蛋白聚集抑制剂制造技术

本发明专利技术总体上涉及二氨基吩噻嗪化合物用于抑制或逆转突触核蛋白聚集的用途，并涉及所述化合物在制备用于该目的的药物中的用途，例如在制备用于治疗帕金森病的药物中的用途。本发明专利技术还涉及检测或标记聚集的突触核蛋白的方法。

【技术实现步骤摘要】
蛋白聚集抑制剂本申请是中国申请号为200780020257.1、专利技术名称为“蛋白聚集抑制剂”且申请日为2007年3月28日的专利申请(PCT申请号为PCT/GB2007/001105)的分案申请。
本专利技术涉及与神经变性疾病如帕金森病(Parkinson’sdisease,PD)有关的α-突触核蛋白聚集和能调节这种聚集的二氨基吩噻嗪化合物。
技术介绍
帕金森病是一种常见的神经变性运动失调，有1％的老年人受此病影响(参见Kapurniotu(2004)chemistry&Biology11,1476-1478页中的讨论)。PD的主要临床症状为运动过慢、静止性震颤、肌强直和平衡困难。PD神经病理学特征为多巴胺能神经元的显著且进行性退化，并且在大脑的黑质和其它区域中存在原纤维细胞质内含物(卢易体[Lewybodies,LB])和营养不良性神经突(卢易神经突[Lewyneuritis,LN])(Recchia等人，(2004)FASEBJ18:617-626)。尽管多巴胺神经元丢失一定与PD的主要临床症状有关，但这种多因子病及“突触核蛋白病(synucleinopathies)”的病因和发病机理在较大程度上仍然是未知的。LB和LN的主要组分是α-突触核蛋白的原纤维聚集体。α-突触核蛋白是经广泛表达的神经元突触前蛋白，其在膜相关过程和突触可塑性中扮演重要角色，并且与学习和发育过程有关。尽管LB和LN的形成机理及它们与PD的关系还没有明了，但现有的几条证据表明α-突触核蛋白纤维化与PD有关，并且表明α-突触核蛋白纤维化会导致毒性(参见，例如masliah等人，Science,287:1265-1269(2000)；Feany等人，Nature404:394-8(2000))。除了α-突触核蛋白外，β-突触核蛋白也牵涉在神经变性突触核蛋白病中。人β-突触核蛋白是134-残基神经元蛋白，该蛋白与α-突触核蛋白有78％同源性。所述α-和β-突触核蛋白共有保守的C-端，具有三个相同位置的酪氨酸残基。除了含有α-突触核蛋白的LB和LN外，具有LB的PD和痴呆的发展伴随着在海马中出现了新型α-和β-突触核蛋白-阳性损伤(Galvin等人，1999)，这说明除了α-突触核蛋白外，β-突触核蛋白也参与了该疾病的发作和发展。据了解，β-突触核蛋白可调节α-突触核蛋白纤维化，也许起到侣伴蛋白的作用而使α-突触核蛋白的聚集最小化(Hashimoto等人，2001；Uversky等人，2002；ParkandLansbury,2002)。因此，β-突触核蛋白水平的降低被认为是PD的病因之一(Uversky等人，2002)。因此，抑制或逆转突触核蛋白聚集被认为具有治疗益处。Li等人(chemistry&Biology11:1513-1521页,2004)讨论了通过抗菌素利福平(rifampicin)抑制α-突触核蛋白纤维化和原纤维的解聚集。Zhu等人(JournalofBiologicalchemistry279,26:26846-26857页,2004)讨论了通过类黄酮黄芩素抑制α-突触核蛋白纤维化和原纤维的解聚集。现有技术还有很多其它文献涉及针对这种聚集的抑制剂。这些文献包括：“Compositionsforinhibitingtheaggregationpathwayofalpha-synuclein”(US6780971-2004-08-24)；“Polyhydroxylatedaromaticcompoundsforthetreatmentofamyloidosisandalpha-synucleinfibrildiseases”(US2004152760-2004-08-05)；Peptideandpeptidederivativesforthetreatmentofalpha-synucleinrelateddiseases(WO2004009625-2004-01-29)；Proanthocyanidinsforthetreatmentofamyloidandalpha-synucleindiseases(EP1377287-2004-01-07)；Methodsforpreventingneuraltissuedamageandforthetreatmentofalpha-synucleindiseases(CN1440420T-2003-09-03)。然而，应当理解的是，如果能提供现有技术还未知的、并且能抑制突触核蛋白聚集的化合物将对该领域是有贡献的。
