一种肠杆菌及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　　ｓｐ．及其制备方法和应用，首先是细菌的分离和纯化；其次是确定最适培养基；第三是培养条件的优化，获得了该菌生长的最适合条件，温度为２５－３０℃，ｐＨ为６．５－７．５，９０－１１０ｒｐｍ振荡培养；第四是采取原种置恒温培养箱培养，然后逐级扩大培养；第五是在自然水域利用该菌控制蓝藻水华。本发明专利技术易于操作，设备简单，安全无污染，节省人力，适宜工业化生产。该菌的培养、制备及应用，提供了一条蓝藻水华控制的有效途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及水环境保护、水华控制、应用微生物和生物
；更具体涉及一种肠杆菌，同时还涉及肠杆菌的制备方法，以及肠杆菌在治理蓝藻水华中的用途。
技术介绍
在富营养水体中，某些蓝藻能快速生长，在水体表层大量聚集，形成蓝藻水华。蓝藻水华引起的一系列环境和健康问题，正受到世界各国的高度重视。藻类尤其产毒素蓝藻过度繁殖是导致湖泊水环境恶化的关键环节，同时对人类健康构成了潜在的威胁。针对我国湖泊严重富营养化生态灾害问题，探索藻类的控制、“水华”发生的抑制、湖泊水质的改善是非常必要的。藻类的控制技术可归结为物理方法、化学方法和生物方法。物理方法主要是电磁场、机械除藻等，处理能力有限，且局限于水处理工程应用。化学除藻的方法主要包括施用除草剂、杀藻剂及金属盐等，虽有快速高效的优点，但会带来水体的二次污染问题。生物学控藻技术是利用生物间的各种相互作用抑制对藻类的生长、繁殖，从而达到控制水华的目的。溶藻细菌(algae-lysing bacteria)，作为水生态系统组成生物，在天然水体中具有重要作用。近年来，不少国内外研究者认为水华和赤潮的突然消亡可能与溶藻细菌的感染有关。溶藻细菌作为水华和赤潮防治的生物，已经引起越来越多人的关注。我国已经成为水华和赤潮的多发国家，寻求有效的水华和赤潮防治途径势在必行。然而由于很多溶藻细菌在自然水体中的比率较低，分离比较困难，加之环境因子的多变性、部分细菌溶藻能力的不稳定性，国内对溶藻细菌的研究还处于起步阶段，所以分离、培养和应用一种强烈溶解藻细胞的细菌非常重要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种肠杆菌Enterobacter sp.，该菌能够有效地抑制藻类生长。本专利技术的另一个目的在于提供一种制备肠杆菌的方法，其培养易于操作，设备简单，适宜工业化生产。本专利技术的再一个目的在于提供一种肠杆菌在蓝藻水华控制中的应用，相比其他方法，使用细菌控藻不会带来二次污染，并在大水体中形成一种新的生态平衡。为了达到上述目的，本专利技术采用了以下技术措施肠杆菌Enterobacter sp.，保藏单位中国典型培养物保藏中心，地址中国.武汉.武汉大学，保藏日期2004年2月12日，保藏编号CCTCC No.M204010。一种肠杆菌的制备方法如下A.分离肠杆菌从污染水体采水样，用涂平板的方法挑选单菌落，挑选对蓝藻细胞生长有强烈抑制作用的肠杆菌，进行培养；B.菌种特征1)细菌的形态特征杆状，长度约0.5-0.7μm，能运动。产生黄色菌落，圆形，略平，有特殊气味；2)生理生化特征 C.培养液配制硝酸钠 150mg磷酸氢二钾 4mg硫酸镁 7.5mg氯化钙 3.6mg柠檬酸 0.6mg柠檬酸铁铵 0.6mg乙二胺四乙酸 0.1mg碳酸钠 2mg，A5溶液 0.1ml大豆胰蛋白 0.6g蒸馏水 99.9ml〔注〕A5溶液配方硼酸 61.0mg硫酸锰 169.0mg硫酸锌 287.0mg硫酸铜 2.5mg钼酸铵 12.5mgD.培养条件温度25-30℃，pH为6.5-7.5，90-110rpm振荡培养。E.培养流程a)一级菌种培养将1ml原种加入100ml培养液中，25-30℃静止培养。b)二级菌种培养将100ml一级菌种培养液加入4L培养液中，25-30℃静止培养。c)三级培养将二级培养所得的菌液倒入容积为2.5×1.6×1.2m3的水泥池塘，室外培养5-7天。d)肠杆菌保种0.8-1.2％琼脂固化的细菌培养基，0-4℃保存。