一种人胎盘来源自然杀伤细胞制剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种人胎盘来源自然杀伤细胞制剂及其制备方法，人胎盘来源自然杀伤细胞

【技术实现步骤摘要】
一种人胎盘来源自然杀伤细胞制剂及其制备方法


[0001]本专利技术涉及细胞培养
，具体是指一种人胎盘来源自然杀伤细胞制剂及其制备方法
。

技术介绍

[0002]NK
细胞在
1975
首次被科学家发现，由于其发挥杀伤活性不需要预先刺激，因此在人类恶性肿瘤细胞免疫治疗中具有很大潜力
。NK
细胞起源于骨髓中共同淋巴祖细胞，之后广泛分布在淋巴和非淋巴组织，包括骨髓
、
淋巴结
、
脾
、
外周血
、
肺
、
肝
、
脐带血
、
胎盘等
。
[0003]过继性
NK
细胞免疫治疗是通过将体外激活扩增的自体或异体免疫细胞输注肿瘤宿主体内的一种肿瘤治疗方法
。
自然杀伤
(Natural killer
，
NK)
细胞具有广谱的肿瘤杀伤效果，杀伤机制包括
:FasL
与
>Fas
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种人胎盘来源自然杀伤细胞制剂，其特征在于：由胎盘来源的
NK
细胞和基质溶液组成；所述基质溶液由右旋糖酐
40
葡萄糖注射液
、5
‑
10
％人血白蛋白，
20
％
、0.01
‑
0.05
％维生素
C
，
2.5ml:1g、10
‑
20ug/ml
胸腺肽注射液，
2ml:5mg、0.20
‑
0.40ug/ml
重组
IL
‑
15
，
1ml:1mg、1
‑
10uM
辅酶
Q10
构成；所述
NK
细胞是由人胎盘叶状绒毛组织经洗涤
、
酶消化分离获得单个核细胞，经体外诱导扩增获得的
CD3
‑
CD56
+
CD16
+
NK
细胞
。2.
根据权利要求1所述的一种人胎盘来源自然杀伤细胞制剂，其特征在于：
NK
细胞的浓度维持在
0.8
‑
1.2
×
107/ml
，所述的右旋糖酐
40
葡萄糖注射液中右旋糖酐浓度为6％，葡萄糖浓度为5％
。3.
根据权利要求1所述的一种人胎盘来源自然杀伤细胞制剂，其特征在于，
NK
细胞制备包括如下步骤：步骤一：将新鲜采集的胎盘放到无菌托盘内，用含1‑2％三抗
+200
‑
400IU/ml
肝素锂的生理盐水冲洗胎盘外表面2‑3次去除表面上的凝血污渍，剪掉脐带
、
羊膜
、
底蜕膜等组织；步骤二：剪取胎盘叶状绒毛组织，转移至无菌玻璃皿中，用无菌剪刀将组织剪碎呈
0.2
‑
0.5mm3的组织块，每
50ml
组织块补充
100ml
生理盐水，将组织转移到
200
目筛网上过滤，并用
200
‑
400ml
的生理盐水冲洗组织块，收集滤网上的组织块，每管
20ml,
加入等体积的1×
组织消化液放入恒温摇床，
37℃
，
150
‑
180rpm,
震荡消化
10
‑
20min
；步骤三：待组织消化均匀，加入3‑4倍生理盐水稀释，将消化后的组织液过
200
目的筛网，滤液经
2000
‑
2500rpm
离心
10min
，收集底部细胞沉淀，用生理盐水重悬细胞沉淀
。
将
15
‑
25ml
细胞悬液加入到淋巴分离管内
2000rpm
，离心
10
‑
15min
，取白膜层，补充生理盐水至
50ml
，
2000rpm
，离心
8min
，弃上清，将细胞沉淀用
1640
培养基
+5
％血清替代物重悬后，按1‑5×
107/ml
密度接种于
T75
或
T175
培养瓶中，放于
37℃5
％
CO2
培养箱中孵育2‑
3h,
去除贴壁基质细胞，剩余细胞经
2000rpm
，离心8‑
10min
，弃上清，底部沉淀即是单个核细胞，即
MNC
，取...

【专利技术属性】
技术研发人员：王军霞，谢再东，潘春雷，吴锋，殷鉴强，刘定生，朱建荣，
申请(专利权)人：领航干细胞再生医学工程有限公司，
类型：发明
国别省市：