T细胞活化性双特异性抗原结合分子制造技术

本发明专利技术一般涉及用于T细胞活化和对特定靶细胞重定向的新颖双特异性抗原结合分子。另外，本发明专利技术涉及编码这类双特异性抗原结合分子的多核苷酸，和包含这类多核苷酸的载体和宿主细胞。本发明专利技术进一步涉及用于生成本发明专利技术双特异性抗原结合分子的方法，以及在疾病治疗中使用这些双特异性抗原结合分子的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】T细胞活化性双特异性抗原结合分子专利
本专利技术一般涉及用于活化T细胞的双特异性抗原结合分子。另外，本专利技术涉及编码这类双特异性抗原结合分子的多核苷酸，以及包含这类多核苷酸的载体和宿主细胞。本专利技术进一步涉及用于生成本专利技术双特异性抗原结合分子的方法，以及在疾病治疗中使用这些双特异性抗原结合分子的方法。专利技术背景在多种临床背景中经常期望选择性破坏个别细胞或特定细胞类型。例如，特异性破坏肿瘤细胞而使健康细胞和组织保持完整且未受损是癌症治疗的首要目的。实现这点的一种有吸引力的方式是通过诱导针对肿瘤的免疫应答，使得免疫效应细胞如天然杀伤(NK)细胞或细胞毒性T淋巴细胞(CTL)攻击并破坏肿瘤细胞。CTL构成免疫系统最有力的效应细胞，然而它们不能通过由常规治疗性抗体的Fc域介导的效应器机制来激活。在此方面，双特异性抗体在最近数年已变得感兴趣，其设计为用一个“臂”结合靶细胞上的表面抗原，而用第二个“臂”结合T细胞受体(TCR)复合物的活化性、不变的组分。这类抗体对其两种靶物的同时结合将迫使靶细胞与T细胞之间的暂时相互作用，从而导致任何细胞毒性T细胞的活化和靶细胞的随后裂解。因此，免疫应答被重定向(re-direction)于靶细胞，且并不依赖于靶细胞的肽抗原呈递或T细胞的特异性，如对于CTL的正常MHC限制性激活会相关的。在此背景中，CTL仅在靶细胞向其呈递双特异性抗体时被激活，即模拟免疫突触是至关重要的。特别期望的是不需要淋巴细胞预条件化或共刺激以引发靶细胞的有效裂解的双特异性抗体。已开发出数种双特异性抗体形式并研究了其对研究的T细胞介导的免疫疗法的适宜性。其中，已非常好地表征了所谓的BiTE(双特异性T细胞衔接物(engager))分子，而且其在临床中已显示出一些前景(综述于Nagorsen和ExpCellRes317,1255-1260(2011))。BiTE是串联scFv分子，其中两个scFv分子通过柔性接头融合。针对T细胞衔接评估的其他双特异性形式包括双抗体(Holliger等,ProtEng9,299-305(1996))及其衍生物，如串联双抗体(Kipriyanov等,JMolBiol293,41-66(1999))。一项最近的进展是所谓的DART(双重亲和力重新靶向)分子，其基于双抗体形式但特征在于实现额外的稳定化的C端二硫桥(Moore等,Blood117,4542-51(2011))。所谓的triomab(其为完整杂合小鼠/大鼠IgG分子且目前亦在临床试验中评估)代表了尺寸更大的形式(综述于Seimetz等,CancerTreatRev36,458-467(2010))。正在开发的多种形式显示免疫疗法中归因于T细胞重定向和活化的极大潜力。然而，生成对此合适的双特异性抗体的任务绝不是微不足道的，而是牵涉到许多必须满足的与抗体功效、毒性、适用性和生产能力有关的挑战。小构建体如例如BiTE分子(尽管能够有效交联效应器和靶细胞)具有非常短的血清半衰期，从而需要通过连续输注对患者施用它们。在另一方面，IgG样形式(尽管具有长半衰期的极大益处)受制于与IgG分子固有的天然效应器功能有关的毒性。它们的免疫原性潜力构成了成功治疗性开发的IgG样双特异性抗体(特别是非人形式)的另一个不利特征。最后，双特异性抗体的一般开发中的一项主要挑战是以临床充足的量和纯度生产双特异性抗体构建体，这是由于具有不同特异性的抗体重链和轻链在共表达后的错配所致，其降低了正确装配的构建体的产率且导致许多无功能的副产物，而期望的双特异性抗体可能难以与之分离。鉴于与目前可获得的双特异性抗体有关的关于T细胞介导的免疫疗法的难点和缺点，仍然存在对这类分子的新的改进形式的需要。本专利技术提供设计用于T细胞活化和重定向的双特异性抗原结合分子，其组合了良好的功效和生产能力与较低毒性和有利的药动学特性。专利技术概述在第一方面，本专利技术提供了一种T细胞活化性双特异性抗原结合分子，其包含第一和第二抗原结合模块以及由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域，所述抗原结合模块中一种是能够特异性结合活化性T细胞抗原的Fab分子，所述抗原结合模块中另一种是能够特异性结合靶细胞抗原的Fab分子；其中所述第一抗原结合模块是(a)单链Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链由肽接头连接，或(b)交换(crossover)Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变区或恒定区是交换的。在一个具体的实施方案中，T细胞活化性双特异性抗原结合分子中存在不超过一个能够特异性结合活化性T细胞抗原的抗原结合模块(即T细胞活化性双特异性抗原结合分子提供对活化性T细胞抗原的单价结合)。在具体的实施方案中，第一抗原结合模块是交换Fab分子。