一种嗜血杆菌培养基及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种嗜血杆菌培养基及其制备方法，所述嗜血杆菌培养基由基础培养基、哥伦比亚琼脂、X因子、V因子、杆菌肽纸片抑菌剂组成，其中，在基础培养基中，其他添加组分的重量百分比为哥伦比亚琼脂0.3-3%、X因子0.001-0.003%、V因子0.001-0.003%、杆菌肽纸片抑菌剂0.0005-0.002%，加热混合制备而成；所述培养基营养丰富，培养能力一致性高，细菌生长极易观察，通过在特定条件下保持X因子和V因子正常活性，供嗜血流感杆菌稳定生长，抗杂菌能力强，可有效分出嗜血杆菌，大大降低了成本，直接成本只相当于国外改良巧克力琼脂的30%左右；其制备方法简单，适合规模化工业生产的需要。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了，所述嗜血杆菌培养基由基础培养基、哥伦比亚琼脂、X因子、V因子、杆菌肽纸片抑菌剂组成，其中，在基础培养基中，其他添加组分的重量百分比为哥伦比亚琼脂0.3-3%、X因子0.001-0.003%、V因子0.001-0.003%、杆菌肽纸片抑菌剂0.0005-0.002%，加热混合制备而成；所述培养基营养丰富，培养能力一致性高，细菌生长极易观察，通过在特定条件下保持X因子和V因子正常活性，供嗜血流感杆菌稳定生长，抗杂菌能力强，可有效分出嗜血杆菌，大大降低了成本，直接成本只相当于国外改良巧克力琼脂的30%左右；其制备方法简单，适合规模化工业生产的需要。【专利说明】
本专利技术涉及一种培养基及其制备方法，尤其是一种嗜血杆菌培养基及其制备方 法。
技术介绍
当代感染医学认为嗜血流感杆菌是上呼吸道、下呼吸道感染，肺炎、中耳炎、眼及 眼周感染的主要致病菌。但该菌为苛养菌常规细菌培养不宜检出，需要含有X、V因子特殊 培养基方能检出，常用的就是加入脱纤维羊血的巧克力培养基或国际上流行的改良巧克力 培养基，它们均以褐色背景为基础，因此在观察嗜血杆菌的生长时由于颜色发暗并不透明 不易观察。 国内以往常用的用于嗜血杆菌的分离培养的培养基为巧克力琼脂培养基，其配制 方法为： 在基础培养基基础上于80_90°C左右无菌加入脱纤维羊血，使血球破裂释放出X 因子(氯化血红素）和V因子(辅酶I )，供嗜血杆菌的生长。此种培养基中嗜血杆菌生长良 好，但是，在其配制过程中存在着下列不足： 1、无菌脱纤维羊血的采集费时费力； 2、血球的破坏过程中不同羊血的破坏程度不一样，很容易出现批间差； 3、在配制过程中，血液稍有摇动不及时的地方，就会造成较大的颗粒，且摇动也容 易出现大量气泡，给倾倒造成很大麻烦； 4、培养基本身颜色较深，不易观察形成的菌落。 国外对巧克力培养基也进行了改良，将脱纤羊血改加牛血红蛋白以提供X因子和 含有V因子的添加剂，培养基加入抑菌剂抑制杂菌来改善培养基的质量，这种方法改善了 培养基的质量，嗜血杆菌检出率明显提高但这种培养基造价昂贵在国内无法普遍推广，另 外观察标本依然在褐色培养基上进行，不宜观察。 经研究发现，V因子本身性质特殊，无法在高温条件与低温条件下进行保存，一般 的条件下均会使V因子丧失活性，又因为临床标本中含有大量的嗜血杆菌，而标本中含有 一些快速生长的杂菌，标本接种在巧克力培养基上由于没有抑菌剂杂菌生长迅速，很快变 化成优势菌，抑制了嗜血杆菌的生长，将10倍于杂菌的嗜血杆菌混合接种在巧克力培养基 上，生长的结果基本上看不到嗜血杆菌的生长，为了解决杂菌污染的问题分别加入万古霉 素、可林霉素(抑制革兰氏阳性菌）和杆菌肽(抑制革兰氏阴性菌）将杂菌全部抑制，达到了 很好分离嗜血杆菌的目的。但是杆菌肽用量极大，达到300mg/L，成本很高。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种嗜血杆菌培养基。 本专利技术所要解决的另一技术问题在于提供上述嗜血杆菌培养基的制备方法。 为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是： 一种嗜血杆菌培养基，由基础培养基、哥伦比亚琼脂、X因子(氯化血红素)、V因 子(辅酶I )、杆菌肽纸片抑菌剂组成，其中，在基础培养基中，其他添加组分的重量百分比 为哥伦比亚琼脂0. 3-3%、X因子0. 001-0. 