一种枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂及其制备方法，所述枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂由枯草芽孢杆菌EDR4和化学农药A组成。所述枯草芽孢杆菌EDR4，其保藏编号为CGMCC No.2133。本发明专利技术以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)EDR4和水分散粒剂为活性成份的微生物复配制剂制备简单，操作方便，易于储藏和运输，对农作物无药害，并能保持一定的活菌量，显著抑制病菌菌丝的生长。因此，利用本发明专利技术所制备的微生物复配制剂能够应用在防治葡萄灰霉病和炭疽病中。

Composite preparation of Bacillus subtilis and chemical pesticide and preparation method thereof

The invention discloses a composite preparation of Bacillus subtilis and a chemical pesticide and a preparation method thereof. The composite preparation of Bacillus subtilis and chemical pesticides is composed of Bacillus subtilis EDR4 and chemical pesticide A. The Bacillus subtilis EDR4, its preservation number is CGMCC No.2133. The present invention by Bacillus subtilis (Bacillus subtilis) preparation of microbial compound EDR4 and water dispersible granule as active ingredient has simple preparation, convenient operation, easy storage and transportation, no phytotoxicity to crops, and can maintain a certain amount of live bacteria, inhibit the mycelial growth. Therefore, the microbial composite preparation prepared by the invention can be applied to the prevention of Botrytis cinerea and anthrax in grapes.

