杀蚊幼－孑孓清无色无味，专杀蚊幼－孑孓，杀蚊幼广谱，效果稳定，不污染环境，对人畜禽鱼虾和有益昆虫无毒无害。并能彻底净化水质，达到综合防治效果。该菌从自然罹病蚊幼分离的。在LB培养基中生长良好。经分离纯化，生理生化鉴定，确定该菌为苏云金芽胞杆菌以色列亚种（Bacillusthuringiensis subsp israelensis Bti)。该菌对淡色库蚊（Culex pipiens pallens）等8种蚊幼有极强杀伤力。该菌生长中所产生的毒素蛋白起杀伤作用，蚊幼取食后，2~12小时破坏蚊幼的胃蛋白酶，迫使蚊幼不能生长发育得败血病死亡。Bti在芽孢形成过程中，合成五种具有杀伤蚊幼的活性蛋白。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术是经过分离、筛选、多次纯化、生理、生化鉴定得到的一种病原微生物—细菌，该菌为苏云金芽胞杆菌以色列亚种（Bacillusthuingiensissubspisraelensis简称Bti)。该菌在实验室做了大量分离、筛选、纯化、生理、生化鉴定、16SDNA序列分析和多种动物的慢性、亚急性、急性等安全性试验外，还进行摇瓶、小罐、中灌、大罐和10吨灌生产发酵。除了能够实现稳定产业化生产外，更重要的是，还要筛选出能够适宜Bti发酵生长良好所需要的碳源、氮源、磷源培养基有效成分。本公司在长期生产发酵中，研制了出适宜Bti发酵生长旺盛、芽孢数量多、芽孢质量好、高质量形成晶体蛋白毒素（该Bti菌株在发酵生长过程中能产生5种以上晶体蛋白毒素）的培养基。苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bti)是一种重要的兼型病原微生物—细菌，已知可分为40个血清种和54个血清亚种，对蚊幼虫—孑孓有毒效的菌株有3种，血清型为H-14(以色列亚种)、PG-14(摩氏变种)和73-E10-2(达姆施塔特变种)，应用最广的是苏云金芽孢杆菌以色列亚种。BtHi-14由Goldbery(1972)和Margelit(1977)在以色列分离出。该菌对蚊幼虫—孑孓有较高的专一性，在宿主肠道内，晶体蛋白原毒素在高pH值和适合的酶的作用下，很快转变为较小的有毒亚单位，蚊幼虫—孑孓吞食晶体蛋白后，引起中肠细胞破裂得败血病症而死亡。我国20世纪70年代开始对以色列亚种进行中试生产，生产的杀蚊幼剂在野外污水池、水稻田以浓度1~3mg/L应用，24小时杀灭库蚊，对伊蚊幼虫—孑孓防治效果达90%，对按蚊幼虫—孑孓也有良好效果。至今该制剂年产数百万吨，主要用来杀灭容器积水中的伊蚊幼虫—孑孓，特别是饮水水缸中的埃及伊蚊幼虫—孑孓。在我国南、北方有较大面积的应用，施药1~2天后蚊幼虫—孑孓密度明显下降，有效率均在93%~95.3%。国内研制的苏云金芽孢杆菌以色列亚种—187漂浮颗粒剂防治水稻田里的中华按蚊，持效期为16天；巴州点绿农林科技有限公司研制的杀蚊幼制剂—孑孓清在野外芦苇湿地、污水处理厂、水稻田、养殖场污水排放区域等地施药1天后，查结果，杀死淡色库蚊幼虫—孑孓98%、杀死中华按蚊幼虫—孑孓100%、杀死致倦库蚊幼虫—孑孓100%、杀死凶小库蚊幼虫—孑孓99%、杀死曼蚊幼虫—孑孓100%、杀死和呐蚊幼虫—孑孓98%，有的区域100%。持效期都在45天以上，效果稳定。
技术介绍
杀蚊幼制剂－孑孓清使用的细菌是分离到的一株苏云金芽孢杆菌以色列亚种；属革兰氏阳性长杆菌，在适宜的pH值和营养充足条件下，杆菌在生长发育过程中，能形成椭圆形孢子。杆菌在生长发育形成孢子最后阶段时，生长成为具有极强杀伤力的蛋白毒素－蛋白晶体。蚊幼虫—孑孓取食蛋白晶体进入消化道后，被碱性肠液破坏成较小单位的δ－内毒素，破坏蚊幼虫—孑孓的胃蛋白酶，使中肠停止蠕动，中肠上皮细胞慢慢解离，蚊幼虫—孑孓开始停止取食。芽孢在蚊幼虫—孑孓的中肠开始萌发，经被破坏的肠壁进入血腔后开始大量繁殖，最后致使蚊幼虫—孑孓全身瘫痪，使蚊幼虫—孑孓得败血病症而死。杀蚊幼制剂—孑孓清产品功能：杀蚊幼虫—孑孓广谱、效果稳定、持效期长，对人、畜、禽和有益昆虫无毒、无害，应用安全、使用方便、省工省时、不污染环境、运输方便、靶目标准确、性能稳定。是杀灭蚊幼虫—孑孓、有效控制和减少成蚊密度、把成蚊传播丝虫病、登革热、疟疾、黄热病、脑炎、盘尾丝虫病，虫媒病毒传染病的传播等降到最低限度。长期使用，不产生抗性，还能彻底净化水质。杀蚊幼制剂—孑孓清作用机理：主要活性成分是半包晶体－蛋白毒素。蚊幼虫－孑孓取食后，很快能破坏孑孓的胃蛋白酶，被碱性肠液破坏成较小单位的δ－内毒素。使中肠停止蠕动，中肠上皮细胞慢慢解离，蚊幼虫—孑孓开始停止取食。芽孢在蚊幼虫—孑孓中肠萌发，经被破坏的肠壁进入血腔后开始大量繁殖，致使蚊幼虫—孑孓全身瘫痪，使蚊幼虫—孑孓，无能力再取食而得败血病症死亡。杀蚊幼制剂—孑孓清用量：水域区为1－3ml/m2。家禽、家畜饲养场、养猪场、养牛场、污水处理厂、城市水管网区、城市下水道、河流、堰塘等区域蚊幼虫—孑孓发生量严重区域、或是有机质含量高的区域，为3－5ml/m2。
