本发明专利技术涉及一种天然橡胶再生剂的制备方法，本发明专利技术所述的氧化亚铁硫杆菌的制备方法，其特征在于包括：取5g火山沉积物样品溶于50mL无菌水，30℃，170r／min振荡培养6h，然后静置2h；吸取10mL上层水样加入盛有100mL已灭菌的9K培养基中，30℃，170r／min摇床培养，直至培养基由浅绿色变成红棕色，再进行5次富集培养，再用固体培养基涂布平板法分离、纯化菌种。本发明专利技术制得的氧化亚铁硫杆菌对天然橡胶具有一定的脱硫再生效果，经过氧化亚铁硫杆菌作用后，天然橡胶的硫含量降低，硫被氧化生成S-O基团，表明氧化亚铁硫杆菌对天然硫化胶粉的硫交联键有转化或断裂作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种天然橡胶再生剂的制备方法。
技术介绍
1947年，Colmer和Hinkle从矿山酸性废水中首次分离出氧化亚铁硫杆菌(Thiobacillus ferrooxiidans, T.f)。T.f 为短杆菌，0.5 X1.0 μ m,具有圆纯的末端，单生或对生，成短链者较少，严格好氧，利用氨作为氮源，利用硝酸盐缓慢。该菌种广泛存在于土壤、海水、淡水、垃圾、硫磺泉和沉积硫内，尤以金属硫化矿和煤矿等酸性矿坑水(pH〈4)中最为常见。T.f化能自养，靠氧化Fe2+为Fe3+及将低价态硫氧化为硫酸盐获得能量进行生命活动，又因其较强的氧化Fe2+和氧化s的能力，广泛应用于烟气脱硫、煤炭脱硫、生物浸矿和生物淋滤等研究中。早在1945年,Thaysen等就认为可利用有氧化能力的微生物对废橡胶进行脱硫；L0effler Μ.等利用氧化亚铁硫杆菌对废橡胶进行再生，认为氧化亚铁硫杆菌对废橡胶脱硫再生有一定的效果；Christiansson Μ.等利用氧化亚铁硫杆菌处理废轮胎胶(ground tire rubber, GTR),作用 10 d,脱硫率为 5.3%,而作用 20 d,脱硫率达 7.8% ；Romine等利用氧化亚铁硫杆菌对GTR进行脱硫，作用10 d后，培养基中的硫酸根含量显著提高。利用微生物脱硫对废橡胶进行再生有明显的优势，它不需要高温、高压和催化剂，在常温常压脱硫，脱硫费用低，设备要求简单。但这种再生技术还处在实验室研究阶段，存在微生物脱硫活性不高，脱硫率低，作用时间长，机理不明确等问题，商业化的道路还很长。目前国内没有这方面的研究。 专利技术内容本专利技术旨在提供一种脱硫再生废橡胶的。本专利技术所述的，其特征在于包括: 取5 g火山沉积物样品溶于50 mL无菌水，30°C，170 r / min振荡培养6 h，然后静置2 h;吸取10 mL上层水样加入盛有100 mL已灭菌的9K培养基中，30 °C, 170 r / min摇床培养，直至培养基由浅绿色变成红棕色，再进行5次富集培养，再用固体培养基涂布平板法分离、纯化菌种。优选地，9K培养基是用如下方法制得的:A 组分:(NH4)2SO4 3.0 g, KCl 0.1 g, K2HPO4 0.5 g, MgSO4.H2O 0.5 g, Ca (NO3) 2 0.01g，蒸懼水700 mL ；B 组分:FeS04.7H20 44.2 g，蒸馏水 300 mL, 10 mo I / L H2SO4 I mL ； 培养基中A组分于121 °C, 0.1 MPa下湿热灭菌20分钟，B组分加入I mL 10 mo I /L H2SO4在105°C下灭菌，将A组分和B组分混合，调pH2.5。更优选地，所述的固体培养基是向9K培养基中加入1.2%的琼脂及0.03%酵母浸粉。本专利技术制得的氧化亚铁硫杆菌对天然橡胶具有一定的脱硫再生效果，经过氧化亚铁硫杆菌作用后，天然橡胶的硫含量降低，硫被氧化生成S-O基团，表明氧化亚铁硫杆菌对天然硫化胶粉的硫交联键有转化或断裂作用。具体实施例方式实施例一。