可用于分离和／或纯化核酸的试剂制造技术

本发明专利技术提供了用于样品材料预处理的特定试剂。使用本发明专利技术所述试剂的预处理能够通过统一方法从非常不同的样品材料中分离核酸，尤其是不同的生物处理样品，即使所述核酸仅以小量存在于所述样品材料中。用于预处理的试剂包括至少一种含氨基的化合物作为关键组分。本发明专利技术还涉及纯化核酸的方法以及合适的试剂盒，在所述方法中所述样品材料进行相应地预处理。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术提供了用于样品材料预处理的特定试剂。使用本专利技术所述试剂的预处理能够通过统一方法从非常不同的样品材料中分离核酸，尤其是不同的生物处理样品，即使所述核酸仅以小量存在于所述样品材料中。用于预处理的试剂包括至少一种含氨基的化合物作为关键组分。本专利技术还涉及纯化核酸的方法以及合适的试剂盒，在所述方法中所述样品材料进行相应地预处理。【专利说明】可用于分离和/或纯化核酸的试剂本专利技术涉及适用于分离和/或纯化核酸的一种试剂以及数种方法和试剂盒，尤其是从包含低浓度待分离靶核酸的样品中分离和/或纯化核酸。专利技术背景在现有技术中已知用于分离核酸如DNA和RNA的大量方法，这些方法允许从各种来源的样品材料中分离。这些包括天然来源的样品材料，例如能够从人、动物、植物和环境中得到的复杂样品，以及来自实验室培养的样品材料，如微生物和细胞培养材料。核酸分离的基本原理一般与样品材料的类型无关并且能分成一些步骤:样品材料的任选消化，例如采用裂解形式，实际的核酸分离以及任选地，经分离核酸的纯化。从污染的样品组分例如细胞片段和不同于核酸的分子中分离靶标核酸，以及所述核酸的纯化能够分为两种类型的方法，其主要的差别在于分离步骤的数量和分离试剂:在经典的方法中，通常首先向样品材料加入含有离液剂的水性缓冲液用于各细胞的裂解、样品的消化，所述缓冲液通常含有胍盐。这之后通常是污染蛋白质的变性和通过与有机提取剂混合来提取核酸，该提取剂通常含有苯酚和/或氯仿。在分离含有核酸的水相与有机相之后，进行例如醇沉淀以从水溶性污染物和苯酚/氯仿组分中纯化核酸。此提取方法的缺点是小部分的有机提取物可能总是残留在水相中，从而需要多个耗时的核酸相纯化步骤， 这对于靶标核酸的产率具有负面影响。甚至在多个纯化步骤之后，纯化的核酸样品经常不具有后续应用的必要纯度，尤其是提取剂苯酚的残留物。替代性的多步骤方法通过使用固体矿物运载体材料避免了毒性有机溶剂的使用，该固体矿物运载体材料是基于例如二氧化硅化合物。由于核酸与运载体材料的一般主要选择性结合，所述核酸以核酸-运载体材料络合物的形式被分离。此方法中的起始步骤通常也是细胞裂解，除非待分离核酸已经以游离形式存在。为了降解细胞组分和/或其他样品组分，例如蛋白质，通常向样品材料加入含有离液剂的水性缓冲液和蛋白降解酶。然后，在合适的结合条件下，通常在醇存在的情况下，从所用样品材料中释放的核酸与所述运载体材料接触。第一个需要的分离步骤通常是基于运载体材料对核酸的选择性吸收，一般随后是从周围液体中分离所得的核酸-运载体络合物。如果运载体材料功能是例如作为过滤器基质，这能够在过滤过程中几乎同时发生，或者在用于从悬浮液分离所述络合物的后续步骤中几乎同时发生。任选地，这之后是通过一个或多个洗涤步骤纯化结合的核酸。通常，洗脱在之后作为分离过程的最终步骤，其中用水性试剂使结合的核酸从运载体材料上释放。这个步骤是任选的，因为在一些后续的应用中，例如聚合酶链式反应，运载体材料与靶标核酸的结合并不干扰这些应用。由于此多步骤分离方法的优点，如与其他经典方法相比改善的核酸产率和纯度，该方法已得到确立。一些基于上述多步骤方法的相似分离方法已经在现有技术中描述(参见例如US5, 234, 809.W093 / 1122UW095 / 01359 和 W02006 / 084753)，其特征在于，例如通过使用不同的运载体材料、从样品和/或不同试剂组合物中分离核酸-运载体材料络合物的不同机制。