003%、V因子0. 001-0. 003%、杆菌肽纸片抑菌剂 0.0005-0. 002%。 优选的，上述嗜血杆菌培养基，在基础培养基中，其他添加组分的重量百分比为哥 伦比亚琼脂2%、X因子0. 002%、V因子0. 0025%、杆菌肽纸片抑菌剂0. 0017%。 优选的，上述嗜血杆菌培养基，所述基础培养基为营养肉汤、营养琼脂或蛋白胨 水。 优选的，上述嗜血杆菌培养基，所述基础培养基为含有蛋白胨、氯化钠和磷酸盐的 牛肉浸液，PH7.2-7.6。 上述嗜血杆菌培养基的制备方法，具体制备步骤如下： (1)向基础培养基中加入0. 3-3%哥伦比亚琼脂，煮沸； (2)冷却至45°C，向基础培养基中继续加入0· 001-0. 003%X因子、0· 001-0. 003%V 因子和0. 0005-0. 002%杆菌肽纸片抑菌剂，摇匀； (3)倾注平板。 本专利技术的有益效果是： 上述嗜血杆菌培养基，营养丰富，培养能力一致性高，细菌生长极易观察，通过在 特定条件下保持X因子和V因子正常活性，供嗜血流感杆菌稳定生长，抗杂菌能力强，可有 效分出嗜血杆菌，大大降低了成本，直接成本只相当于国外改良巧克力琼脂的30%左右；其 制备方法简单，适合规模化工业生产的需要。 【具体实施方式】 下面结合具体实施例对本专利技术所述技术方案作进一步的说明。 实施例1 一种嗜血杆菌培养基，由基础培养基、哥伦比亚琼脂、X因子(氯化血红素)、V因子 (辅酶I )、杆菌肽纸片抑菌剂组成，其中，在基础培养基中，其他添加组分的重量百分比为 哥伦比亚琼脂2%、X因子0. 002%、V因子0. 0025%、杆菌肽纸片抑菌剂0. 0017%。 上述嗜血杆菌培养基的制备方法，具体制备步骤如下： ( 1)向基础培养基中加入2%哥伦比亚琼脂，煮沸； (2 )冷却至45 °C，向基础培养基中继续加入0. 002%X因子、0. 0025%V因子和 0.0017%杆菌肽纸片抑菌剂，摇匀； (3)倾注平板。 实施例2 一种嗜血杆菌培养基，由基础培养基、哥伦比亚琼脂、X因子(氯化血红素)、V因子 (辅酶I )、杆菌肽纸片抑菌剂组成，其中，在基础培养基中，其他添加组分的重量百分比为 哥伦比亚琼脂0. 3%、X因子0. 003%、V因子0. 001%、杆菌肽纸片抑菌剂0. 0005%。 上述嗜血杆菌培养基的制备方法，具体制备步骤如下： (1)向基础培养基中加入0. 3%哥伦比亚琼脂，煮沸； (2)冷却至45°C，向基础培养基中继续加入0· 003%X因子、0· 001%V因子和0· 0005%【权利要求】1. 一种嗜血杆菌培养基，其特征在于：由基础培养基、哥伦比亚琼脂、X因子、V因子、杆 菌肽纸片抑菌剂组成，其中，在基础培养基中，其他添加组分的重量百分比为哥伦比亚琼脂 0· 3-3%、X 因子 0· 001-0. 003%、V 因子 0· 001-0. 003%、杆菌肽纸片抑菌剂 0· 0005-0. 002%。2. 根据权利要求1所述的嗜血杆菌培养基，其特征在于：在基础培养基中，其他添加 组分的重量百分比为哥伦比亚琼脂2%、X因子0. 002%、V因子0. 0025%、杆菌肽纸片抑菌剂 0·0017%。3. 根据权利要求1或2所述的嗜血杆菌培养基，其特征在于：所述基础培养基为营养 肉汤、营养琼脂或蛋白胨水。4. 根据权利要求3所述的嗜血杆菌培养基，其特征在于：所述基础培养基为含有蛋白 胨、氯化钠和磷酸盐的牛肉浸液，PH7. 2-7. 6。5. 权利要求1-4之一所述的嗜血杆菌培养基的制备方法，其特征在于：具体制备步骤 如下： (1) 向基础培养基中加入0. 3-3%哥伦比亚本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种嗜血杆菌培养基，其特征在于：由基础培养基、哥伦比亚琼脂、X因子、V因子、杆菌肽纸片抑菌剂组成，其中，在基础培养基中，其他添加组分的重量百分比为哥伦比亚琼脂0.3‑3%、X因子0.001‑0.003%、V因子0.001‑0.003%、杆菌肽纸片抑菌剂0.0005‑0.002%。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张爱霞，
申请(专利权)人：天津川禾医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12