一种处理支原体污染的试剂、及其试剂盒和处理方法技术

本发明专利技术公开了一种处理支原体污染的试剂、及其试剂盒和处理方法，所述试剂为包含抗生素太妙菌素、二甲胺四环素和抗生素环丙沙星的溶液；其中，所述抗生素太妙菌素、所述二甲胺四环素与所述二甲胺四环素，三者的浓度比值为4：1：3。本发明专利技术的处理支原体污染的试剂、及其试剂盒和处理方法，采用了特定比例的抗生素太妙菌素、二甲胺四环素与二甲胺四环素的三者的组合，能显著提高支原体污染处理的效果；并且能够简便、安全且快速有效地处理支原体污染的问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种处理支原体污染的试剂、及其试剂盒和处理方法，属于生物

技术介绍
支原体(Mycoplasma)污染是细胞培养过程中最常见的污染之一，特别是在哺乳动物细胞的培养过程中，支原体污染问题尤其令人头疼，主要原因有以下三点：1)支原体体积非常小，直径为0.1μm，一般过滤除菌无法去除，光学显微镜下难以看清它的形态结构；2)支原体生命力顽强，能在偏碱条件(pH 7.6～8.0)下生存，且对青霉素有抗药性；3)细胞受支原体污染初期，部分敏感细胞可见细胞生长增增殖变慢、形态变圆。但多数细胞污染后无明显变化，或略有变化，若不及时处理，还会产生交叉污染。支原体最终会导致细胞死亡，不过更常见的情况是，支原体与细胞共存；在这过程当中，支原体慢慢增殖，直至对细胞产生明显的影响，如干扰细胞迁移、信号转导、淋巴细胞活化和细胞因子表达。对于相关科研工作者来说，最可怕的是支原体污染在不知不觉中改变许多参数，使研究成果的可信度大打折扣，甚至造成重大损失。遭受支原体污染的细胞一般被直接扔弃；但有一些特殊的情况下，需要保留细胞；因此在确认发生支原体污染后，需要通过一些比较特殊的实验进行处理来保留细胞。因此需要一种能够处理支原体污染、并能够拯救被污染的细胞的处处理试剂盒。
技术实现思路
鉴于相关技术的上述问题和/或其他问题，本专利技术一方面提供了一种处理支原体污染的试剂，所述试剂为包含抗生素太妙菌素、二甲胺四环素和抗生素环丙沙星的溶液；其中，所述抗生素太妙菌素、所述二甲胺四环素与所述二甲胺四环素，三者的浓度比值为4：1：3。优选的，所述试剂为所述抗生素太妙菌素、二甲胺四环素和抗生素环丙沙星溶解于无菌双蒸水所形成的溶液。本专利技术另一方面提供了一种处理支原体污染的试剂盒，所述试剂盒包括上述的试剂。优选的，所述抗生素太妙菌素的浓度为20mg/ml，所述二甲胺四环素的浓度5mg/ml，所述抗生素环丙沙星的浓度为15mg/ml。优选的，所述试剂盒中，所述试剂的规格为100ml、50ml、20ml或10ml。本专利技术再一方面提供了一种处理支原体污染的方法，其中，将上述的试剂，或者上述试剂盒中的试剂与新鲜培养基混合以获得抗生素培养基，所述抗生素培养基中的所述抗生素太妙菌素的浓度为20mg/ml，所述二甲胺四环素的浓度5mg/ml，所述抗生素环丙沙星的浓度为15mg/ml；将待处理的细胞培养物添加到所述抗生素培养基中，培养3天后，舍弃旧的培养基；再更换新的所述抗生素培养基，培养3天；如此循环，直至检测不到支原体污染情况。优选的，所述待处理的细胞培养物的培养条件如下：细胞培养密度大约为50000～100000个/ml，温度37℃以及5％CO2。与现有技术相比，本专利技术的处理支原体污染的试剂、及其试剂盒和处理方法，采用了抗生素太妙菌素、二甲胺四环素与二甲胺四环素的组合，并且专利技术人经过大量试验研究意外地发现，特定比例的三种抗生素的组合，能够更有效的处理支原体污染的问题，并且三者特定比例的组合的效果远优越于抗生素太妙菌素与二甲胺四环素组合的效果，这说明了二甲胺四环素与抗生素太妙菌素、二甲胺四环素之间存在一定的协同效应，能显著提高支原体污染处理的效果；另外，本专利技术的处理支原体污染的试剂、及其试剂盒和处理方法还具有以下优点：1)操作简便：可以直接处理细胞培养过程中出现的支原体污染现象，处理试剂无需再溶解；2)使用安全：专门为杀灭支原体而设计，最大化的减少对常规培养细胞的伤害；3)快速有效：本试剂盒针对支原体的生物特性，采用最有效的成分，以达到快速、有效处理支原体污染的目的；总的来说，能够简便、安全且快速有效地处理支原体污染的问题。附图说明图1a为采用实施例1试剂处理支原体污染后的支原体检测结果图；图1b为采用对比例1的抗生素培养基处理支原体污染后的支原体检测结果图；图1c为采用对比例2的抗生素培养基处理支原体污染后的支原体检测结果图。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术作进一步的说明，但本专利技术并不限于这些具体实施方式。