技术实现思路
：本专利技术主要用于杀蚊幼制剂——孑孓清产业化生产用的液体发酵培养基配方。培养基配方(％)（LB斜面培养基全球通用在此处省略）发酵液体培养基：酵母粉3.0玉米浆2.5葡萄糖2.0氯化钙0.1（CaCl）碳酸钙0.1（CaCO3）磷酸二氢钾0.1（KH2P04）添加剂0.3复合维生素若干pH值(灭菌前)7.5碳源、磷源培养基：碳源2.5磷酸二氢钾0.3（KH2PO4）氯化钙0.2（CaCl2）氯化锌0.03（ZnCl2）三氯化铁0.05（FeCl3）氯化镁0.005（MgC12）氯化钴0.005（CoC12）氯化铜0.005（CuC12）添加剂0.3复合维生素若干；氮源、磷源培养基：氮源2.7磷酸二氢钾0.3（KH2PO4）磷酸氢二钾0.3（K2HPO4）氯化钙0.2（CaC12）氯化锌0.05（ZnC12）三氯化铁0.05（FeC13）氯化钴0.005（CoC12）氯化铜0.005（CuC12）添加剂0.3复合维生素若干：单一碳源、氮源配方筛选原料：山芋粉，马铃薯粉，木薯粉，玉米饼粉，玉米粉，糖蜜。单一氮源配方筛选原料蛋白胨，酵母粉，黄豆饼粉，蚕蛹粉，鱼粉，花生饼粉，棉籽饼粉（不要抗虫棉的棉籽饼）。苏云金芽孢杆菌以色列亚种几丁质酶氨基酸序列Ichi151DCDKYARCGNFGELKRLKAKYPHLKTIISVGGWTWSNRFSDMAADEKTRKVFAFSTVAFLAc243SAWDEPYKGNFGNLMALKQAHPDLKILPSVGGWTLSDPFYFLG-DKTKRDTFVASVREFLAl241VDAKDPIRGVYSQLMALKQRYPDLKILPSVGGWTLSDPFHGFT-NKANPDTFVASVKQFLBcAl132DTWDQPIAGNINQLNKLKQTNPNLKTIISVGGWTWSNRFSDVAATAATREVFANSAVDFLBl128DVWDEPIRGNFKQLLKLKKSHPHLKTFISVGGWTWSNRFSDVAADPVARGNFAASAVEFLBs125DTWDEPIRGNFKQLLKLKKNHPHLKTFISVGGWSWSNRFSDVAADPAARENFAASAVNFLCt91AILDTPIRGHFGQLIKYKEQYPHVRTLISVGGWTESKYFSDVALTEESRNTFADSCVEFLSm243TAWDDPYKGNFGQLMALKQAHPDLKILPSIGGWTLSDPFFFMG-DKVKRDRFVGSVKEFLIchi211RAYG-FDGVDLDWEYPGVETIPGGSYRP-EDKQNFTLLLQDVRNALNAc302QTWKFFDGVDIDWEFPGGQGANPSLGGP-NDGATYVVLMKELRAMLDAl300KTWKFYDGVDIDWEFPGGDGPNPDLGDPINDGPAYVALMQELRAMLDBcAl192RKYN-FDGVDLDWEYPVSGGLDGNSK本文档来自技高网...
【技术保护点】
苏云金芽孢杆菌以色列亚种广泛存在自然界中，国外和我国的研究机构及部分大专院校，先后对该菌进行不同程度的研究和应用，因此，各自用的培养基成分有所不同；由于培养基成分不同，发酵培育的芽孢、晶体蛋白毒素等数量、产量、质量都会有极大的差别；而我们研制的培养基配方，特别是液体发酵生产用的培养基配方与其他单位用的都不同，所以我们生产出来的芽孢杆菌以色列亚种制剂的效价，要高出其他生产厂家两倍多，国家标准是400单位，其他厂家都只能达到350单位，巴州点绿农林科技有限公司研制的均在1000单位以上（本专利技术在10吨发酵罐中，用黄豆饼粉、玉米淀粉等为底物发酵28小时，取样检测，效价平均为2899Iu/uL，其性能指标分别达到22100Iu/mg，活性孢子数4*1709个/g以上，细度为99%通过标准300目筛），所以，特要求对该培养基成分的配方得到应有得保护。
【技术特征摘要】
1.苏云金芽孢杆菌以色列亚种广泛存在自然界中，国外和我国的研究机构及部分大专院校，先后对该菌进行不同程度的研究和应用，因此，各自用的培养基成分有所不同；由于培养基成分不同，发酵培育的芽孢、晶体蛋白毒素等数量、产量、质量都会有极大的差别；而我们研制的培养基配方，特别是液体发酵生产用的培养基配方与其他单位用的都不同，所以我们生产出来的芽孢杆菌以色列亚种制剂的效价，要高出其他生产厂家...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐军，
申请(专利权)人：巴州点绿农林科技有限公司，
类型：发明
国别省市：新疆;65
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。