本发明专利技术公开了一种西仑吉肽的固相合成方法，该方法以Fmoc-氨基酸和Wang?Resin为原料，DMF或者DCM为溶剂，有机碱为活化试剂，哌啶-DMF为Fmoc保护基脱除试剂，采用固相逐步合成法合成西仑吉肽前体肽A-Wang?Resin；分别脱掉A-Wang?Resin上的Fmoc和OtBu，得西仑吉肽前体肽B-Wang?Resin；加入有机碱固相环化，裂解树脂，得西仑吉肽粗肽；纯化，冻干得到西仑吉肽。该工艺采用固相环化技术，具有合成操作简单，收率高，易纯化，环境污染小，成本低优点，具有客观的经济价值和广泛的应用价值等特点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种固相环化技术合成环肽的方法，尤其是设计西仑吉肽的合成路线。
技术介绍
西仑吉肽(Cilengitide)，中文别称环(L-精氨酰甘氨酰_L_天冬氨酰_D_苯丙氨酰-N-甲基-L-缬氨酰)，是一种人工合成的一个新类别抗癌药物。默克尔公司研究发现西仑吉肽联合化放疗(合并及辅助替莫唑胺加放疗)可能延长生存期，同时作为第一个整合素抑制因子抗肿瘤药物，已进入III期临床试验，其重要机理是通过阻碍血管生长来靶向作用于肿瘤及为肿瘤提供营养、促进癌症细胞生长的供血结构。 西仑吉肽分子式为=C27H4tlN8O7,具有以下结构1挪*目前环肽的制备方法主要有液相合成工艺、固相合成前体肽在液相中环化工艺、固相合成工艺，其中前两种合成工艺都是合成的前体肽在液相中环化，这种方法需要反应物在极稀的溶剂中进行反应(10_3 10_4mol/L)，而且分子间易发生反应生成线型或环状聚合物，极大地降低了环化收率，给后续的纯化带来了麻烦，而且在规模化生产中产生大量废液，不利于工业化生产。结合西仑吉肽的结构，利用固相假稀效益原理，开发了一种高效环化技术，环化时间缩短为液相环化的20% 30%，反应使用溶剂为液相的2% -8%。
技术实现思路
本专利技术涉及一种高收率、低成本、反应条件温和、环境污染小、可以大规模工业化生产的固相环化技术的合成工艺。本方案主要包括以下步骤I.由替代度为 0. 4 0. QmmoI /g 的 Wang Resin 和 Fmoc-L-Asp-OtBu 反应制备Fmoc-L-Asp(OtBu)-ffang Resin02.通过固相逐步合成法依次偶联剩余4个含有Fmoc的氨基酸，得到西仑吉肽前体肽A-Wang Resin。3.在西仑吉肽前体肽A-Wang Resin中，分别加入脱Fmoc和OtBu的试剂,得到西仑吉肽前体肽B-Wang Resin。4.在DMF或DCM中加入西仑吉肽前体肽B-Wang Resin、环化试剂，经过反应得西仑吉肽-Wang Resin。5.裂解，纯化，冷冻干燥得到纯西仑吉肽。上述西仑吉肽的固相环化合成工艺，其中步骤I)所述的 Fmoc-L-Asp(OtBu)-Wang Resin,是 Fmoc-L-Asp-OtBu 与 WangResin在DCM或DMF中，在DIC+H0BT+DMAP作用下生成的。步骤2)中使用溶剂为DMF或DCM，偶联试剂为C+D+E，其中C为HOAt或HOBt，D为HBTU或HATU或TBTU，E为DIEA ;所述的Fmoc保护的氨基酸分别为Fmoc-Gly-0H、Fmoc-L-Arg(Mtr)-OH、Fmoc-N-Me-L-Val> Fmoc-D-Phe-OH ；Fmoc 保护基的脱保护剂为体积比25%的哌啶-DMF溶液。步骤3)加入的脱保护基试剂分别为体积比25%的哌啶-DMF溶液和PhOH-DCM溶 液脱OtBu反应时间为5 8h。步骤4)环化试剂为 DPPA+DIEA 或 DPPA+NMM 或 DIC+H0BT 或 C+D+E，其中 C 为 HOAr或 HOBt，D 为 HBTU 或 HATU 或 TBTU，E 为 DIEA。步骤5)裂解试剂为TFA/H20/T1S。与已有的传统的液相环化技术相比，本专利技术工艺具有操作简单、收率高、后处理简单、反应时间短、产生废液少、成本低等优点，在环肽药物设计合成工艺领域有广泛的应用价值。附图说明图I为本专利技术的工艺流程图。具体实施例方式下面给出的实例以便对本专利技术进行具体描述，有必要在此指出，本专利技术不受本方法作为唯一的限制，在本领域对本专利技术做出一些非本质改动和调整，都属于本专利技术的保护范围。