一种高纯度环孢菌素A衍生物的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种利用丝状真菌(Tolypocladium?inflatum)发酵培养物制备环孢菌素A衍生物的方法。该方法包括使用助滤剂，经过过滤、脱色、吸附、结晶等步骤，得到环孢菌素A衍生物的粗提物，再借助聚合物微球对粗提物进行层析分离，得到高纯度的环孢菌素A衍生物产品。本发明专利技术的优点在于采用大孔树脂提取分离环孢菌素A衍生物，工艺简单易行，适宜于工业化规模生产；并首次将聚合物微球用于该产品的层析分离，可以制备高纯度的环孢菌素A衍生物产品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于工业微生物
，涉及药品原料的制备方法，具体地说具体涉及到一种从发酵培养物中分离纯化环孢菌素A衍生物的制备方法。
技术介绍
环抱菌素A (CyclosporineA, CsA)是一种从丝状真菌(Tolypocladium inf latum)培养液中分离出的由11个氨基酸组成的环肽。从20世纪80年代CsA作为免疫抑制剂用于临床以来，在器官移植治疗中发挥了重大作用，奠定并推动了器官移植的发展。目前，全世界已有超过20万例的患者使用环孢菌素A作为器官移植时的抗排斥反应药物(陈代杰编。微生物药物学[M]。上海:华东理工大学出版社，1999，140)。此外，环孢菌素A还具有广泛的其它生物学活性如抗真菌、抗寄生虫、抗HIV、抗炎、逆转肿瘤细胞多药耐药等作用，但是，由于其存在比较严重的肝肾毒性以及溶解性差，治疗指数窄，生物利用度低等缺点影响了它在这些领域的进一步应用。人们开始尝试对其结构进行改造合成了一系列化合物，并从中寻找毒副作用低的免疫抑制剂或虽然无免疫抑制活性，但毒性低，具有其它生物学活性的衍生物(季新燕，温耀明，陈振伟等。环孢素的生物学活性及其衍生物的研究进展，国外本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高纯度环孢菌素A衍生物的制备方法，其特征在于该方法包括下述步骤：1)在常温条件下在环孢菌素A衍生物发酵液中加入助滤剂，搅拌50分钟?1.5小时至助滤剂分散均匀，过滤，固液分离得到环孢菌素A衍生物滤液；2)滤液使用大孔脱色树脂脱色；3)脱色液导入大孔吸附树脂进行吸附，饱和树脂用解吸剂解吸，得到解吸液；4)解吸液浓缩、结晶，固液分离得到环孢菌素A衍生物粗粉；5)将环孢菌素A衍生物粗粉用极性溶剂溶解，注入聚合物微球层析柱；6)使用极性溶剂与水的混合液进行梯度洗脱，收集环孢菌素A衍生物洗脱液；7)洗脱液浓缩、萃取、结晶，固液分离得到环孢菌素A衍生物精粉。

【技术特征摘要】
1.一种高纯度环孢菌素A衍生物的制备方法，其特征在于该方法包括下述步骤: 1)在常温条件下在环孢菌素A衍生物发酵液中加入助滤剂，搅拌50分钟-1.5小时至助滤剂分散均匀，过滤，固液分离得到环孢菌素A衍生物滤液； 2)滤液使用大孔脱色树脂脱色； 3)脱色液导入大孔吸附树脂进行吸附，饱和树脂用解吸剂解吸，得到解吸液； 4)解吸液浓缩、结晶，固液分离得到环孢菌素A衍生物粗粉； 5)将环孢菌素A衍生物粗粉用极性溶剂溶解，注入聚合物微球层析柱； 6)使用极性溶剂与水的混合液进行梯度洗脱，收集环孢菌素A衍生物洗脱液； 7)洗脱液浓缩、萃取、结晶，固液分离得到环孢菌素A衍生物精粉。2.根据权利要求1所述，环孢菌素A衍生物指的是(Y-hydroxylmethylleucine4)_cyclosporin A。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:步骤I)所述的助滤剂为珍珠岩或硅藻土，助滤剂的用量为每升发酵液加入助滤剂0.01-0.1千克。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:步骤2)所述大孔脱色树脂为SD-2、LX-700、D290、D315、·D301 树脂。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:步骤3...

【专利技术属性】
技术研发人员：张雪霞，董爱华，任风芝，李晓露，李宁，陈书红，成晓迅，林毅，王海燕，李丽红，张金娟，林旸，张丽，张艳立，高月麒，张艳哲，蒋沁，段宝玲，
申请(专利权)人：华北制药集团新药研究开发有限责任公司，
类型：发明
国别省市：