针对CD74的人抗体和抗体-药物缀合物制造技术

本文公开了与人CD74结合的分离的人单克隆抗体及相关的抗体-药物缀合物。还公开了包含抗体或抗体-药物缀合物的药物组合物，以及使用该抗体和/或抗体-药物缀合物的治疗和诊断方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对CD74的人抗体和抗体-药物缀合物专利
本专利技术涉及CD74特异性抗体及其抗体-药物缀合物(ADCs)，这些抗体或ADCs的药物组合物，及其在治疗应用中的用途。专利技术背景人白细胞抗原(HLA)II类组织相容性抗原γ链，也称HLA-DR抗原相关不变链、Ia抗原相关不变链、Ii和CD74，是一种具有短细胞质内尾巴的跨膜蛋白。CD74的主要功能是调节细胞内室中负载到主要组织相容性复合体(MHC)II类异二聚体上的肽。细胞表面上仅表达少部分的总细胞CD74。细胞表面的CD74会在结合和不结合CD74抗体的情况下被非常快速地内化(RochePAetal.,PNAS1993;90:8581-8585;HansenHJetal.,BiochemJ1996;320:293-300;OngGLetal.,Immunology1999;98:296-302)。因此细胞表面CD74的稳态水平相当低，在单核细胞中，从每个细胞有数百个到数千个分子。细胞表面上表达的CD74的确切功能未知，但是研究证明CD74发挥前炎性细胞因子巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)膜受体的作用。结合CD74的MIF通过MAPK和Akt通路激活下游信号，并促进细胞增殖和存活。这种内化很可能也受到所存在的作为辅助受体的CD44、CXCR2或CXCR4的调节。CD74的上调已经在许多类型的癌症以及某些感染和炎症中被观察到。各种形式的人源化CD74特异性单克隆抗体,hLL1,已经被提出用于治疗CD74阳性肿瘤(ChangCHetal.,Blood2005;106:4308-4314;SapraPetal.,ClinCanRes2005;11:5257-5264;SteinRetal.,Blood2004;104:3705-11;GovindanSVetal.JNuclMed2000;41:2089-2097;HertleinEetal.,Blood2010;116:2554-2558;SteinRetal.,ClinCancerRes2009;15:2808-2817;SharkeyRMetal.,JNuclMed2009;50:444-453;LundbergBBetal.,DrugDeliv2007;14:171-175;GriffithsGLetal.,IntJCancer1999;81:985-992;GriffithsGLetal.,CancerRes2003;9:6567-6571;OchakovskayaRetal.,ClinCancerRes2001;7:1505-1510;ShihLetal.,CancerImmunolImmunother;BurtonJDetal.,ClinCancerRes2004;10:6606-6611;LundbergBBetal.,JControlRelease2004;94:155-161)。尽管已经取得了很多进展，但是仍然需要有改进的基于治疗抗体和ADCs用于治疗严重疾病的方法，例如改进的癌症治疗。专利技术概要本专利技术的一个目的是提供一种新型高特异性和有效的单克隆CD74特异性抗体和这些CD74特异性抗体的ADC。本专利技术的抗体或ADC对表达CD74的细胞上显示与本领域已经描述的抗体不同的CD74结合特征或其它效应。特别地，抗体的特征是，在与CD74抗原结合后会被快速内化，使它们适合于以ADC的形式用于治疗应用，或者用于其它快速内化有优势的应用。该新型ADC的特征是可高效杀伤表达CD74的肿瘤细胞。抗体和相应的ADC可以以多种形式提供，包括但不限于，抗体片段和双特异性抗体形式。在优选实施方案中，抗体是人抗体。本专利技术的另一个目的是提供基于这些CD74特异性抗体的ADC，用于医学用途，提供高效且选择性地导致肿瘤细胞死亡的途径。本专利技术的这些和其它方面在下文将更加详细地说明。附图简述图1是实施例中使用的重组CD74蛋白的氨基酸序列的图。