在本权利要求书和说明书中出现的缩写代表的意义为下表Fmoc9-荷甲氧裁基HOBtI-羟基苯并三唑 HOAtN-羟基-7-偶氮苯并三氮唑HATU2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N'，N,-四甲基脲六氟磷酸酯NMMN-甲基吗啉 Mtr2，3，6-三甲基-4-甲氧苯磺酰基OtBu叔丁氧基DMFN，N-二甲基甲酰胺 DCM二氯甲烧DICN，N' -二异丙基碳二亚胺 IffiTU2-(7-偶氮苯并三氮唑)-四甲基脲六氟磷酸酯 TBTUO-苯并三氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸 TFA三氟乙酸权利要求1.一种西仑吉肽的固相合成的方法，包括以下步骤 1)由替代度为O. 4 O. QmmoI /g 的 Wang Resin 和 Fmoc-L-Asp-OtBu 反应制备Fmoc-L-Asp(OtBu)-ffang Resin ； 2)通过固相合成法依次偶联剩余4个Fmoc氨基酸,得到西仑吉肽前体肽A-WangResin ； 3)在西仑吉肽前体肽A-WangResin中，分别加入脱Fmoc和OtBu的试剂,得到西仑吉肽前体肽B-Wang Resin ； 4)加入环化试剂，反应得西仑吉肽-WangResin ； 5)裂解，纯化，冷冻干燥得到纯西仑吉肽。2.根据权利要求I所述的西仑吉肽的固相合成的方法，其特征在于，Fmoc-L-Asp-OtBu和 Wang Resin 在 DIC+HOBT+DMAP 作用下反应制备 Fmoc-L-Asp (OtBu)-Wang Resin。3.根据权利要求I所述的西仑吉肽的固相合成的方法，其特征在于，固相合成西仑吉妝前体妝 A-Wang Resin,其中 Fmoc-氨基酸分别为 Fmoc-Gly-OH、Fmoc-L-Arg (Mtr) -0H>Fmoc-N-Me-L-Val-OH和 Fmoc-D-Phe-OH。4.根据权利要求1-3任意一项权利要求所述的西仑吉肽的固相合成的方法，其特征在于，使用的溶剂均为无水DMF、DCM、CH3OH，偶联剂为C+D+E，其中C为HOAt或HOBt，D为HBTU或HATU或TBTU，E为DIEA，脱氨基上Fmoc保护基为体积比为20 % 25 %的哌啶-DMF (DCM)溶液，脱OtBu的试剂为含催化量TFA的PhOH溶液。5.根据权利要求I所述的西仑吉肽的固相合成的方法，其特征在于，合成西仑吉肽-Wang Resin,其中环化试剂为 DPPA+DIEA 或 DPPA+NMM 或 DIC+H0BT 或 C+D+E，其中 C 为HOAt或HOBt，D为HBTU或HATU或TBTU，E为DIEA，脱侧链保护基和裂解试剂为TFA/H20/TIS。6.根据权利要求1-5任意一项权利要求所述的西仑吉肽的固相合成的方法,其特征在于，氨基酸活化温度为O 5°C，偶联、脱保护基、裂解和环化反应温度均为O 30°C。全文摘要本专利技术公开了，该方法以Fmoc-氨基酸和Wang Resin为原料，DMF或者DCM为溶剂，有机碱为活化试剂，哌啶-DMF为Fmoc保护基脱除试剂，采用固相逐步合成法合成西仑吉肽前体肽A-Wang Resin；分别脱掉A-Wang Resin上的Fmoc和OtBu，得西仑吉肽前体肽B-Wang Resin；加入有机碱固相环化，裂解树脂，得西仑吉肽粗肽；纯化，冻干得到西仑吉肽。该工艺采用固相环化技术，具有合成操作简单，收率高，易纯化，环境污染小，成本低优点，具有客观的经济价值和广泛的应用价值等特点。文档编号C07K1/06GK10本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种西仑吉肽的固相合成的方法，包括以下步骤：1)由替代度为0.4～0.9mmol/g的Wang？Resin和Fmoc？L？Asp？OtBu反应制备Fmoc？L？Asp(OtBu)？Wang？Resin；2)通过固相合成法依次偶联剩余4个Fmoc氨基酸，得到西仑吉肽前体肽A？Wang？Resin；3)在西仑吉肽前体肽A？Wang？Resin中，分别加入脱Fmoc和OtBu的试剂，得到西仑吉肽前体肽B？Wang？Resin；4)加入环化试剂，反应得西仑吉肽？Wang？Resin；5)裂解，纯化，冷冻干燥得到纯西仑吉肽。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨毅跃，姚程成，康国伟，鲁尧，
申请(专利权)人：无锡市凯利药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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