利用该菌控制蓝藻水华滇池围隔及200亩水域，选用该菌做溶藻试验，将一定浓度的菌液喷洒在水体中，8-15天测水华叶绿素含量，下降60-80％。本专利技术易于操作，设备简单，安全无污染，节省人力，适宜工业化生产。该菌的培养、制备及应用，提供了一条蓝藻水华控制的有效途径。具体实施例方式本专利技术步骤如下肠杆菌Enterobacter sp.，于2004年2月12日在武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No.M204010。一种肠杆菌的制备方法如下A.分离肠杆菌从污染水体采水样，用涂平板的方法挑选单菌落，挑选对蓝藻细胞生长有强烈抑制作用的肠杆菌，进行培养；B.菌种特征1)细菌的形态特征杆状，长度约0.5-0.7μm，能运动。产生黄色菌落，圆形，略平，有特殊气味；2)生理生化特征 C.培养液配制硝酸钠 150mg磷酸氢二钾 4mg硫酸镁 7.5mg氯化钙 3.6mg柠檬酸 0.6mg柠檬酸铁铵 0.6mg乙二胺四乙酸 0.1mg碳酸钠 2mg，A5溶液 0.1ml大豆胰蛋白 0.6g蒸馏水 99.9ml〔注〕A5溶液配方硼酸 61.0mg硫酸锰 169.0mg硫酸锌 287.0mg硫酸铜 2.5mg钼酸铵 12.5mgD.培养条件温度30℃，pH为7，90-110rpm振荡培养。E.培养流程a)一级菌种培养将1ml原种加入100ml培养液中，30℃静止培养。b)二级菌种培养将100ml一级菌种培养液加入4L培养液中，30℃静止培养。c)三级培养将二级培养所得的菌液倒入容积为2.5×1.6×1.2m3的水泥池塘，室外培养7天。d)肠杆菌保种1.2％琼脂固化的细菌培养基，0℃保存。利用该菌控制蓝藻水华A.细菌的喷洒将获得的肠杆菌培养物按照2.5-3×105cells/L喷洒在富蓝藻水华发生的水体中。B.实验水质监测定期采集实验区水样，检测结果表明实验区内水体叶绿素水华叶绿素含量下降，水体透明度提高，蓝藻种群优势度降低，同时可观察到水体颜色变浅。C.应用实例不同的环境条件下复合菌净水的测试。1)光照培养250ml三角瓶中，25℃，不通气。6天以后惠氏微囊藻的叶绿素下降率为100％，显微镜下几乎看不到活的藻细胞，只见细胞碎片。2)黑暗培养1L三角瓶中，25℃，不通气。6天以后惠氏微囊藻的叶绿素下降率为87％。三天后再测，发现惠氏微囊藻的叶绿素下降率达到93％。3)室温培养5L玻璃瓶中，25℃，不通气。5天后水华蓝藻的叶绿素下降率为59％；10天后叶绿素下降率为96％。4)自然水域滇池1500立方米的围隔中，温度12～17℃，自然状态。加入肠杆菌各为3000毫升，数目为108个/毫升。水华叶绿素含量下降70-80％。滇池200亩水域中，温度12～17℃，自然状态。加入肠杆菌各300升，数目为8×108个/毫升。水华叶绿素含量下降60-70％。权利要求1.一种肠杆菌，肠杆菌(Enterobacter sp.)，CCTCC No.M204010。2.一种用于权利要求1所述的肠杆菌的制备方法，包括下列步骤A、分离肠杆菌从污染水体采水样，用涂平板的方法挑选单菌落，挑选对蓝藻细胞生长有强烈抑制作用的肠杆菌，进行培养；B、培养基配制硝酸钠150mg磷酸氢二钾4mg硫酸镁7.5mg氯化钙3.6mg柠檬酸0.6mg柠檬酸铁铵0.6mg乙二胺四乙酸 0.1mg碳酸钠2mg，A5溶液 0.1ml大豆胰蛋白0.6g蒸馏水99.9mlC、培养条件温度30-35℃，pH为6.5-7.5，90-110rpm振荡培养；D、培养流程1)一级培养将1ml原种加入100ml培养液中，25-30℃静止培养；2)二级培养将100ml一级培养物加入4L培养液中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肠杆菌，肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　　ｓｐ．），ＣＣＴＣＣ　　Ｎｏ．Ｍ２０４０１０。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘永定，史顺玉，沈银武，陈坤，
申请(专利权)人：中国科学院水生生物研究所，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]