CD74v1和–v2,CD74del2-36v1和–v2,以及HisCD74v1和–v2分别相应于SEQIDNOS:1-6。图2：是本专利技术抗体可变重链（VH）和可变轻链（VL）序列的比对结果的图。每个VH/VL序列的SEQIDNO列举在序列右侧的圆括号内。根据IMGT命名系统的互补决定区(CDR)突出显示如下：斜体序列代表CDR1，下划线序列代表CDR2，粗体序列代表CDR3。图3：是ELISA确定的CD74特异性抗体与代表性变体1和2同种型胞外域的重组蛋白(CD74v1和CD74v2)结合的图。所有人抗体都是通过用相关重链和轻链表达载体瞬时共转染HEK-293F细胞产生的。图4：是FACS确定的CD74特异性抗体与Raji细胞上的细胞CD74结合的图。所有人抗体通过用相关重链和轻链表达载体瞬时共转染HEK-293F细胞产生。图5：CD74特异性抗体与食蟹猴CD74的交叉反应性。人扁桃体（上图）和食蟹猴淋巴结（下图）用CD74特异性抗体染色。*：生发中心；Mf：巨噬细胞；#：外套层(Mantlezone)B细胞。图6：抗-κ-ETA’-预温育的CD74特异性抗体剂量依赖性诱导细胞死亡。显示了一次代表实验。数据显示了用抗-κ-ETA’-预温育的CD74HuMab抗体处理两个复孔细胞的平均百分比活力。百分比活力的计算如实施例14所述。图7：由ELISA确定的CD74HuMab抗体005和006(A)和011(B)及相应ADC与CD73v1胞外域重组蛋白的结合。显示了一次代表性实验。图8：由对Daudi细胞的FACS分析确定的CD74HuMab抗体005和006(A)和011(B)及相应ADC与表面表达的CD74的结合。所示数据是从三次独立实验计算得到的平均荧光强度(MFI)。图9：CD74特异性ADC剂量依赖性诱导细胞杀伤。对下述每种细胞系显示了一个代表性实验：Daudi(A),Raji(B),M4A4(C)和NCI-H747(D)细胞。所示数据是用CD74特异性ADC处理的两个复孔细胞的百分比存活。图10：CD74特异性抗体治疗性处理SCID小鼠体内Daudi-luc异种移植物的体内功效。带有确立的Daudi-luc肿瘤的小鼠用CD74特异性ADC处理。所示数据是每组的平均生物发光成像（BLI）信号±S.E.M.（每组n=7只小鼠）。图11：CD74特异性ADC治疗SCID小鼠体内Raji-luc异种移植物的体内功效。带有确立的Raji-luc肿瘤的小鼠用CD74特异性ADC处理。所示数据是每组的平均BLI信号±S.E.M.（每组n=7只小鼠）。图12：CD74特异性ADC治疗SCID小鼠体内Raji异种移植物的体内功效。已经皮下建立Raji肿瘤的小鼠用CD74特异性ADC处理。所示数据是每组的平均肿瘤体积±S.E.M.（每组n=6只小鼠）。图13：CD74特异性ADC治疗SCID小鼠体内M4A4异种移植物的体内功效。已经建立M4A4肿瘤的小鼠用CD74特异性ADC处理。所示数据是每组的平均肿瘤体积±S.E.M.（每组n=7只小鼠）。图14：CD74特异性HuMab抗体的解离速率的确定。显示了一次代表性实验。所示数据是将三个复孔的细胞与AlexaFluor染料标记的CD74HuM本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.02.01 DK PA201100064;2011.02.01 US 61/438,3831.分离抗体，其结合CD74变体1和2，并包含CDR1、2和3序列SEQIDNO:24、AAS和SEQIDNO:25的VL区，以及a)包含CDR1、2和3序列SEQIDNO:20、21和22的VH区；b)包含CDR1、2和3序列SEQIDNO:8、9和10的VH区；c)包含CDR1、2和3序列SEQIDNO:12、13和14的VH区；或d)包含CDR1、2和3序列SEQIDNO:16、17和18的VH区。2.权利要求1的抗体，当如通过ELISA测量地测定时，该抗体(a)以小于500ng/mL，小于400ng/mL，小于350ng/mL，或小于330ng/mL的EC50值与CD74变体1的胞外域结合；(b)以小于400ng/mL，小于300ng/mL，小于250ng/mL，或小于220ng/mL的EC50值与CD74变体2的胞外域结合；或(c)(a)和(b)。