实施例1：处理支原体污染的试剂以及试剂盒的配制以10ml规格的试剂盒为例：将200mg太妙菌素，50mg二甲胺四环素和150mg抗生素环丙沙星依次溶于10ml无菌双蒸水中，充分混匀，即得到配制好的处理支原体污染的试剂；然后，再将该试剂装配到试剂盒中。实施例2：处理支原体污染的方法将实施例1配制的试剂(或者说试剂盒中的试剂)，按照1:100的体积比例(即，稀释后的体积为实施例1的试剂体积的100倍)添加到新鲜的RMPI 1640培养基(待处理的细胞为293T细胞，其采用RMPI 1640培养基)中获得抗生素培养基，其中，抗生素太妙菌素的浓度为0.2mg/ml，二甲胺四环素的浓度0.05mg/ml，抗生素环丙沙星的浓度为0.15mg/ml。将待处理的细胞培养物添加到上述的抗生素培养基中，培养3天后，舍弃旧的培养基；再更换新的抗生素培养基，培养3天；如此循环，直至检测不到支原体污染情况。检测不到支原体污染情况后，可以进行正常的细胞培养或传代培养。在本实施例中，待处理的细胞培养物的培养条件如下：细胞培养密度大约为80000个/ml，温度37℃以及5％CO2。在本实施例中，经过3个循环后，基本上检测不到支原体污染情况了。效果数据实施例1的试剂与新鲜的RMPI 1640培养基混合后的抗生素培养基中，抗生素太妙菌素的浓度为0.2mg/ml，二甲胺四环素的浓度0.05mg/ml，抗生素环丙沙星的浓度为0.15mg/ml；总抗生素浓度为0.4mg/ml；对比例1：按照同样的方法，配制对比例1的抗生素培养基，其中，抗生素太妙菌素的浓度为0.32mg/ml，二甲胺四环素的浓度0.08mg/ml；总抗生素浓度为0.4mg/ml；对比例2：按照同样的方法，配制对比例2的抗生素培养基，其中，抗生素环丙沙星的浓度为0.4mg/ml；总抗生素浓度为0.4mg/ml；将待处理的细胞培养物分成3份，分别添加到实施例1的试剂配制的抗生素培养基、对比例1的抗生素培养基和对比例2的抗生素培养基，培养3天后，舍弃旧的培养基；再更换新的各自的抗生素培养基，培养3天；如此循环。每经历一个循环周期，取各自的培养物进行支原体检测，检测结果参图1a、1b和1c。参见图1a，采用实施例1的试剂，经历3个循环周期后，检测不到支原体污染情况了；然而，参见图1b和1c，对比例1和对比例2，在经历3个循环周期后，仍存在支原体污染情况。由此可以看出，同样的总抗生素浓度以及同样的处理方法，采用抗生素太妙菌素、二甲胺四环素与二甲胺四环素的三者的特定比例组合的试剂的支原体污染处理效果远优越于抗生素太妙菌素与二甲胺四环素两者组合的效果，也远优越于二甲胺四环素的处理效果，这说明了二甲胺四环素与抗生素太妙菌素、二甲胺四环素之间存在一定的协同效应，能显著提高支原体污染处理的效果。应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施方式中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本专利技术的可本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种处理支原体污染的试剂，其特征在于：所述试剂为包含抗生素太妙菌素、二甲胺四环素和抗生素环丙沙星的溶液；其中，所述抗生素太妙菌素、所述二甲胺四环素与所述二甲胺四环素，三者的浓度比值为4：1：3。

【技术特征摘要】
1.一种处理支原体污染的试剂，其特征在于：所述试剂为包含抗生素太妙菌素、二甲胺四环素和抗生素环丙沙星的溶液；其中，所述抗生素太妙菌素、所述二甲胺四环素与所述二甲胺四环素，三者的浓度比值为4：1：3。2.如权利要求1所述的试剂，其特征在于：所述试剂为所述抗生素太妙菌素、二甲胺四环素和抗生素环丙沙星溶解于无菌双蒸水所形成的溶液。3.一种处理支原体污染的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括如权利要求1至2中任意一项所述的试剂。4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述抗生素太妙菌素的浓度为20mg/ml，所述二甲胺四环素的浓度5mg/ml，所述抗生素环丙沙星的浓度为15mg/ml。5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中，所述试剂的规格为1...

【专利技术属性】
技术研发人员：张智培，熊延狮，
申请(专利权)人：上海逍鹏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31