本发明专利技术公开了一种靶向表达EGFR肿瘤细胞的前抗体偶联药物及其应用，在本发明专利技术中，通过稳定的非还原硫醚键将美登素衍生物（DM1）连接到PanP上，制备得到靶向表达EGFR肿瘤细胞的前抗体偶联药物PanP‑DM1。本发明专利技术提供的一种靶向表达EGFR肿瘤细胞的前抗体偶联药物PDC，其具有高效能及肿瘤的选择性，且经实验证明前抗体偶联药物具有较小的对正常组织的毒副作用。
Pre antibody coupling medicine for targeting EGFR tumor cell and its application
The invention discloses a targeted expression of EGFR tumor cells before antibody drug conjugates and its application in the invention, by the non maytansine derivatives thioether bond reduction stable (DM1) connected to the PanP, prepared before targeting antibody drug conjugates PanP DM1 expression of EGFR in tumor cells. The invention provides a targeted first antibody drug conjugates PDC EGFR expression in tumor cells, which has high efficiency and tumor selectivity, and the experiments prove that the toxicity to normal tissue before antibody drug conjugates have smaller.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，更具体地，本专利技术公开了一种靶向表达EGFR肿瘤细胞的前抗体偶联药物及其应用。
技术介绍
表皮生长因子受体(EGFR)是一种跨膜受体酪氨酸激酶，在肿瘤进展中有着重要作用。过度的EGFR激活和肿瘤的发生及转移相关。据报道，60%-80%的结肠癌有EGFR的过度表达。另外，EGFR也是预测结直肠癌和乳腺癌的重要标志物。更重要的是EGFR位于癌细胞表面，因此是开发靶向抗体的理想靶点。抗体可以特定地结合到EGFR的胞外区III结构域，不仅阻止了配体的结合,而且阻止了在结构域II上延伸结构域的二聚体化（LiS,etal.Structuralbasisforinhibitionoftheepidermalgrowthfactorreceptorbycetuximab[J].CancerCell,2005,7(4):301-311.；IidaM,etal.Sym004,anovelEGFRantibodymixture,canovercomeacquiredresistancetocetuximab[J].Neoplasia,2013,15(10):1196-1206.）经FDA批准的靶向EGFR的抗体包括西妥昔单抗和帕妥木单抗。它们被用于在临床上治疗KRAS野生型的进展性结肠癌。表皮生长因子受体（即EGFR）也称作c-erbBl/Herl，其家族成员都是生长因子受体酪氨酸激酶，它们在细胞表面与特异的生长因子或天然配体相互作用，如与EGF或TGFa相互作用，由此活化受体酪氨酸激酶。已发现的该家族第一个成员是表观分子量为165KD的糖蛋白。EGFR在调节肿瘤细胞的生长、修复和生存、新生血管生成、侵袭和转移中具有重要的作用，同时在相当一部分的人类肿瘤中都有表达。在很多恶性肿瘤中，EGFR的表达往往与较差的预后和较低的生存率相关。由此可知，如果有药物能阻断EGFR的活性，将会抑制其磷酸化和信号传导，从而起到多重途径的抗肿瘤作用，同时也能增加化疗和放疗的抗肿瘤疗效。在一些研究中，EGFR抑制剂与多种化疗药物和放疗药物联合作用于一些肿瘤细胞株时，表现出累加和协同作用。EGFR抑制剂主要包括单克隆抗体、酪氨酸激酶抑制剂、喹唑啉pyralo-/吡咯并-/吡啶并嘧啶、配体-毒素和免疫毒素联结物，以及反义核苷酸和EGFR/配体主导的疫苗等。一些体内和体外实验显示抗EGFR抗体成功的抑制了表达EGFR的肿瘤细胞株的生长。在实体瘤的治疗中，一些抗EGFR单克隆抗体单独应用或与传统治疗方法合并应用的治疗结果令人鼓舞。现有技术中已经描述了多种小鼠的抗EGFR单克隆抗体，可与EGFR高特异的结合，这些抗体大致可分为两类，一类是可与受体结合但不抑制EGF结合的抗体，另一类是可与受体结合并且还抑制EGF结合的抗体。但是患者对鼠源抗体产生的免疫应答限制了这些抗体在人类治疗和体内诊断中的应用。患者会产生人抗小鼠抗体反应（HAMA），从而限制了抗体到达其抗原靶标的能力，使抗体的效能降低。一些研究人员为了减少HAMA反应，研制出了人鼠嵌合的抗体，其中小鼠可变区（V）与人恒定区（C）连接。