技术实现思路
本专利技术的专利技术人首次证明二氨基吩噻嗪化合物可用于抑制突触核蛋白聚集。简言之，本专利技术的专利技术人表达并纯化了两种形式α-突触核蛋白，并将它们用在自组装和原纤维形成试验(fibrilformation)中。结果发现，截短形式的α-突触核蛋白(truncatedformofα-synuclein,tsyn)在纤维形成试验中是特别有效的，并且这种自组装的tsyn经证明能提高硫黄素T的荧光。专利技术人试验了二氨基吩噻嗪类化合物和其它化合物的这种原纤维-破坏活性(fibril-disruptingactivity)。结果表明，所述二氨基吩噻嗪类化合物破坏组装的α-突触核蛋白的活性小于1μM。也设计了针对突触核蛋白结合的固相试验，该试验用于证明诸如锍氯化物(thioniniumchlorides)等的二氨基吩噻嗪类化合物和黄酮类能抑制这种结合。根据本专利技术公开的内容，本领域技术人员理解的是，这些结果说明了这类化合物尤其可用于治疗与突触核蛋白聚集有关的疾病(如PD和本专利技术所述其它疾病)的潜在病因。Piotrowski,G.(Thetreatmentofparkinsoniantremor.medicalRecord,144:322-323,1936)报道了在对4个个体的研究中，采用亚甲蓝(甲基锍氯化物-MTC)使得帕金森病震颤(Parkinsoniantremor)的症状得到了缓解。将所述MTC以1或2mg/kg剂量静脉给药。由于副反应而中止了口服给药8格令(grains)(＝518mg)/天的药物。根据该报道，对震颤的效果不是很强，而且仅维持了有限长的时间，同时对不同症状(强直)的影响不大。另一采用硫素(thionin)的单独试验没有得到结果。因此，该文献的本质为，已知具有副交感神经作用的MTC仅对帕金森病症状之一即“帕金森病震颤”具有有限的作用。相比之下，本专利技术涉及直接针对潜在的疾病过程的治疗而不是针对所述疾病的症状表现。先前已知二氨基吩噻嗪类化合物能抑制τ蛋白聚集并破坏PHFs结构，而且逆转PHF核心的蛋白水解稳定性(参见WO96/30766,FHoffman-LaRoche)。这些化合物被披露用于治疗各种疾病包括阿尔茨海默氏病和卢易体病(LewyBodyDisease)。此外，尽管WO02/055720(TheUniversityCourtoftheUniversityofAberdeen)主要涉及τ蛋白病，但其讨论了还原形式的二氨基吩噻嗪类化合物专门用于治疗各种蛋白聚集疾病的用途。WO2005/030676(TheUniversityCourtoft本文档来自技高网...

【技术保护点】
<400mg口服剂量的二氨基吩噻嗪化合物在制备用于抑制或逆转突触核蛋白聚集的药物中的用途，其中所述化合物选自下述结构式的化合物或其可药用盐、混盐、水合物或溶剂化物：其中，R1、R2、R4、R6、R8和R9各自独立地选自：?H；?F；?Cl；?Br；?I；?OH；?OR；?SH；?SR；?NO2；?C(=O)R；?C(=O)OH；?C(=O)OR；?C(=O)NH2；?C(=O)NHR；?C(=O)NR2；?C(=O)NRN1RN2；?NH2；?NHR；?NR2；?NRN1RN2；?NHC(=O)H；?NRC(=O)H；?NHC(=O)R；?NRC(=O)R；和?R；其中，各R独立地选自：未经取代的脂肪族C1?6烷基；经取代的脂肪族C1?6烷基；未经取代的脂肪族C2?6烯基；经取代的脂肪族C2?6烯基；未经取代的C3?6环烷基；经取代的C3?6环烷基；未经取代的C6?10碳芳基；经取代的C6?10碳芳基；未经取代的C5?10杂芳基；经取代的C5?10杂芳基；和未经取代的C6?10碳芳基?C1?4烷基；经取代的C6?10碳芳基?C1?4烷基；其中，在每个?NRN1RN2基团中，独立地，RN1和RN2与它们相连的氮原子一起形成具有3?7个环原子的环；并且其中，如果存在?NR3NAR3NA基团，则在每个?NR3NAR3NA中：R3NA和R3NB各自独立地选自：?H；未经取代的脂肪族C1?6烷基；经取代的脂肪族C1?6烷基；未经取代的脂肪族C2?6烯基；经取代的脂肪族C2?6烯基；未经取代的C3?6环烷基；经取代的C3?6环烷基；未经取代的C6?10碳芳基；经取代的C6?10碳芳基；未经取代的C5?10杂芳基；经取代的C5?10杂芳基；和未经取代的C6?10碳芳基