【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CD38抗体变体及其用途
在Fc区中包含一个或多个突变的抗体变体,特别是抗CD38抗体变体。
技术介绍
CD38是II型跨膜糖蛋白,其通常在造血细胞上发现,并且在实体组织中处于低水平。CD38在造血细胞中的表达取决于细胞的分化和活化状态。谱系定型的造血细胞表达该蛋白,而它被成熟细胞丢失,并且在活化的淋巴细胞上再次表达。CD38也在B细胞上表达,由此浆细胞表达特别高水平的CD38。大约80%的静息NK细胞和单核细胞以较低的水平表达CD38,各种其它血液细胞类型也是如此,包括淋巴结生发中心淋巴母细胞、滤泡内细胞、树突状细胞、红细胞和血小板(Lee和Aarhus1993;Zocchi,Franco等人1993;Malavasi,Funaro等人1994;Ramaschi,Torti等人1996)。关于实体组织,CD38由肠中的上皮内细胞和固有层淋巴细胞,脑中的浦肯野细胞和神经原纤维缠结,前列腺中的上皮细胞,胰腺中的β细胞,骨骼中的破骨细胞,眼中的视网膜细胞,以及平滑肌和横纹肌的肌膜表达。CD38在大量血液恶性肿瘤中表达。表达已特别在多发性骨髓瘤(MM)(Lin,Owens等人2004)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)(Damle1999)的恶性细胞中观察到,并且也在以下中得到报道:华氏巨球蛋白血症(Konoplev,Medeiros等人2005)、原发性全身性淀粉样变性(Perfetti,Bellotti等人1994)、套细胞淋巴瘤(Parry-Jones,Matutes等人2007)、急性成淋巴细胞性白血病(Ke ...
【技术保护点】
1.一种与人CD38结合的抗体变体,所述抗体变体包含/n(a)抗原结合区,其包含具有如SEQ ID NO:2中所示序列的VH CDR1、具有如SEQ ID NO:3中所示序列的VH CDR2、具有如SEQ ID NO:4中所示序列的VH CDR3、具有如SEQ ID NO:6中所示序列的VL CDR1、具有序列AAS的VL CDR2、以及具有如SEQ ID NO:7中所示序列的VLCDR3,和/n(b)变体Fc区,其包含在选自对应于人IgG1重链中的E430、E345和S440的组的一个或多个氨基酸残基中的突变,其中所述氨基酸残基根据EU索引进行编号。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180713 US 62/697730;20190516 US 62/8488741.一种与人CD38结合的抗体变体,所述抗体变体包含
(a)抗原结合区,其包含具有如SEQIDNO:2中所示序列的VHCDR1、具有如SEQIDNO:3中所示序列的VHCDR2、具有如SEQIDNO:4中所示序列的VHCDR3、具有如SEQIDNO:6中所示序列的VLCDR1、具有序列AAS的VLCDR2、以及具有如SEQIDNO:7中所示序列的VLCDR3,和
(b)变体Fc区,其包含在选自对应于人IgG1重链中的E430、E345和S440的组的一个或多个氨基酸残基中的突变,其中所述氨基酸残基根据EU索引进行编号。
2.根据权利要求1的抗体变体,其包含可变重链(VH)区,所述可变重链(VH)区包含SEQIDNO:1,或者与SEQIDNO:1具有至少80%同一性,例如90%、或95%、或97%、或98%、或99%同一性的氨基酸序列。
3.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其包含可变轻链(VL)区,所述可变轻链(VL)区包含SEQIDNO:5,或者与SEQIDNO:5具有至少80%同一性,例如90%、或95%、或97%、或98%、或99%同一性的氨基酸序列。
4.根据权利要求2和3中任一项的抗体变体,其中所述VH与SEQIDNO:1相差12个或更少,例如11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸残基的突变,例如取代、插入或缺失。
5.根据权利要求3和4中任一项的抗体变体,其中所述VL与SEQIDNO:5相差12个或更少,例如11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸残基的突变,例如取代、插入或缺失。
6.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其包含含有SEQIDNO:1的序列的VH区、以及含有SEQIDNO:5的序列的VL区。
7.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其中所述一个或多个氨基酸残基中的突变选自E430G、E345K、E430S、E430F、E430T、E345Q、E345R、E345Y、S440Y和S440W。
8.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其中所述一个或多个氨基酸残基中的突变选自对应于E430G、E345K、E430S和E345Q的组。
