一种鸭大肠杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一株致病力强、免疫原性好的鸭大肠杆菌，该菌株的保藏编号为CGMCC?No.6831。本发明专利技术还提供一种二联灭活疫苗，包括有疫苗佐剂和抗原，所述的抗原为保藏编号为CGMCC?No.6831的鸭大肠杆菌和保藏编号为CGMCC?No.6832的鸭疫里默氏杆菌。本发明专利技术制备的鸭大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌二联灭活疫苗，能够预防以引起鸭只大肠杆菌性败血症的特征病变如心脏或肝脏有纤维素渗出性炎症、心包膜炎或胸膜发生粘连为特征的鸭大肠杆菌病，并可以预防以神经症状、纤维素性心包炎、肝周炎和气囊炎为特征的鸭传染性浆膜炎的发生，具有良好的市场推广前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于兽用生物制品
，更具体是涉一种鸭大肠杆菌及其应用，即一株可引起鸭大肠杆菌性败血症的特征病变如心脏或肝脏有纤维素渗出性炎症、心包膜炎或胸膜发生粘连的细菌及其应用。
技术介绍
鸭大肠杆菌病是由致病性鸭大肠杆菌引起，其症状常与鸭疫里默氏杆菌感染的症状和病变相似，国内教学科研单位常分离鉴定出的血清型有01、02、03、078等。近几年，国内特别是山东、河南、广东、福建、广西等省份随着肉鸭饲养的快速发展，大肠杆菌病的发生十分频繁，严重危害养鸭业的进一步发展。当前，鸭疫里默氏杆菌对养殖业的危害除直接引起动物发病、死亡外，感染耐过鸭疫里默氏杆菌的鸭因饲料转化率降低、生长发育迟缓而带来的间接经济损失也十分严重，鸭疫里默氏杆菌对部分抗菌药物敏感，但难于清除，尤其是该菌侵入气囊后，药物难以到达，由于不合理的用药方案，鸭疫里默氏杆菌耐药现象普遍存在，耐药率高且广泛，同时造成一定的药物残留等问题。因此，研制针对鸭大肠杆菌病及由鸭疫里默氏杆菌引起的鸭传染性浆膜炎两种病的二联疫苗具有广阔的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供了一株鸭大肠杆菌及其应用，即一种可有效防治以引起鸭大肠杆菌性败血症的特征病变如心脏或肝脏有纤维素渗出性炎症、心包膜炎或胸膜发生粘连为特征的鸭大肠杆菌病，同时将筛选出的鸭大肠杆菌和鸭疫里默氏杆菌制成二联灭活疫苗，为鸭大肠杆菌病及鸭传染性浆膜炎的预防和治疗提供了有效的免疫产品。本专利技术一个方面提供一株致病力强、免疫原性好的鸭大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)EC BYT01，该菌株已于2012年11月15日保藏于北京市朝阳区北辰西路I号院中科院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为 CGMCC N0.6831。本专利技术的鸭大肠杆菌用于制备灭活疫苗。本专利技术提供一种二联灭活疫苗，包括有疫苗佐剂和抗原，所述的抗原为保藏编号为CGMCC N0.6831的鸭大肠杆菌和保藏编号为CGMCC N0.6832的鸭疫里默氏杆菌。本专利技术制备的鸭大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌二联灭活疫苗，能够预防以引起鸭只大肠杆菌性败血症的特征病变如心脏或肝脏有纤维素渗出性炎症、心包膜炎或胸膜发生粘连为特征的鸭大肠杆菌病，并可以预防以神经症状、纤维素性心包炎、肝周炎和气囊炎为特征的鸭传染性浆膜炎的发生，具有良好的市场推广前景。具体实施例方式本专利技术对山东、广东、福建、广西等地的疑似鸭大肠杆菌病死鸭进行病原分离、鉴定，获得56株病原为鸭大肠杆菌，对其进行血清型鉴定表明，其中有12株为血清078型；动物回归及毒力试验表明EC BYT06株毒力最强，可致鸭只10/10发病且其中7只死亡；免疫原性试验结果表明，当免疫剂量为0.25mL (抗原含量达到1.0X 108CFU/mL)时即可使攻毒保护达到9/10。以上结果表明，筛选得到一株血清078型鸭大肠杆菌，其致病力最强、免疫原性好、制备的油苗攻毒保护效果好，确定为生产用菌株，该菌株已于2012年11月15日保藏于北京市朝阳区北辰西路I号院中科院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC N0.6831。在本专利技术中，大肠埃希氏菌等同于大肠杆菌，两者可以互换使用。