一种抗PD-L1抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种特异性结合PD‑L1的抗体或其抗原结合部分，属于抗体技术领域。所述抗体或其抗原结合部分的重链可变区CDR‑H1、CDR‑H2、CDR‑H3和轻链可变区CDR‑L1、CDR‑L2、CDR‑L3分别包括SEQ ID NO.3‑8所示的氨基酸序列。本发明专利技术的抗PD‑L1抗体具有极高的亲和力和特异性，在相关应用领域有巨大的潜力和优势，尤其是本发明专利技术的抗PD‑L1抗体能够确定组织细胞内PD‑L1的定位及含量，配合自动免疫组化染色平台，可为临床诊断尤其是靶向PD‑1或PD‑L1药物治疗的伴随诊断提供更准确和科学的检测结果。

【技术实现步骤摘要】
一种抗PD-L1抗体及其应用
本专利技术属于抗体领域，具体地，涉及一种抗PD-L1抗体及其应用。
技术介绍
PD-L1是PD-1的2个配体之一，属于B7家族的跨膜分子，基因定位于人染色体9p24.2。该分子是由290个氨基酸残基组成的跨膜蛋白，胞外段为两个免疫球蛋白恒定区(IgC)和IgV样结构域，主要表达于成熟的CD4+T细胞、CD8+T细胞、单核细胞、巨噬细胞、B细胞、树突状细胞等造血细胞，以及一些非造血细胞，如内皮细胞、胰岛细胞、肥大细胞等的膜表面，而且在多种肿瘤细胞均高表达PD-L1分子。程序性死亡受体-1(programmeddeath-1，PD-1)是T细胞上的一种跨膜受体PD-1能够与配体PD-L1、PD-L2相互作用，抑制T细胞增殖。在正常机体中，PD-1作为一种T细胞增殖的负调节分子，对维持机体的免疫耐受有重要作用；而在肿瘤中，细胞PD-L1和PD-L2表达上调，与T细胞表面的PD-1受体相互作用，能够抑制T细胞的活化、增殖及对肿瘤的杀伤，使其功能发生紊乱和枯竭。抗PD-L1的单克隆抗体可阻断PD-L1与PD-1、CD80的相互作用，从而恢复T细胞功能。在肿瘤患者体内，PD-L1的高表达能够增强肿瘤的转移能力、导致患者死亡率上升，因此可以作为患者愈后的标志物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种抗PD-L1抗体及其应用，为此，本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术第一方面提供一种特异性结合PD-L1的抗体或其抗原结合部分，，其重链可变区CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3和轻链可变区CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3分别包括SEQIDNO:3-8所示的氨基酸序列。在本专利技术的一些实施方案中，所述抗原结合部分选自Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fv片段、scFv片段、Fd片段和单域抗体。本专利技术的第二方面提供编码本专利技术第一方面任一所述抗体或其抗原结合部分的基因，编码重链的基因包括SEQIDNO.1所示核苷酸序列，编码轻链的基因包括SEQIDNO.2所示核苷酸序列。本专利技术的第三方面提供一种表达载体，包括本专利技术第二方面所述的基因。在本专利技术中，所述载体可以是任意地能够在宿主细胞内表达的载体。在本专利技术的一些实施方案中，所述载体为原核表达载体或真核表达载体。本专利技术的第四方面提供一种宿主细胞，其含有本专利技术第三方面所述的表达载体。在一些实施方案中，所述载体为原核表达载体，所述宿主细胞为原核细胞，如大肠杆菌。在另一些实施方案中，所述载体为真核表达载体，所述宿主细胞为真核细胞。本专利技术第五方面提供本专利技术第一方面所述的抗体或其抗原结合部分在制备用于检测PD-L1蛋白的试剂盒中的应用。在一些实施方案中，检测PD-L1蛋白的方法选自包括IHC法、酶联免疫吸附法、免疫印迹法和流式细胞法的组。本专利技术第六方面提供一种用于检测PD-L1蛋白的试剂盒，包括本专利技术第一方面所述的抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，所述试剂盒适用于选自包括IHC法、酶联免疫吸附法、免疫印迹法和流式细胞法的组中的检测方法。本专利技术第七方面提供本专利技术第一方面所述的抗体或其抗原结合部分在制备用于靶向PD-1或PD-L1药物治疗的伴随诊断的试剂盒中的应用。本专利技术第七方面提供一种用于靶向PD-1或PD-L1药物治疗的伴随诊断的试剂盒，包括本专利技术第一方面所述的抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，所述靶向PD-1的药物包括但不限于帕博利珠单抗(可瑞达)、纳武利尤单抗(欧狄沃)、特瑞普利单抗(拓益)、信迪利单抗(达伯舒)、卡瑞丽珠单抗(艾立妥)和替雷利珠单抗(百泽安)。在另一些实施方案中，所述靶向PD-L1药物包括但不限于度伐利尤单抗(英飞凡)和阿替利珠单抗(泰圣奇)。