9.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其中所述一个或多个氨基酸残基中的突变包含E430G。
10.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其中所述一个或多个氨基酸残基中的突变由E430G组成。
11.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其中所述变体Fc区包含一个或多个进一步突变,其并不降低通过不含一个或多个进一步突变的抗体变体诱导的补体依赖性细胞毒性(CDC)、和/或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。
12.根据权利要求11的抗体变体,其中所述一个或多个进一步突变是12个或更少,例如11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸残基的突变,例如取代、插入或缺失。
13.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其中除了所述突变之外,所述变体Fc区是人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型,或其混合同种型。
14.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其中除了所述突变之外,所述变体Fc区是人IgG1Fc区。
15.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其中除了所述突变之外,所述变体Fc区是人IgG1m(f)、IgG1m(a)、IgG1m(x)、IgG1m(z)同种异型、或者其任何两种或更多种的混合同种异型。
16.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其是二价抗体。
17.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其是全长抗体。
18.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其中除了所述突变之外,所述抗体变体是人抗体。
19.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其是单克隆抗体。
20.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其中除了所述突变之外,所述抗体变体是IgG1抗体。
21.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其中除了所述突变之外,所述抗体变体是人单克隆全长二价IgG1m(f),κ抗体。
22.一种与人CD38结合的抗体变体,所述抗体变体包含
(a)包含VH区,以及在E430、E345和S440中的一个或多个中具有突变的人IgG1CH区的重链,所述VH区包含具有如SEQIDNO:2中所示序列的VHCDR1、具有如SEQIDNO:3中所示序列的VHCDR2、具有如SEQIDNO:4中所示序列的VHCDR3,所述氨基酸残基根据EU索引进行编号;
(b)包含VL区的轻链,所述VL区包含具有如SEQIDNO:6中所示序列的VLCDR1、具有序列AAS的VLCDR2、以及具有如SEQIDNO:7中所示序列的VLCDR3。
23.一种与人CD38结合的抗体变体,所述抗体变体包含
(a)重链,其包含含有SEQIDNO:1的VH区,以及在E430、E345和S440中的一个或多个中具有突变的人IgG1CH区,其中所述氨基酸残基编号根据EU索引,和
(b)轻链,其包含含有SEQIDNO:5的VL。
24.根据权利要求22和23中任一项的抗体变体,其中所述突变包含E430G或由E430G组成。
25.根据权利要求22至24中任一项的抗体变体,其中所述人IgG1CH区是人IgG1m(f)、IgG1m(a)、IgG1m(x)和IgG1m(z)同种异型、或者其任何两种或更多种的混合同种异型。
26.根据权利要求22至25中任一项的抗体变体,其中除了所述突变之外,所述CH包含SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23或SEQIDNO:45的序列。
27.根据权利要求26的抗体变体,其中所述CH包含一个或多个进一步突变。
28.根据权利要求27的抗体变体,其中所述一个或多个进一步突变是12个或更少,例如11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸残基的突变,例如取代、插入或缺失。
29.根据权利要求28的抗体变体,其中在根据Eu编号的位置447处的Lys(K)被缺失。
30.根据权利要求22至26中任一项的抗体变体,其中所述CH区包含选自SEQIDNO:24至SEQIDNO:33和SEQIDNO:46的氨基酸序列。