对疑似鸭疫里默氏杆菌病死鸭进行病原分离、鉴定，获得38株病原为鸭疫里默氏杆菌，对其进行血清型鉴定表明，其中有7株为血清2型；动物回归及毒力试验表明RABYT06株毒力最强，可致鸭只10/10发病且其中5只死亡；免疫原性试验结果表明，当免疫剂量为0.25mL (抗原含量达到1.0X 108CFU/mL)时即可使攻毒保护达到9/10。以上结果表明，筛选得到一株血清2型鸭疫里默氏杆菌，其致病力最强、免疫原性好、制备的油苗攻毒保护效果好，确定为生产·用菌株，于2012年11月15日保藏于北京市朝阳区北辰西路I号院中科院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCN0.6832。下面对本专利技术进行详细的描述。一、鸭大肠杆菌的分离及鉴定:⑴将从山东、广东、福建、广西等地收集的病死鸭进行无菌操作，取病死鸭心血、肝或脑组织划线接种于麦康凯琼脂平板、鲜血琼脂平板上，置于37°C培养箱中培养12h，观察细菌生长特性。结果如下:分离到56株疑似为大肠杆菌。这些菌株在普通营养琼脂培养基上菌落约1.5毫米左右，有闪光，呈奶油状；在麦康凯琼脂上菌落约2毫米左右，圆形，突起，光滑，边缘整齐，粉红色。56株分离菌分别命名为RA BYTOURA BYTO2至RA BYT56。⑵取纯培养的细菌的单个菌落涂于干净的载玻片上，然后用革兰氏染色，镜检，观察其形态特征。革兰氏染色，为革兰氏阴性细小杆菌，呈单个或成对分布，偶尔呈链状排列，不运动，无芽胞。⑶取纯培养物分别进行葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、乳糖、阿拉伯糖、甘露醇、卫矛醇、三糖铁试验、M.R.试验、吲哚试验、过氧化氢酶试验、接触酶试验、枸椽酸盐利用试验、尿素酶试验、V-P试验。37°C培养，连续观察3天。结果表明所得菌株生化反应相似，发酵绝大多数的碳水化合物，不产生硫化氢，三糖铁试验、M.R.试验、吲哚试验、过氧化氢酶试验、接触酶试验阳性，枸椽酸盐利用试验、尿素酶试验、V-P试验阴性符合鸭大肠杆菌的生化反应特征。⑷取被检细菌纯培养物用灭菌生理盐水离心洗涤两次，稀释成1.0X IO8CFU/毫升的菌液，作为被检抗原，121°C高压2h破坏其荚膜抗原，用标准“O”抗原单因子血清作玻片凝集反应鉴定细菌O抗原种类，以确定其血清型。结果显示其中12株为血清型078，12株为血清型02，9株为血清型01，5株为血清型088，4株为血清型08，血清型05、027各3株，血清型065、0135各2株，血清型045、010、07、039各I株，血清型078为优势血清型。(5) 12株血清078型鸭大肠杆菌毒力测定试验分别取纯培养的12株血清078型鸭大肠杆菌单个菌落划线接种于麦康凯琼脂平板上，37°C培养12h，刮取平板上所有菌落混于灭菌生理盐水中制成细菌悬液，将其浓度稀释到1.0X 106CFU/mL，以0.5mL/只剂量肌肉注射19日龄健康易感鸭10只，同时设立灭菌生理盐水注射对照组10只。攻毒后连续观察10天，每日记录鸭子的精神、食欲、饮水、粪便、运动及死亡情况，并对死亡鸭进行病理剖检、细菌分离及鉴定。结果表明，结果表明各菌株的致病性有差别，12株078型菌株中，EC BYTOl株毒力最强，EC BYTOl株接种鸭，40h后部分鸭开始出现精神萎靡，行动迟缓或俯卧不起，10天内10/10发病且其中7只死亡，其余株发病在50h以后，详见表I ;剖检可见典型的心包炎、肝周炎、气囊炎；取心血涂片和肝组织印片经染色后镜检，可见短小的小杆菌，单个或成对存在，并能从心血和肝组织在麦康凯平板培养基上分离出接种菌，其生化及培养特征与EC BYTOl株鉴定结果一致，因此本研究选用EC BYTOl株作为疫苗用强毒菌株。并送中科院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC N0.6831。表I 12株血清078型鸭大肠杆菌的毒力测定试验结果本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株鸭大肠杆菌，其保藏编号为CGMCC?No.6831。

【技术特征摘要】
1.一株鸭大肠杆菌，其保藏编号为CGMCC N0.6831。2.权利要求1所述的鸭大肠杆菌在制备疫苗中的应用。3.一种二联灭活疫苗，包括有疫苗佐剂和抗原，所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋皓静，凌红丽，丛雁方，蒋贻海，孙海新，
申请(专利权)人：青岛康地恩药业股份有限公司，青岛宝依特生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：