一种通用型细胞处理试剂盒及其应用方法技术

一种通用型细胞处理试剂盒及其应用方法，涉及一种分离人类脐带血、骨髓和外周血中干细胞的试剂盒及该试剂盒的应用方法。包含有试剂A：细胞稀释剂、试剂B：高分子量的细胞沉淀剂和试剂C：中密度分层剂。其方法是先将脐带血、骨髓血或外周血与细胞稀释剂混匀，加入高分子量的细胞沉淀剂，静置30分钟后收取上清液，离心后收集浓缩液加入中密度分层剂离心20分钟，收集有核细胞层，用注射用盐水洗3次即可。本发明专利技术采用分子量为45-70万的细胞沉淀剂，分离出的有核细胞存活率≥98%，有核细胞收集率≥85%，且本发明专利技术所用方法简便、安全实用、造价低廉，可以工业化生产，易于推广。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种分离人类脐带血、骨髓和外周血中干细胞的试剂盒及该试剂盒的应用方法。
技术介绍
干细胞是正常人体内存在的细胞群体，具有高度自我复制和高度的分化能力，能有效治疗各种细胞损伤性疾病。目前，从人类脐带血、骨髓和外周血中分离提取干细胞的方法有许多种，主要方法有体外扩增培养、外周血细胞分选仪、淋巴细胞分离液等。体外扩增培养存在培养条件不易控制、产物不稳定、体外培养容易出现污染、多次复制后存在癌变的问题；外周血细胞分选仪只适用于外周血，外周血中只在极少量的造血干细胸骨，采集前需要用动员剂，操作复杂，最后分离得到的液体量大，红细胞去除不彻底；淋巴细胞分离液主要用于分离外周血中的单个核细胞，分离出来的细胞中淋巴细胞约占90%-95%，只有少量原始细胞，而淋巴细胞属于成熟细胞，不具备干细胞的特性。其它还有如磁珠法、荧光标记法、流式细胞仪法、加Lin抗体的红胞沉淀法、采用低分子量细胞沉淀法等方法，这些方法有的造价贵、病人难以承受价格；有的技术条件要求高，难以大规模生产；有的不能有效保留所有类型干细胞；有的细胞活性少、细胞液体积大、分离时间长、容易污染等，限制了临床应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上面所述缺陷，提供一种操作简便、安全实用、细胞活性高、 干细胞成分全的通用型细胞处理试剂盒。本专利技术的另一目的是提供一种通用型细胞处理试剂盒的应用方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案予以实现的。一种通用型细胞处理试剂盒，其特征在于，包含有试剂A 细胞稀释剂、试剂B:高分子量的细胞沉淀剂和试剂C 中密度分层剂。所述细胞稀释剂为0. 9%氯化钠。所述高分子量的细胞沉淀剂为高分子量羟乙基淀粉，分子量为45-70万。所述中密度分层剂由泛影葡胺和聚蔗糖400制成。所述中密度分层剂的密度为1. 05g/ml - 1. 09g/ml。所述高分子量的细胞沉淀剂、中密度分层剂与细胞稀释剂均为灭菌产品。一种通用型细胞处理剂试剂盒的应用方法首先将脐带血、骨髓血或外周血与细胞稀释剂混勻，加入高分子量的细胞沉淀剂，静置30分钟后收取上清液，离心后收集浓缩液加入中密度分层剂离心20分钟，收集有核细胞层，用注射用盐水洗3次即可。本专利技术的有益效果是本专利技术采用分子量为45-70万的细胞沉淀剂，分离出的有核细胞存活率> 98%，有核细胞收集率> 85%，且本专利技术所用方法简便、安全实用、造价低廉，可以工业化生产，易于推广。具体实施例方式实施例1 分离脐带血。试剂盒组成。试剂A :100ml (0. 9%氯化钠，市售有批准文号，灭菌产品)。试剂B:100ml (HESPAN分子量45-70万，美国进口灭菌产品)。试剂C 75 ml (由泛影葡胺和聚蔗糖400配成)。A液、B液细菌内毒素含量彡0. 5EU/ml，C液细菌内毒素含量彡lEU/ml。将含有枸橼酸钠抗凝脐带血IOOml与A液混勻；全部B液加入第一步的液体中。 容器封闭后充分混勻，室温静置约30分钟；用25ml移液管将上层液体移至50ml无菌离心管中，每管50ml于离心机中，2500rpm，离心5分钟；弃上清液，用生理盐水清洗离心管并转移至一只离心管中，定容至45-50ml处；所得细胞悬液沿离心管壁缓缓加入到装有25mlC 液的离心管中，离心管ISOOrpm，离心20分钟；离心后吸取中间云雾状的薄层加至新的离心管中，用注射用盐水液洗涤三次，收集细胞备用。实施例2:分离骨髓血。试剂盒组成。试剂A: IOOml (0. 9%氯化钠，市售有批准文号，灭菌产品)。试剂B :150ml (HESPAN分子量45-70万，美国进口灭菌产品)。试剂C 75 ml (由泛影葡胺和聚蔗糖400配成)。A液、B液细菌内毒素含量彡0. 5EU/ml，C液细菌内毒素含量彡lEU/ml。将含有枸橼酸钠抗凝骨髓200ml与A液混勻；全部B液加入第一步的液体中。容器封闭后充分混勻，室温静置约30分钟；用25ml移液管将上层液体移至50ml无菌离心管中，每管50ml于离心机中，2500rpm，离心5分钟；弃上清液，用生理盐水清洗离心管并转移至一只离心管中，定容至45-50ml处；所得细胞悬液沿离心管壁缓缓加入到装有25mlC液的离心管中，离心管ISOOrpm，离心20分钟；离心后吸取中间云雾状的薄层加至新的离心管中，用注射用盐水液洗涤三次，收集细胞备用。本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种通用型细胞处理试剂盒，其特征在于：包含有试剂Ａ：细胞稀释剂、试剂Ｂ：高分子量的细胞沉淀剂和试剂Ｃ：中密度分层剂。

【技术特征摘要】
1.一种通用型细胞处理试剂盒，其特征在于包含有试剂A 细胞稀释剂、试剂B 高分子量的细胞沉淀剂和试剂C 中密度分层剂。2.根据权利要求1所述的一种通用型细胞处理试剂盒，其特征在于所述高分子量的细胞沉淀剂为高分子量羟乙基淀粉，分子量为45-70万。3.根据权利要求1所述的一种通用型细胞处理试剂盒，其特征在于所述中密度分层剂由泛影葡胺和聚蔗糖400制成。4.根据权利要求1所述的一种通用型细胞处理试剂盒，其特征在于所述中密度分层剂的密度为 1. 05g/ml — 1. 09g/...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔慧斐，石勇，
申请(专利权)人：崔慧斐，江西益普生药业有限公司，
类型：发明
国别省市：88