1、制备9K培养基:A 组分:(NH4)2SO4 3.0 g, KCl 0.1 g, K2HPO4 0.5 g, MgSO4.H2O 0.5 g, Ca (NO3) 2 0.01g，蒸懼水700 mL ；B 组分:FeS04.7H20 44.2 g，蒸馏水 300 mL, 10 mo I / L H2SO4 I mL ； 培养基中A组分于121 °C, 0.1 MPa下湿热灭菌20分钟，B组分加入I mL 10 mo I /L H2SO4在105°C下灭菌，将A组分和B组分混合，调pH2.5，待用。2、制备固体培养基 向9K培养基中加入1.2%的琼脂及0.03%酵母浸粉，待用。3、制备氧化亚铁硫杆菌 取5 g火山沉积物样品溶于50 mL无菌水，30°C，170 r / min振荡培养6 h，然后静置2 h;吸取10 mL上层水样加入盛有100 mL已灭菌的9K培养基中，30 °C, 170 r / min摇床培养，直至培养基由浅绿色变成红棕色，再进行5次富集培养，再用固体培养基涂布平板法分离、纯化菌种。平板上的菌落为白色小圆点，略黄，直径约I mm，凸起，边缘整齐，较干。经透射电镜观察，该菌为圆头短杆状，大小为0.5 / μπιΧΙ.Ομπι，能运动，革兰氏染色阴性。经16SrDNA序列分析，16S rDNA的测序结果在NCBI中blast分析，与氧化亚铁硫杆菌菌株afl、DXH, TSK-U H-4的同源性达100%，证实为氧化亚铁硫杆菌。 实施例二。取生长24 h菌液(10 7个/ mL)作为种子液，按10%接种量接入100 mL脱硫再生培养基后于30°C，170 r / min下培养，24 h后加入2.5 g天然橡胶粉，5份、2份硫天然胶片(natural rubber, NR)各一片(0.5 cmX0.5 cm),继续培养10 d后测定橡胶的基团变化、硫含量变化及橡胶表面形态。其中不论是5份硫还是2份硫，NR胶片在I 010-1 070 cnT1处出现吸收峰。I010-1 070 cnT1处是S = O的吸收峰，说明T.f I能对橡胶中的烃类产生代谢裂变作用，使橡胶中交联的硫被氧化，产生了亚砜，硫交联键被打断。NR经T.f I脱硫再生后能量色散X射线光谱(EDS)分析表明，s元素的含量显著降低，脱硫率达52.6%。未处理NR表面比较平整， 处理后的NR胶片的表面结构由原来的致密状变为疏松状，产生许多空洞。说明T.f的作用使橡胶的交联键断裂以致橡胶表面出现空洞。本文档来自技高网...
【技术保护点】
氧化亚铁硫杆菌的制备方法，其特征在于包括：取5?g火山沉积物样品溶于50?mL无菌水，30℃，170?r／min振荡培养6?h，然后静置2?h；吸取10?mL上层水样加入盛有100?mL已灭菌的9K培养基中，30?℃，170?r／min摇床培养，直至培养基由浅绿色变成红棕色，再进行5次富集培养，再用固体培养基涂布平板法分离、纯化菌种。
【技术特征摘要】
1.氧化亚铁硫杆菌的制备方法，其特征在于包括: 取5 g火山沉积物样品溶于50 mL无菌水，30°C，170 r / min振荡培养6 h，然后静置2 h;吸取10 mL上层水样加入盛有100 mL已灭菌的9K培养基中，30 °C, 170 r / min摇床培养，直至培养基由浅绿色变成红棕色，再进行5次富集培养，再用固体培养基涂布平板法分离、纯化菌种。2.如权利要求1所述的氧化亚铁硫杆菌的制备方法，其特征在于9K培养基是用如下方法制得的:A 组分:(NH4)2SO4 3.0 g, KCl 0.1 g, K2HPO4 0....
【专利技术属性】
技术研发人员：周莉英，
申请(专利权)人：陕西宣和通科技发展有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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