一种干酪乳杆菌及其生产胞外多糖的方法技术

一种干酪乳杆菌及其生产胞外多糖的方法，保藏编号为CGMCC?No.6818。本发明专利技术是采用CGMCC?No.6818发酵生产CGMCC?No.6818，所述胞外多糖产量较高，其组成与现有胞外多糖不同，采用脱脂乳粉培养基，发酵液中胞外多糖产量可达831.85mgL。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
乳酸菌产胞外多糖(exopolysaccharide, EPS)是乳酸菌在生长代谢过程中分泌到细胞壁外的黏多糖或荚膜多糖。大量研究表明，乳酸菌胞外多糖除了可以作为增稠剂、凝胶剂和稳定剂等食品添加剂应用于食品加工中外，在抗肿瘤、抑菌、消炎、增强机体免疫力等方面起着重要的作用。乳酸菌产胞外多糖作为食品级乳酸菌天然发酵产物，具有食用安全的天然优势，因此开发和利用这些具有特定生理功能的乳酸菌胞外多糖成为药物研究和保健品生产具有极好的经济效益、社会效益和应用前景。作为食用乳酸菌中的一员，干酪乳杆菌在干酪、酸乳等发酵食品中有着越来越广泛的应用，但据目前已有文献报道，干酪乳杆菌胞外多糖的产量较低，一般不超过200mg/L。更高产量的干酪乳杆菌胞外多糖的制备方法未见报道。因此，研制一种制造高产量干酪乳杆菌胞外多糖的方法，可填补该领域空白，具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术提供了一种干酪乳杆菌SCJ010，用于发酵生产胞外多糖。所述干酪乳杆菌SCJ010筛选自然发酵酸菜汁，已于2012年11月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC N0.6818，建议分类命名为干酪乳杆菌Lactobacillus casei，地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所。所述胞外多糖分子 量为2.4X IO6Da,由半乳糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、鼠李糖、木糖和核糖构成，上述物质摩尔比为205:215:5:5:2:2:1。本专利技术还提供一种生产上述胞外多糖的方法，是用CGMCC N0.6818发酵生产胞外多糖。所述生产胞外多糖的方法，是将CGMCC N0.6818接入脱脂乳粉培养基发酵生产胞外多糖。接入干酪乳杆菌的菌的活菌数为IO6-1O8个/mL。接入干酪乳杆菌的接种量为3-5%。干酪乳杆菌发酵温度为30_34°C，发酵时间为12-18h，所述发酵温度为干酪乳杆菌常用温度。所述脱脂乳粉培养基组成如下:8_14%脱脂乳粉，4_8%的匍萄糖和2.0-2.8%酿蛋白胨。是将干酪乳杆菌CGMCC N0.6818接种于脱脂乳粉培养基发酵，发酵液经沸水浴后离心，收集上清液，向上清液中加入三氯乙酸，放置一段时间，离心，将上清液旋转蒸发浓缩，再向浓缩后的上清液中加入乙醇，静置后离心，将沉淀用去离子水溶解，，离心取上清液透析，得透析截留液，真空冷冻干燥制粉，得到干酪乳杆菌胞外多糖。所述透析袋透析截留分子量极限为12000-14000Da。优选技术方案如下:⑴将干酪乳杆菌活化液按体积百分比4%的接种量接种于改进的脱脂乳粉培养液中，在30-34°C条件下发酵12-18h，制得发酵液；⑵将上述发酵液在沸水浴中加热10-15min后，在4°C下以IOOOOg离心20min，收集上清液；⑶向上清液中加入质量浓度为800g/L的三氯乙酸至终质量浓度为40gL，4°C放置10-12h，IOOOOg离 心20min，收集上清液；⑷将得到的上清液用旋转蒸发仪旋转蒸发浓缩，水浴锅温度为50-80°C ；(5)浓缩后的上清液中加入体积分数为95%的乙醇至终体积分数为75%，4°C下静置10-16h，再于 4°C 8000-10000g 离心 15_20min，收集沉淀；(6)将沉淀用去离子水溶解，离心取上清液透析3d，每6_8h换水I次；(7)收集透析截留液，利用真空冷冻干燥机进行冷到干燥制得干酪乳杆菌胞外多糖粉末。干酪乳杆菌胞外多糖含量的测定采用常规硫酸-苯酚法。①试剂脱脂奶粉培养基:含脱脂奶粉，葡萄糖、酪蛋白胨、Κ2ΗΡ04。80%苯酚:80g苯酚(分析纯重蒸馏试剂)加20g水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。6%苯酚:临用前以80%苯酚配制。(每次测定均需现配)80%三氯乙酸(80%TCA):80g TCA加15g水使之溶解，可置冰箱中长期储存。浓硫酸、葡萄糖、甲醇、硼氢化钠、乙酸酐、吡啶和氯仿:均为分析纯。②设备高速冷冻离心机、分析天平、分光光度计、500mL容量瓶、250mL三角瓶、IOmL灭菌移液管、ImL灭菌移液管、0.1mL灭菌移液管、酒精灯、离心管。 ③制作标准曲线:准确称取标准葡萄糖20mg于500mL容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8mL，各以蒸馏水补至2.0mL,然后加入6%苯酚1.0mL及浓硫酸5.0mL，摇匀冷却，室温放置20min以后于490nm测光密度，以2.0mL水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖浓度，纵坐标为光密度值，绘制标准曲线，如附图说明图1所示。④胞外多糖的提取与测定取发酵液20mL，离心(9960r/min，20min, 4°C )去菌体，取上清液沸水浴lOmin，冷却至室温，加80%的三氯乙酸溶液至质量浓度为4%，4°C静置过夜，9960r/min离心20min，取上清液，用去离子水透析3d，每8h换水I次。以相同的方法处理未接种的培养基，作为测定多糖含量的空白对照。吸取0.2ml的样品液，以蒸馏补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml，摇匀冷却室温放置20min充分进行显色反应，之后于490nm测OD值。⑤发酵液中该多糖含量按如下公式计算:本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种干酪乳杆菌，于2012年11月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC?No.6818。

【技术特征摘要】
1.一种干酪乳杆菌，于2012年11月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC N0.6818。2.权利要求1所述干酪乳杆菌，其特征在于，该菌株分泌的胞外多糖分子量为2.4X IO6Da,由半乳糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、鼠李糖、木糖和核糖构成，上述物质摩尔比为 205:215:5:5:2:2:1。3.一种发酵生产胞外多糖的方法，是用CGMCC N0.6818发酵生产胞外多糖。4.权利要求2所述方法，其特征在于，是将CGMCCN0.6818接入脱脂乳粉培养基发酵生产胞外多糖。5.权利要求2所述方法，其特征在于，所述脱脂乳粉培养基组成为:8-14%脱脂乳粉，4-8%的葡萄糖和2.0-2.8%酪蛋白胨。6.权利要求2所述方法，其特征在于，所述干酪乳杆菌的活菌数为IO6-1O8个/mL。7.权利要求2所述方法，其特征在于，所述干酪乳杆菌的接种量为3-5%。8.权利要求2所述方法，其特征在于，发酵温度为30-34°C，发酵时间为12-18h。9.权利要求2所述方法，其特征在于，将干酪乳杆菌CGMCCN0.6818接种于脱脂乳粉培养基发酵，发酵液经沸...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐彦君，刘宁，王辰元，
申请(专利权)人：东北农业大学，黑龙江八一农垦大学，
类型：发明
国别省市：