在甚至更具体的实施方案中，第一抗原结合模块是交换Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的恒定区是交换的。在一些实施方案中，T细胞活化性双特异性抗原结合分子的第一和第二抗原结合模块彼此融合，任选地经由肽接头融合。在一个这类实施方案中，第二抗原结合模块在Fab重链的C端融合至第一抗原结合模块的Fab重链的N端。在另一个这类实施方案中，第一抗原结合模块在Fab重链的C端融合至第二抗原结合模块的Fab重链的N端。在又一个这类实施方案中，第二抗原结合模块在Fab轻链的C端融合至第一抗原结合模块的Fab轻链的N端。在其中第一抗原结合模块是交换Fab分子且其中(i)第二抗原结合模块在Fab重链的C端融合至第一抗原结合模块的Fab重链的N端或(ii)第一抗原结合模块在Fab重链的C端融合至第二抗原结合模块的Fab重链的N端的实施方案中，另外，第一抗原结合模块的Fab轻链和第二抗原结合模块的Fab轻链可以彼此融合，任选地经由肽接头融合。在一个实施方案中，所述T细胞活化性双特异性抗原结合分子的第二抗原结合模块在Fab重链的C端融合至Fc域的第一或第二亚基的N端。在另一个实施方案中，第一抗原结合模块在Fab重链的C端融合至所述Fc域的第一或第二亚基的N端。在一个实施方案中，所述T细胞活化性双特异性抗原结合分子的第一和第二抗原结合模块各自在Fab重链的C端融合至所述Fc域的亚基之一的N端。在某些实施方案中，所述T细胞活化性双特异性抗原结合分子包含第三抗原结合模块，其为能够特异性结合靶细胞抗原的Fab分子。在一个这类实施方案中，所述第三抗原结合模块在Fab重链的C端融合至所述Fc域的第一或第二亚基的N端。在一个具体的实施方案中，所述活化性T细胞抗原结合分子的第二和第三抗原结合模块各自在Fab重链的C端融合至所述Fc域的亚基之一的N端，且所述第一抗原结合模块在Fab重链的C端融合至所述第二抗原结合模块的Fab重链的N端。在另一个具体的实施方案中，所述活化性T细胞抗原结合分子的第一和第三抗原结合模块各自在Fab重链的C端融合至所述Fc域的亚基之一的N端，且所述第二抗原结合模块在Fab重链的C端融合至所述第一抗原结合模块的Fab重链的N端。所述T细胞活化性双特异性抗原结合分子的组分可直接融合或经由合适的肽接头融合。在一个实施方案中，所述第二和第三抗原结合模块和Fc域是免疫球蛋白分子的一部分。在一个具体的实施方案中，所述免疫球蛋白分子是IgG类免疫球蛋白。在一个甚至更具体的实施方案中，所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.08.23 EP 11178370.0;2012.05.16 EP 12168192.81.一种T细胞活化性双特异性抗原结合分子，其基本上由第一抗原结合模块、第二抗原结合模块、第三抗原结合模块、由能够稳定联合的第一亚基和第二亚基构成的Fc域、及任选的一个或多个肽接头组成，其中(i)所述第一抗原结合模块是能够特异性结合活化性T细胞抗原的Fab分子，而所述第二抗原结合模块和所述第三抗原结合模块各自是能够特异性结合靶细胞抗原的Fab分子；(ii)所述第一抗原结合模块是交换Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变区或恒定区任一是交换的，使得交换Fab分子包含由轻链可变区和重链恒定区构成的肽链和由重链可变区和轻链恒定区构成的肽链；且(iii)所述第二抗原结合模块和所述第三抗原结合模块各自在Fab重链的C端融合至所述Fc域的亚基之一的N端，且所述第一抗原结合模块在Fab重链的C端融合至所述第二抗原结合模块的Fab重链的N端，或所述第一抗原结合模块和所述第三抗原结合模块各自在Fab重链的C端融合至所述Fc域的亚基之一的N端，且所述第二抗原结合模块在Fab重链的C端融合至所述第一抗原结合模块的Fab重链的N端。2.权利要求1的T细胞活化性双特异性抗原结合分子，其中所述Fc域是IgGFc域。3.权利要求2的T细胞活化性双特异性抗原结合分子，其中所述Fc域是IgG1Fc域或IgG4Fc域。4.前述权利要求中任一项的T细胞活化性双特异性抗原结合分子，其中所述Fc域是人Fc域。5.前述权利要求中任一项的T细胞活化性双特异性抗原结合分子，其中所述Fc域包含促进所述Fc域的第一亚基和第二亚基联合的修饰。6.权利要求5的T细胞活化性双特异性抗原结合分子，其中在所述Fc域的第一亚基的CH3域中，一个氨基酸残基用具有更大侧链体积的氨基酸残基替换，由此在第一亚基的CH3域内生成可安置于第二亚基的CH3域内的空穴中的隆起，且在所述Fc域的第二亚基的CH3域中，一个氨基酸残基用具有更小侧链体积的氨基酸残基替换，由此在第二亚基的CH3域内生成可安置第一亚基的CH3域内的隆起的空穴。7.前述权利要求中任一项的T细胞活化性双特异性抗原结合分子，其中相比于天然IgG1Fc域，所述Fc域展现出降低的对Fc受体的结合亲和力和/或降低的效应器功能。8.前述权利要求中任一项的T细胞活化性双特异性抗原结合分子，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：O阿斯特，P布鲁恩克，T福蒂，A弗莱莫瑟格伦德乔伯，C耶格，C克莱恩，E莫斯纳，P尤马纳，
申请(专利权)人：罗切格利卡特公司，
类型：
国别省市：