?C1?4烷基；经取代的C6?10碳芳基?C1?4烷基；或者：R3NA和R3NB与它们相连的氮原子一起形成具有3?7个环原子的环；并且其中，如果存在=NR3NC基团，则在每个=NR3NC基团中，R3NC独立地选自：?H；未经取代的脂肪族C1?6烷基；经取代的脂肪族C1?6烷基；未经取代的脂肪族C2?6烯基；经取代的脂肪族C2?6烯基；未经取代的C3?6环烷基；经取代的C3?6环烷基；未经取代的C6?10碳芳基；经取代的C6?10碳芳基；未经取代的C5?10杂芳基；经取代的C5?10杂芳基；和未经取代的C6?10碳芳基?C1?4烷基；经取代的C6?10碳芳基?C1?4烷基；并且其中，如果存在?NR7NAR7NA基团，则在每个?NR7NAR7NA基团中：R7NA和R7NB各自独立地选自：?H；未经取代的脂肪族C1?6烷基；经取代的脂肪族C1?6烷基；未经取代的脂肪族C2?6烯基；经取代的脂肪族C2?6烯基；未经取代的C3?6环烷基；经取代的C3?6环烷基；未经取代的C6?10碳芳基；经取代的C6?10碳芳基；未经取代的C5?10杂芳基；经取代的C5?10杂芳基；和未经取代的C6?10碳芳基?C1?4烷基；经取代的C6?10碳芳基?C1?4烷基；或者：R7NA和R7NB与它们相连的氮原子一起形成具有3?7个环原子的环；并且其中，如果存在=NR7NC基团，则在每个=NR7NC基团中，R7NC独立地选自：?H；未经取代的脂肪族C1?6烷基；经取代的脂肪族C1?6烷基；未经取代的脂肪族C2?6烯基；经取代的脂肪族C2?6烯基；未经取代的C3?6环烷基；经取代的C3?6环烷基；未经取代的C6?10碳芳基；经取代的C6?10碳芳基；未经取代的C5?10杂芳基；经取代的C5?10杂芳基；和未经取代的C6?10碳芳基?C1?4烷基；经取代的C6?10碳芳基?C1?4烷基；并且其中如果存在RN10，则RN10独立地选自：?H；未经取代的脂肪族C1?6烷基；经取代的脂肪族C1?6烷基；未经取代的脂肪族C2?6烯基；经取代的脂肪族C2?6烯基；未经取代的C3?6环烷基；经取代的C3?6环烷基；未经取代的C6?10碳芳基；经取代的C6?10碳芳基；未经取代的C5?10杂芳基；经取代的C5?10杂芳基；和未经取代的C6?10碳芳基?C1?4烷基；经取代的C6?10碳芳基?C1?4烷基；并且其中，如果存在X?，则X?为一个或多个阴离子反离子，从而实现电中性。...

【技术特征摘要】
2006.03.29 US 60/786,7001.每天小于或等于400mg口服剂量的二氨基吩噻嗪化合物在制备用于抑制或逆转突触核蛋白聚集的药物中的用途，其中所述药物为片剂或胶囊的剂量单元，且其中所述聚集与表现为神经变性和/或临床痴呆的疾病状态有关，且其中所述疾病是帕金森病、卢易体痴呆或多系统萎缩症；且其中所述化合物选自下述结构式的化合物：其中，R1、R2、R4、R6、R8和R9各自独立地选自：-H；-Me和-Et；并且其中，在每个-NR3NAR3NB基团中：R3NA和R3NB各自独立地选自：-H；-Me和-Et；并且其中，-NR7NAR7NB基团与-NR3NAR3NB基团相同；并且其中，X-为一个或多个阴离子反离子，从而实现电中性。2.权利要求1所述的用途，其中R1、R2、R4、R6、R8和R9各自独立地选自：-H和-Me。3.权利要求1所述的用途，其中R1、R2、R4、R6、R8和R9为-H。4.权利要求1所述的用途，其中在每个-NR3NAR3NB基团中，R3NA和R3NB各自独立地选自：-H和-Me。5.权利要求2所述的用途，其中在每个-NR3NAR3NB基团中，R3NA和R3NB各自独立地选自：-H和-Me。6.权利要求3所述的用途，其中在每个-NR3NAR3NB基团中，R3NA和R3NB各自独立地选自：-H和-Me。7.权利要求1-6任一所述的用途，其中X-为一个或多个阴离子反离子，从而实现电中性，X-选自Cl-、Br-和I-。8.每天小于或等于400mg口服剂量的二氨基吩噻嗪化合物在制备用于抑制或逆转突触核蛋白聚集的药物中的用途，其中所述药物为片剂或胶囊的剂量单元，且其中所述聚集与表现为神经变性和/或临床痴呆的疾病状态有关，且其中所述疾病是帕金森病、卢易体痴呆或多系统萎缩症；且其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：克劳德M维希克，珍妮特E里卡德，查尔斯R哈林顿，戴维霍斯利，
申请(专利权)人：维斯塔实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：