一种麦芽糊精底物特异性提高的环糊精糖基转移酶及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种麦芽糊精底物特异性提高的环糊精糖基转移酶及其制备方法，属于遗传工程和酶工程领域。本发明专利技术通过对P.macerans?strain?JFB05-01(CCTCC?NO:M208063)的CGTase的195位的酪氨酸（Tyr）替换为丝氨酸（Ser）,260位的酪氨酸（Tyr）替换为精氨酸（Arg）,265位的谷氨酰胺（Gln）替换为赖氨酸（Lys），使AA-2G产量分别提高了23%，44%和40%。对以上突变株组合突变，获得双突变体Y195S/Y260R,Y195S/Q265K和Y260R/Q265K以及三点突变体Y195S/Y260R/Q265K。它们利用麦芽糊精为糖基供体生产AA-2G产量分别提高了57%，49%，55%和59%。这些突变株比野生型CGTase更利于利用麦芽糊精为糖基供体生产AA-2G。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种环糊精糖基转移酶及制备方法，特别是一种麦芽糊精底物特异性提闻的环糊精糖基转移酶及其制备方法。
技术介绍
L-抗坏血酸(L-AA，维生素C)是水溶性维生素，参与很多体内的生理活动，在保持和促进人体健康中起到重要的作用，是人体无法自身合成的必需的营养元素。但L-AA极不稳定，在空气中易被氧化为脱氢抗坏血酸，破坏分子中的共轭体系，发生不可逆裂解反应，特别是在空气、光线、热和金属离子的存在下，反应更迅速，使L-AA的生理活性减弱甚至消失，这使得它在应用上受到很大的限制。因此，如何增强L-AA的稳定性是目前国内外学术界和产业界所关注的焦点问题。2-0- a -D-吡喃型葡萄糖基_L_抗坏血酸(AA-2G)是L-AA的糖基衍生物，是将一个糖基以α -1, 4-糖苷键连接于L-AA的C2位上。由于L-AA的C2位上有糖基掩蔽，不易发生氧化反应，所以在水溶液中特别稳定，并且AA-2G没有直接还原性，有效地保护了 L-AA的生物活性。所以AA-2G是迄今发现的稳定性和性能最佳的L-AA替代品。目前，AA-2G主要通过糖基转移酶生物催化生成，其中环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)是本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种麦芽糊精底物特异性提高的环糊精糖基转移酶，以GenbankAF047363.1所示的环糊精葡萄糖基转移酶为出发序列，其特征在于第195位的酪氨酸突变成丝氨酸Y195S，第260位的酪氨酸突变成精氨酸Y260R，第265位的谷氨酰胺突变成精氨酸赖氨酸Q265K或其组合。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈坚，堵国成，刘龙，李江华，韩瑞枝，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：