另外，W02009 / 144182 (Fabis等)公开了用于核酸分离和纯化的裂解、结合和洗涤试剂的通用组合物，其包括至少一种离液化合物、至少一种缓冲化合物和至少一种非离子型表面活性剂。这种试剂具有多个优点，因为其在储存中比现有技术已知的含有吐温的制剂更稳定，其用于例如细胞裂解，因为其增加了核酸产率和/或在无混浊下生产核酸洗脱液。在现有技术中所有已知的人工或自动方法包括前述例子，显示从各种样品材料中分离和纯化核酸的连续进一步发展，用于增加产率、纯度、速度和/或样品通量。在现有技术中使用的样品材料通常有以下共同处:它们含有需要非常大量分离的核酸和/或它们在其性质和/或组成方面相似，样品材料对于核酸纯化的效率影响很小(如果有)。另外，在现有技术中已知的方法也通常对于一个样品材料或相似样品材料(例如血液和血液产品)优化。然而，在现有技术中已知的方法通常并非设计用于和/或不能从非常不同的样品材料中以高纯度和高样品通量定量纯化少量的核酸，这些样品材料例如相对于其pH、其组成、其蛋白含量并且尤其是盐含量明显不同。特别地，已知的方法并不意在从生物处理样品，如具有不同组成的水性缓冲溶液中定量纯化核酸。例如在生物技术产品尤其是生物药物的生产中，这种方法会是令人感兴趣的。生物药 物具体包括蛋白和多肽(例如抗体、抗原、生长激素)、核酸(例如DNA、RNA、质粒、siRNA)、病毒和/或疫苗。使用现代生物技术的方式，尤其是通过天然或遗传修饰生物辅助来生产生物药物。生产通常使用真核或原核宿主细胞，其经常通过遗传工程修饰使得它们能够生产需要的生物药物。在现有技术中熟知代表性的遗传工程技术，并且包括但不限于将编码感兴趣产物如蛋白的基因以重组方式引入细胞中。为此可使用载体。然后各修饰细胞能够生产感兴趣产物。具体地，为此可能使用来自哺乳动物和昆虫、细菌或酵母培养物中的重组微生物、病毒以及植物分生组织和遗传修饰植物的细胞系。生物药物应用于预防、诊断和治疗疾病等。另外，也能够通过生物转化生产生物技术产品，包括生物药物。为此，遗传修饰或未修饰的细胞如特定的细菌或酵母细胞，与化学前体接触并且所述细胞通过其酶机器将所述前体转化为需要的产物。在疾病的预防中，已经建立了用于预防细菌或病毒疾病的各种免疫技术，从而生物技术学生产的疫苗正变得越发重要。这些疫苗包括病毒、偶联或非偶联形式的病毒包膜的抗原组分、或病毒、细菌或其他生物的纯DNA组分。病毒包膜或重组病毒的部分也能够用于预防性疫苗接种以抵御由病毒感染引起的疾病。例如，这个技术应用于HPV(人乳头瘤病毒)疫苗接种以预防宫颈癌。单克隆抗体主要应用于分子诊断，并且用于例如免疫表型分析、免疫组织学测定或ELISA。疾病的治疗是生物药物的另一个不断增长的应用领域。使用重组蛋白、激素、重组生物、病毒、重组免疫细胞或也使用基因进行治疗。生物技术产品通常经过多级纯化过程，具体例如生物药物。为了得到生物技术产品，可例如裂解生产宿主，或能够从培养物上清中分离生物技术产品。一般使用色谱方法进行从培养物上清和/或裂解物中纯化生物技术产品。此纯化的目的通常是从所得生物技术产品去除污染物并且富集该生物技术产品，所述污染物例如细胞片段、细胞分子、培养基和盐。另外，尤其是在生物药物的情况中，特别感兴趣的是实现核酸污染物(尤其是宿主细胞核酸)含量的明显降低，因为这些污染物可能(例如取决于浓度和宿主)赋予最终生物药物潜在致癌风险。通常，为了纯化生物技术产品，具体例如生物药物，通过标准色谱技术的方式实施纯化步骤，例如离子交换色谱、蛋白A / G亲和色谱、疏水性相互作用色谱和/或亲水性相互作用色谱，这些一般根据每个情况中需要纯化的生物药物制剂特定选择。从这些纯化方法中得到的洗脱液在此优选本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·波尔什斯基，
申请(专利权)人：恰根有限公司，
类型：
国别省市：