31.根据权利要求30的抗体变体,其中所述CH区包含SEQIDNO:24或SEQIDNO:46,任选地其中所述轻链包含含有SEQIDNO:37的CL。
32.根据权利要求22至31中任一项的抗体变体,其是二价抗体。
33.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其中所述抗体变体是单特异性抗体。
34.根据权利要求1至32中任一项的抗体变体,其中所述抗体变体是双特异性抗体。
35.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其对人CD38的环化酶活性具有抑制作用。
36.根据权利要求35的抗体变体,其将人CD38的环化酶活性抑制至少约40%,例如至少约50%,例如至少约60%,任选地其中所述环化酶活性的抑制通过包括以下步骤的测定来确定:
(a)在每孔100µL20mMTris-HCL中接种200,000个Daudi或Wien133细胞;或者在多孔板中每孔100µL20mMTris-HCL中接种0.6ug/mL带His标签的可溶性人CD38(SEQIDNO:39);
(b)向每孔中加入1µg/mLCD38抗体和80µMNGD;
(c)测量荧光直到达到平稳状态(例如;5、10或30分钟);和
(d)确定与对照例如与同种型对照抗体一起温育的孔相比的抑制百分比。
37.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其在Fc交联抗体的存在下诱导细胞凋亡,但在不存在Fc交联抗体的情况下则不诱导细胞凋亡。
38.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其中所述抗体变体诱导表达人CD38的细胞的CDC、ADCC、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)、胞啃作用或其任何组合。
39.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其中所述抗体变体诱导表达人CD38的细胞的CDC。
40.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其中所述抗体变体诱导针对Daudi细胞(ATCC编号CCL-213)或Ramos细胞(ATCC编号CRL-1596)的CDC,导致比用参考抗体变体获得的最大裂解高至少50%,例如至少60%,例如至少70%的最大裂解,所述参考抗体变体区别仅在于在Fc区中不存在一个或多个突变。
41.根据权利要求40的抗体变体,其中所述CDC通过包括以下步骤的测定来确定:
(a)在多孔板中铺平板在补充有0.2%BSA的40µL培养基中的100,000个CD38表达细胞/孔;
(b)使细胞与40µL连续稀释的CD38抗体(0.0002-10µg/mL)一起预温育20分钟;
(c)使每孔与20%的合并的正常人血清一起在37℃下温育45分钟;
(d)加入活力染料,并且在流式细胞仪上测量细胞裂解的百分比;
(e)使用非线性回归来确定最大裂解。
42.根据前述权利要求中任一项的抗体变体,其中所述抗体变体与细胞毒素剂、放射性同位素或药物缀合。
43.一种分离的核酸,其编码根据前述权利要求中任一项的抗体变体。
44.一种表达载体,其包含根据权利要求43的核酸。
45.一种核酸,其编码根据权利要求1-42中任一项的抗体变体的重链。
46.根据权利要求45的核酸,其中所述重链包含VH区,以及在E430、E345和S440中的一个或多个中具有突变的人IgG1CH区,所述VH区包含具有如SEQIDNO:2中所示序列的VHCDR1、具有如SEQIDNO:3中所示序列的VHCDR2、具有如SEQIDNO:4中所示序列的VHCDR3,所述氨基酸残基根据EU索引进行编号。
47.一种核酸,其编码根据权利要求1-42中任一项的抗体变体。
48.一种核酸组合,其编码根据权利要求1-42中任一项的抗体变体。
49.一种递送媒介物,其包含根据权利要求45-48中任一项的核酸。
50.一种递送媒介物,其包含编码根据权利要求1-42中任一项的抗体变体的轻链的核酸。
51.根据权利要求50的递送媒介物,其中所述轻链包含VL区,所述VL区包含具有如SEQIDNO:6中所示序列的VLCDR1、具有序列AAS的VLCDR2、以及具有如SEQIDNO:7中所示序列的VLCDR3,以及药学上可接受的载体。
52.根据权利要求49-51中任一项的递送媒介物,其中所述递送媒介物是颗粒。
53.根据权利要求52的递送媒介物,其中所述颗粒是脂质纳米颗粒(LNP)。
54.根据权利要求53的递送媒介物,其中所述LNP包含脂质、可电离的氨基脂质、PEG-脂质、胆固醇或其任何组合。
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【专利技术属性】
技术研发人员:B·E·C·G·德戈伊,G·安德林加,F·博伊尔斯肯斯,J·舒尔曼,D·萨汀,T·艾哈迈迪,
申请(专利权)人:根马布股份公司,
类型:发明
国别省市:丹麦;DK
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