本专利技术的有益效果相对于现有技术，本专利技术具有以下有效效果：本专利技术的抗CD40的兔单克隆抗体具有极高的特异性，能与PD-L1重组蛋白特异性结合，且不与PD-L2的重组蛋白有交叉反应，在相关研究和应用领域有巨大的潜力和优势本专利技术的抗PD-L1抗体可以与冷冻或石蜡切片组织、细胞液涂片中的抗原分子特异性结合并通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内PD-L1的定位及含量。利用本专利技术的抗PD-L1抗体，配合快速高效、重复性好、标准化程度高的自动免疫组化染色平台，可为临床诊断尤其是靶向PD-1或PD-L1药物治疗的伴随诊断提供更准确和科学的检测结果。本专利技术的抗PD-L1抗体其他的应用还包括但不限于：ELISA检测，Westernblot，流式细胞术等。附图说明图1示出了利用本专利技术的抗PD-L1抗体对正常组织和肿瘤组织样本进行IHC的检测结果。A：胎盘，B：扁桃体，C：肺癌芯片。图2示出了利用抗PD-L1抗体通过酶联免疫吸附法检测PD-L1重组蛋白的结果。图3示出了利用抗PD-L1抗体通过蛋白质印迹法检测PD-L1重组蛋白的结果。泳道1：1:500，泳道2：1:1000，泳道3：1:2000，泳道4：1:4000，泳道5：1:8000，泳道6：1:16000，泳道7：Actin肌动蛋白。图4示出了利用抗PD-L1抗体检测293-6E过表达细胞PD-L1蛋白的流式细胞检测结果。左侧峰为空白细胞，右侧峰为为PD-L1。图5示出了抗PD-L1抗体与PD-1重组蛋白竞争PD-L1ELISA曲线。图6示出了利用酶联免疫吸附法验证PD-L1抗体特异性的结果。图7示出了利用蛋白印迹法验证抗PD-L1抗体特异性的结果。具体实施方式为了使本专利技术所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。实施例以下例子在此用于示范本专利技术的优选实施方案。本领域内的技术人员会明白，下述例子中披露的技术代表专利技术人发现的可以用于实施本专利技术的技术，因此可以视为实施本专利技术的优选方案。但是本领域内的技术人员根据本说明书应该明白，这里所公开的特定实施例可以做很多修改，仍然能得到相同的或者类似的结果，而非背离本专利技术的精神或范围。除非另有定义，所有在此使用的技术和科学的术语，和本专利技术所属领域内的技术人员所通常理解的意思相同，在此公开引用及他们引用的材料都将以引用的方式被并入。那些本领域内的技术人员将意识到或者通过常规试验就能了解许多这里所描述的专利技术的特定实施方案的许多等同技术。这些等同将被包含在权利要求书中。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的仪器设备，如无特殊说明，均为实验室常规仪器设备；下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。实施例1抗PD-L1单克隆抗体及其制备以重组人PD-L1全长蛋白为免疫原对实验兔进行背部皮下注射免疫。取实验兔血并分离外周血单核细胞(PBMC)，标记并筛选PBMC中的B细胞，获取表达PD-L1抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性结合PD-L1的抗体或其抗原结合部分，其特征在于，其重链可变区CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3和轻链可变区CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3分别包括SEQ ID NO.3-8所示的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合PD-L1的抗体或其抗原结合部分，其特征在于，其重链可变区CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3和轻链可变区CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3分别包括SEQIDNO.3-8所示的氨基酸序列。


2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述抗原结合部分选自Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fv片段、scFv片段、Fd片段和单域抗体。


3.编码权利要求1或2所述抗体或其抗原结合部分的基因，其特征在于，编码重链可变区的基因包括SEQIDNO.1所示核苷酸序列，编码轻链可变区的基因包括SEQIDNO.2所示核苷酸序列。


4.一种表达载体，其特征在于，包括权利要求3所述的基因。


5.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡旻，李明振，蔡宁，
申请(专利权)人：杭州百凌生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33