉无菌培养瓶内的培养基，用浓度为0.9%的生理盐水洗涤细胞表面两次，加入5ml浓度0.075%-0.125%的胰蛋白酶消化，显微镜下观察到细胞开始变圆，加入等量培养液终止消化，将脱落的细胞和培养液转移到离心管内，离心，将离心所得的细胞沉淀用培养基重悬，接种进行P1代培养，待细胞长至85%以上汇合度，将P1代细胞消化后以500-800万/ml的密度加入冷冻保护液低温保存备用；（3）间充质干细胞的鉴定：随机抽取P1-P10代细胞进行流式鉴定，吸取100µl细胞悬液，加5µl抗体，在常温下孵育20min，然后加400µl的磷酸盐缓冲液，振荡混匀，转移到1.5ml的EP管内，1200rpm，离心6min，弃上清，然后再加入400µl的磷酸盐缓冲液吹打后转移到上样管内上机；（4）上清液的收集：从液氮中复苏一支间充质干细胞，将细胞接种至T175培养瓶中，加入40ml培养液，放入37℃，5%CO2培养箱培养，每三天将细胞1：3传代培养，在细胞传至P4时将细胞接种至四层细胞工厂，连续培养至P10代，收集全部上清，做好标识，同时将细胞消化下来，用培养液重悬后置于-80度备用；（5）上清液的浓缩：将收集的干细胞培养上清经0.22µm的滤膜过滤，然后通过分子量为50KD的Vivaflow50回旋流/切向流超滤器进行干细胞上清液的浓缩，接着将浓缩液通过分子量为3KD的Vivaflow50回旋流/切向流超滤器，收集截留液，即为细胞因子浓缩液；（6）冻干...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢再东，殷鉴强，王军霞，
申请(专利权)人：领航干细胞再生医学工程有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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