该抗体证明在临床上好于鼠源抗体，但是嵌合抗体的小鼠V区中仍然含有使患者产生免疫原性的成分，限制了其应用。目前已有全人源抗体Panitumumab（WO9850433）被应用于治疗生长因子过度表达的疾病中。Panitumumab（E7.6.3，ABX-EGF，AMG954，商品名：Vectibix，中文名：帕尼单抗）为全人源单克隆抗体，其结构为IgG2κ，其作用靶点为表皮生长因子受体（EGFR，ErbB-1或HER1），该抗体主要用于治疗表达表皮生长因子受体的转移性结直肠癌。Panitumumab是利用XenoMouse技术制备的全人源抗体，不良免疫应答的发生几率很低。通过结合到EGFR的胞外区，单克隆抗体介导了直接的效应机制，导致了封闭配体结合，受体下调，细胞周期阻滞及诱导凋亡的作用，并且引起了针对癌细胞的免疫调节机制，例如ADCC效应及CDC效应。然而并非所有的抗体都可以介导ADCC效应，IgG1比IgG2有更强的引发ADCC效应的能力。尽管EGFR是抗癌治疗中一个有效的靶点，但针对EGFR的抗体也可以靶向其他正常组织，如：肝脏，皮肤和胃肠道等正常组织，这可能形成剂量限制性的副反应及不同类型的毒副作用。帕尼单抗是一种全人的IgG2型单克隆抗体，可以特异性地结合EGFR，且有较高的亲和力。使用帕尼单抗进行治疗具有免疫原性低及超敏反应发生率低的优势。Vogit等的实验结果表明了帕尼单抗在EGFR上的结合位点与西妥昔并非完全一致（VoigtM,Functionaldissectionoftheepidermalgrowthfactorreceptorepitopestargetedbypanitumumabandcetuximab.Neoplasia2012;14:1023-31），但对西妥昔耐药的患者对帕尼治疗敏感（西妥昔耐药：第492位丝氨酸突变为精氨酸），与上述结论相一致，这解释了对西妥昔耐药的患者对帕尼治疗敏感的原因（MontagutC,IdentificationofamutationintheextracellulardomainoftheEpidermalGrowthFactorReceptorconferringcetuximabresistanceincolorectalcancer.NatMed2012;18:221-3）然而，作为一种IgG2型抗体，它缺乏了巨噬细胞和NK-细胞介导的经典的ADCC效应。最近的研究结果表明，缺乏ADCC效应可能会限制帕尼单抗在体内发挥功能效应。在此之前，帕尼单抗选择了IgG2的亚型被认为可以尽量降低潜在的因ADCC效应及CDC效应引起的皮肤毒性（KasperS,OncogenicRASsimultaneouslyprotectsagainstanti-EGFRantibody-dependentcellularcytotoxicityandEGFRsignalingblockade.Oncogene2012）。因此，考虑到增强这些效应可能增加的皮肤毒性，尚未有通过改造帕尼单抗增加其ADCC效应的报道。包括帕尼单抗在内的抗-EGFR的抗体引起皮肤毒性的主要特征是红疹，痤疮，瘙痒及皮肤干燥。尽管由EGFR抑制剂导致的皮肤毒性的机制尚不清楚，越来越多研究都认为在角质细胞中的EGFR信号通路对于皮肤炎症反应的发生起到了关键的作用。因此，识别肿瘤特异性EGFR表位的抗体有可能消除潜在的相关副作用。最近的研究显示了在临床前研究中使用的新型probody技术能够在一定程度上限制EGFR抗体对皮肤的毒副作用。probody技术（WO2010096838）是由美国Cytomx生物公司开发的一种“抗体前药”或称作“基于抗体的前药”技术。其通过对传统抗体的改造使之具有在人的正常组织保持“沉默”，即减少其对正常组织表达的相应靶点的结合；而在抗体达到肿瘤部位后借助肿瘤微环境中特异性表达的蛋白酶如：uPA（尿激酶型纤溶酶原激活物）激活而成为和改造前抗体等效的治疗用药物。它在抗肿瘤治疗中可以提高抗体的靶本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种靶向表达EGFR肿瘤细胞的前抗体偶联药物，其特征在于，含有蛋白酶激活型抗体和细胞毒性药物。
【技术特征摘要】
1.一种靶向表达EGFR肿瘤细胞的前抗体偶联药物，其特征在于，含有蛋白酶激活型抗体和细胞毒性药物。2.根据权利要求1所述一种靶向表达EGFR肿瘤细胞的前抗体偶联药物，其特征在于，所述的前抗体重链具有SEQIDNO：2所示的氨基酸序列，所述前抗体轻链具有SEQIDNO：4所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述一种靶向表达EGFR肿瘤细胞的前抗体偶联药物，其特征在于，所述细胞毒性...
【专利技术属性】
技术研发人员：钱卫珠，
申请(专利权)人：上海张江生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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