用于含有癌干细胞的或由其起源的癌的治疗、预防和诊断的方法和组合物技术

提供用于含有癌干细胞的或由其起源的癌的治疗、预防和诊断的方法和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及以RPN2基因为靶标的用于含有癌干细胞的或由其起源的癌的治疗、预防和诊断的方法和组合物。
技术介绍
证据的积累已经暗示肿瘤并不是由一样细胞型构成的，经常是由不均一的细胞型构成，其中的细胞亚群承担着肿瘤的抑制、抗药性(drug resistance)和转移。这样的细胞被称为癌干细胞(或肿瘤起始细胞)。如果以该癌干细胞为靶标，则可以期待能够对癌的发生、转移、复发进行治疗和预防。但是，癌干细胞表型的分子基础的大部分是不明确的，因此用来确定癌干细胞的标志物尚不明确，此外，尚未建立以癌干细胞为靶标的治疗或预防的方法。本专利技术人等此前已经证实，作为寡糖转移酶(OST)复合物的构成成分的核糖体结合糖蛋白II (RPN2)调节乳癌细胞的抗药性，并且，RPN2的沉默(silencing)是有望战胜抗药性(drug resistance)肿瘤的途径(专利文献I)。但是，通过抑制RPN2表达而抑制癌细胞的增殖等的机理尚不明确。现有技术文献专利文献专利文献1:国际特开第2007/144985号
技术实现思路
专利技术要解决的问题本专利技术的目的在于提供用于含有癌干细胞的或由其起源的癌的治疗、预防和诊断的方法和组合物。_9] 用于解决问题的方案本申请中，本专利技术人等公开了 RPN2在乳癌细胞的癌干细胞级分中高表达，并且RPN2的敲低在体外抑制癌干细胞的集落形成和浸润能力。进一步的分析显示RPN2的敲低使体内肿瘤形成下降、并且抑制转移能力。利用综合性蛋白质组学分析(Comprehensiveproteome analysis),明确了 RPN2敲低改变了已知调节TGF — β /Smad通路的14 一 3 —3ζ的表达。因此，本专利技术人等提供RPN2对于癌干细胞表型的维持重要、并且RPN2可以成为适合于癌干细胞治疗的有希望的靶标的遗传学和生物学证据。本专利技术涉及 [I] 一种用于含有癌干细胞的或由其起源的癌的治疗或预防的药物组合物，其包含RPN2抑制剂；[2]根据[I]的药物组合物，其中，癌干细胞具有突变型ρ53基因；[3]根据[I]或[2]的药物组合物，RPN2抑制剂为针对RPN2基因的siRNA ；[4] 一种癌干细胞的检测方法，其包括确定RPN2有无表达或表达水平的步骤；[5]根据[4]的方法，其还包括检测突变型p53基因的步骤。专利技术的效果根据本专利技术，提供一种以RPN2基因为靶标的用于含有癌干细胞的或由其起源的癌的治疗、预防和诊断的方法和组合物。附图说明图1 : (A)是表示⑶44 + 0)24—癌干细胞的不等分裂(unequal division)的图。(B)是表示利用RT - PCR进行的RPN2的表达解析的图。图2是表示RPN2敲低对⑶44 +⑶24 一癌干细胞数的效果的图。图3 (A)是表不RPN2敲低对集落形成能力的效果的图。(B)是表不RPN2敲低对形成集落数的效果的图。图4是表示RPN2敲低对肿瘤形成能力的效果的图。图5是表示RPN2敲低对肿瘤转移的效果的图。图6是表示RPN2敲低对 致死性的效果的图。图7 (A)是表示RPN2敲低对突变型p53的表达的效果的图。(B)是表示RPN2敲低对E —钙黏着蛋白的表达的效果的图。图8是表示RPN2敲低对14 一 3 — 3 ζ的表达的效果的图。图9是表示在动物中移植ΜΜ231 — LN细胞而形成的肿瘤的免疫组织染色的结果图。图10是表示人乳癌患者的乳癌组织中的RPN2和突变型ρ53的表达的图。图11是表示利用TUNEL分析评价而得的肿瘤凋亡(apoptosis)图。通过投与3天后的RPN2 - siRNA/A6K的肿瘤内送达证明了高度诱导了乳癌的肿瘤凋亡。图12是表示狗乳癌中的RPN2的敲低分析的图。