3.权利要求1的抗体，当如通过ELISA测量地进行测定时，该抗体以小于400ng/mL，小于300ng/mL，小于250ng/mL，或小于200ng/mL的EC50值与Raji细胞上的CD74结合。4.权利要求1的抗体，其与食蟹猴CD74结合。5.权利要求1的抗体，其在与细胞表面上表达的CD74结合之后被内化。6.权利要求5的抗体，其中所述细胞是Raji细胞。7.权利要求1的抗体，其在0℃下的解离速率为0.02-1.0min-1,0.03-0.30min-1,0.04-0.10或者0.15-0.30min-1。8.根据前述任一权利要求的抗体，其包含这样的VH区，所述VH区a)与选自SEQIDNOS:7,11,15和19的VH区序列具有至少80％同一性，至少90％，至少95％，或至少98％，或100％同一性，或者b)与选自SEQIDNOS:7,11,15和19的VH区序列相比，具有最多20个氨基酸修饰。9.权利要求1-7中任一项的抗体，其包含这样的VL区，所述VL区a)与选自SEQIDNOS:23和26的VL区序列具有至少80％同一性，至少90％，至少95％，或至少98％，或100％同一性，或者b)与选自SEQIDNOS:23和26的VL区序列相比，具有最多20个氨基酸修饰。10.权利要求8的抗体，其中所述氨基酸修饰为15或10或5、4、3、2或1个氨基酸修饰。11.权利要求8的抗体，其中所述氨基酸修饰为氨基酸替换。12.权利要求11的抗体，其中所述氨基酸替换是保守氨基酸替换。13.抗体，其结合CD74变体1和2，并且包括：(a)包含SEQIDNO:19序列的VH区和包含SEQIDNO:26序列的VL区；(b)包含SEQIDNO:7序列的VH区和包含SEQIDNO:26序列的VL区；(c)包含SEQIDNO:7序列的VH区和包含SEQIDNO:23序列的VL区；(d)包含SEQIDNO:11序列的VH区和含有SEQIDNO:26序列的VL区；或(e)包含SEQIDNO:15序列的VH区和含有SEQIDNO:26序列的VL区。14.权利要求1-7和10-13中任一项的抗体，其是人单克隆抗体。15.权利要求1-7和10-13中任一项的抗体，其具有选自IgG1和IgG4的同种型。16.权利要求1-7和10-13中任一项的抗体，其与治疗模块缀合。17.权利要求16的抗体，其通过附接于该抗体中的巯基残基的接头与所述治疗模块缀合，所述巯基残基是通过该抗体的至少部分还原获得的。18.权利要求16的抗体，其中所述治疗模块是细胞毒性模块、放射性同位素、化疗剂、裂解肽或细胞因子。19.权利要求18的抗体，其与细胞毒性模块缀合。20.权利要求19的抗体，其中细胞毒性模块选自下组：紫杉醇；细胞松弛素B；短杆菌肽D；溴化乙锭；依米丁；依托泊苷；替尼泊苷；长春新碱；长春碱；秋水仙碱；多柔比星；二羟基炭疽菌素二酮；美登素；auristatin；多拉司他汀10或15；伊立替康；米托蒽醌；1-脱氢睾酮；糖皮质激素；普鲁卡因；地卡因；利多卡因；普萘洛尔；嘌呤霉素；卡里奇霉素；抗代谢药物，包括氨甲喋呤，6-巯基嘌呤，6-硫代鸟嘌呤，阿糖胞苷，氟达拉滨，5-氟尿嘧啶，氮烯咪胺，羟基脲，天冬酰胺酶，吉西他滨，或克拉屈滨；烷化剂，包括氮芥，thioepa，苯丁酸氮芥，美法仑，卡莫司汀(BSNU)，洛莫司汀(CCNU)，环磷酰胺，白消安，二溴甘露醇，链唑霉素，达卡巴嗪(DTIC)，丙卡巴肼；铂衍生物，包括顺铂或卡铂；duocarmycinA，duocarmycinSA，rachelmycin(CC-1065)；抗生素，包括光神霉素，柔红霉素，丝裂霉素；放线菌素D，博莱霉素，伊达比星，普卡霉素，氨茴霉素(AMC)；吡咯并[2,1-c][1,4]-苯并二氮卓类药物(PDB)；白喉毒素及相关分子，包括白喉毒素A链及其活性片段和杂合分子，蓖麻毒蛋白毒素，包括蓖麻毒蛋白A或去糖基化的蓖麻毒蛋白A链毒素，霍乱毒素，志贺样毒素，包括SLTI,SLTII,SLTIIV，LT毒素，C3毒素，志贺毒素，百日咳毒素，破伤风毒素，大豆Bowman-Birk蛋白酶抑制剂，假单胞菌外毒素，alorin，皂草素，蒴莲根毒素...

【专利技术属性】
技术研发人员：S弗普洛根，M奥弗迪克，RV迪杰库伊曾，WK布里克，PV伯克尔，P帕伦，S里斯比，
申请(专利权)人：根马布股份公司，
类型：
国别省市：