【技术实现步骤摘要】
一种枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂及其制备方法
本专利技术属于微生物
，尤其涉及一种枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂及其制备方法。
技术介绍
由植物病原真菌葡萄灰霉病菌Botrytiscinerea引起的葡萄灰霉病是全世界葡萄生产中危害最为严重的病害之一，可导致成熟期果实腐烂或裂果，完全丧失商品价值，严重发生时可造成高达50％左右的产量损失，对葡萄产业影响极大。随着设施栽培葡萄的兴起，大棚内温、湿度小气候环境十分有利于葡萄灰霉病菌的侵染与为害。葡萄炭疽病(Grapebitterrot，又名葡萄晚腐病)是我国乃至全世界葡萄生产中危害最为严重的真菌病害之一，其病原为炭疽菌属(Colletotrichumspp.)真菌，其中，C.gloeosporioides是引起葡萄炭疽病的主要类群，其主要危害葡萄果实，一般情况下可造成产量损10％～15％，如遇潮湿、多雨年份易造成大流行，病穗率达50％～70％。随着设施葡萄栽培的兴起，大棚内温湿度小气候环境十分有利于灰霉病菌和炭疽病菌的侵染与危害，这两种病害逐渐发展为设施葡萄生产的主要病害。B.cinerea是一种强腐生性致病菌，寄主范围广，不同寄主植物间的B.cinerea可相互侵染致病，在作物种质资源中尚未发现完全抗病的材料，也很难培育出抗病品种。因此目前对灰霉病仍以化学防治为主，辅以生物防治和生态防治。常用杀菌剂包括苯并咪唑类、二甲酰亚胺类及甲氧基丙烯酸酯类等，但由于B.cinerea群体结构多样，繁殖速度快，菌株变异速率快且突变菌系田间适应性强等原因，病原菌对上述杀菌剂产生了不同程度的抗药性，某些地区农药防效明显下降，增加了灰霉病防治的难度。葡萄炭疽病的防治以化学防治为主，常用农药有苯并咪唑类和相关衍生物、脱甲基抑制剂(DMIs)、二甲酞亚胺类、氨基甲酸酯类等，但由于C.gloeosporioides群体结构遗传多样，以及单一作用位点化学农药长期使用产生的快速变异菌株且突变菌系田间适应性强，使这两种病原菌对这些药剂都产生了不同程度的抗性，有的地区农药防效明显下降，给葡萄灰霉病和炭疽病防治带来了很大的困难。同时，化学农药的长期使用也带来了农药残留和环境污染等问题，采用低毒、低残留，不污染环境的拮抗微生物防治植物病害成为近年的研究热点。目前国内外研究已发现多种真菌、细菌或其它微生物对灰霉菌和炭疽菌具有寄生或拮抗作用，而且已经有商品制剂应用于生产，但是至今仍存在一些亟待解决的问题。首先，目前开发的生防资源易受外界条件的影响，不容易在植物体内定殖，防治效果不稳定。其次，生防菌发酵液不易储存和运输，在使用过程中，制发酵液繁琐，不易操纵，且单一使用效果并不理想，见效期长，不利于进一步推广应用。目前研究表明，化学农药往往作用位点单一，有害生物抗药性风险极高，并造成大量环境污染以及人畜中毒现象，违背了“绿色植保”的要求。因此，化学农药的长期使用，并不利于有害生物的防控及生态平衡。植物内生菌是一种能在植物组织中定殖与运转，对植物无害甚至有益的微生物，由于它在植物体内有稳定的生存空间，且能产生与宿主植物代谢相同或相似的生理活性物质，因而能有效地抑制病原菌的侵染或提高宿主植物的抗病性。造成近几年，内生菌因其独特的优点成为生物防治的研究热点，为生物防治的应用开辟了新的天地。综上所述，目前开发的生防资源易受外界条件的影响，不容易在植物体内定殖，防治效果不稳定；生防菌发酵液不易储存和运输，在使用过程中，制发酵液繁琐，不易操纵，且单一使用效果并不理想，见效期长，不利于进一步推广应用；化学农药往往作用位点单一，有害生物抗药性风险极高，并造成大量环境污染以及人畜中毒现象。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂及其制备方法，旨在解决目前开发的生防资源易受外界条件的影响，不容易在植物体内定殖，防治效果不稳定；生防菌发酵液不易储存和运输，在使用过程中，制发酵液繁琐，不易操纵，且单一使用效果并不理想，见效期长，不利于进一步推广应用；化学农药往往作用位点单一，有害生物抗药性风险极高，并造成大量环境污染以及人畜中毒现象的问题。本专利技术是这样实现的，一种枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂，所述枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂由枯草芽孢杆菌EDR4和化学农药A组成。进一步，所述枯草芽孢杆菌EDR4，CGMCCNo.2133。进一步，所述枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂为液体悬浮状。进一步，所述枯草芽孢杆菌EDR4的活菌数量为1.593×103CFU/mL。本专利技术的另一目的在于提供一种所述枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂的制备方法，所述枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂的制备方法包括以下步骤：步骤一，将-80℃下保存的枯草芽孢杆菌EDR4菌株在LB固体培养基上活化，挑取枯草芽孢杆菌EDR4单菌落，接种于100mL的LB培养液，于28℃、150rpm振荡培养18h～24h；步骤二，然后按照1％的种子液接种到100mL的LB培养液中，于28℃、150rpm振荡培养48h；将得到的发酵液12000rpm离心5min，收集枯草芽孢杆菌EDR4菌体；步骤三，用无菌水悬浮，配制终浓度为1×108CFU/mL的菌悬液，与1化学农药A混合后获得到微生物复配制剂。进一步，所述LB培养液由10g蛋白胨、10g酵母粉、5gNaCl和1000mL蒸馏水组成，其pH值为7.2。进一步，所述化学农药A为水分散粒剂。本专利技术的另一目的在于提供一种由所述枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂制备的防治葡萄灰霉病制剂。本专利技术的另一目的在于提供一种由所述枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂制备的防治炭疽病制剂。本专利技术提供的枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂及其制备方法，以枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)EDR4和化学农药A为活性成份的微生物复配制剂制备简单，操作方便，易于储藏和运输，对农作物无药害，并能保持一定的活菌量，显著抑制病菌菌丝的生长。因此，利用本专利技术所制备的微生物复配制剂能够应用在防治葡萄灰霉病和炭疽病中。所述复配制剂对葡萄灰霉农菌和葡萄炭疽病菌抑菌效果优异，防病效果良好且稳定；农药使用成本降低，易于制备。附图说明图1是本专利技术实施例提供的枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂的制备方法流程图。图2是本专利技术实施例提供的活性成分EDR4菌株对四种化学农药的耐受性示意图；(A药浓度为1000mg/L,B药浓度为100mg/L,C药浓度为500mg/L,D药浓度为1000mg/L)。图3是本专利技术实施例提供的制备的微生物复配制剂对葡萄灰霉病菌生长的抑制作用示意图；(A为农药A处理，B为微生物复配制剂AEDR4处理,C为EDR4处理，D为CK)。图4是本专利技术实施例提供的制备的微生物复配制剂对葡萄炭疽病菌生长的抑制作用示意图；(A为农药A处理，B为微生物复配制剂AEDR4处理,C为EDR4处理，D为CK；下同)。图5是本专利技术实施例提供的制备的微生物复配制剂处理后葡萄灰霉病和葡萄炭疽病病情指数示意图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。下面结合附图对本专利技术的应用原理作详细的描述。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂由枯草芽孢杆菌EDR4和水分散粒剂组成。

【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂由枯草芽孢杆菌EDR4和水分散粒剂组成。2.如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌EDR4，CGMCCNo.2133。3.如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂为液体悬浮状。4.如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌EDR4的活菌数量为1.593×103CFU/mL。5.一种如权利要求1所述枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂的制备方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌和化学农药的复配制剂的制备方法包括以下步骤：步骤一，将-80℃下保存的枯草芽孢杆菌EDR4菌株在LB固体培养基上活化，挑取枯草芽孢杆菌EDR4单菌落，接种于100mL的LB培养液，于28℃、1...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩青梅，黄丽丽，高小宁，伏波，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61