与RPN2mRNA的对照(生理盐水)相比，RPN2 — siRNA/A6K 可见约 50%的抑制(η = 3，ρ < O. 001)。具体实施例方式本专利技术提供一种用于含有癌干细胞的或由其起源的癌的治疗或预防的药物组合物，其包含RPN2抑制剂。此外，本专利技术提供一种用于含有癌干细胞的或由其起源的癌的治疗或预防的方法，其包括对对象投与本专利技术的药物组合物的步骤。本说明书中使用的术语“癌干细胞”是指具有多潜能性和自我复制能力(本说明书中也将这些称为自我复制分化能力)的癌细胞。癌细胞包括乳癌细胞、胃癌细胞、大肠癌细胞、肺癌细胞、前列腺癌细胞、造血细胞癌细胞等任意的癌。癌干细胞除了自我复制分化能力外，还可能具有对抗癌剂的耐受性(抗药性)、向周边组织浸润和/或向体内的远端部位转移的能力(浸润转移能力)。认为若以癌干细胞为靶标，则能够治疗和预防癌的发生、转移、复发。本专利技术在以这样的癌干细胞为靶标的癌的治疗和预防中有用。I个实施方式中，癌干细胞的核糖体结合糖蛋白II (RPN2)的表达水平增大。“RPN2”为存在于粗糙内质网、具有向新合成的多肽链添加N结合型糖链的功能的寡糖转移酶(OST)复合物的构成成分(亚基)之一。人RPN2是包含631个氨基酸的碱性膜蛋白。对RPN2的来源没有限制，例如为动物、优选哺乳动物、更优选灵长类、进而优选人。“RPN2基因”是编码RPN2的基因。序列号I中示出人RPN2基因的碱基序列。本专利技术人等发现，在⑶44 + /⑶24_的乳癌的癌干细胞级分中通过短发夹RNA(shRNA)敲低RPN2的表达时，在体外癌干细胞的集落形成和浸润能力得到抑制，并且免疫缺陷动物中的(即体内的)肿瘤形成能力和浸润转移能力消失。如上所述，癌干细胞由于可能具有自我复制分化能力、抗药性、浸润转移能力，因此，认为与上述全部均相关的RPN2为癌干细胞的标志物，此外，若以RPN2为靶标，能够治疗和预防含有癌干细胞的或由其起源的癌。其它实施方式中，癌干细胞具有突变型p53基因。“p53”为抗癌基因产物，已在多种人癌中发现p53基因中的突变(Adorno, M.et al. ,Cell, 137:87-98(2009)；Wang, S. P. et al. , Nat. Cell Biol. , 11:69 4-704(2009) ；Muller,P.A. etal. , Cell, 139: 1327-1341 (2009) ;Morton, J. P. et al. , Proc. Nat1. Acad. Sc1.USA, 107:246-251 (2010))。对p53基因中的突变没有限制，突变优选为不发生移码(frameshift)的置换型点突变(错义突变)或缺失突变(密码子缺失突变)。本专利技术人等发现，当在具有突变型P53的细胞株中敲低RPN2的表达时，突变型p53蛋白质水平降低、抑制了 E —钙黏着蛋白的表达降低。进而，本专利技术人等发现，在高表达RPN2的癌细胞中，14 一 3 — 3 4的表达降低，而通过RPN2的敲低，其表达增加。已知14 一3 — 3 4在mdm2介导下发挥将突变型p53分解的作用。癌细胞已知呈现一种称为上皮间质转化(EMT)的现象。EMT时，与细胞粘附相关的E 一钙黏着蛋白的表达降低，认为其结果是癌细胞进行浸润或转移。上述结果表明，癌细胞中RPN2使14 一 3 — 3 (的表达降低，其结果是突变型p53稳定化、引起EMT，也带来了癌细胞的浸润或转移。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.08.20 JP 2010-1847641.一种用于含有癌干细胞的或由其起源的癌的治疗或预防的药物组合物，其包含RPN2抑制剂。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，癌干细胞具有突...

【专利技术属性】
技术研发人员：落谷孝广，
申请(专利权)人：日本国立癌症研究中心，三维肽胶株式会社，
类型：
国别省市：