本发明专利技术涉及通过使用Dicer底物siRNA(DsiRNA)-肽缀合物而用于降低靶RNA和蛋白质水平的化合物、组合物和方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及肽-dicer底物缀合物及其使用方法。专利技术背景由于需要安全、有效地递送治疗性分子，所以肽适体的鉴定很重要。已经描述了肽适体(在 Beldhoen 2008Int. J. Mol. Sci 9 1276-1320 ;Moschos 等，2007Biochemical Society Transaction，第 35 卷，第 4 部分:807-810 中综述)。专利技术简述本专利技术涉及含有与肽缀合的双链RNA(“dsRNA”)的组合物和用于制备所述组合物的方法。本专利技术的dsRNA为具有通过与肽缀合而优化的结构的双链RNA、小干扰RNA (siRNA) 和Dicer底物siRNA(“DsiRNA”)，用于有效递送和靶向且作为有效和高效的抑制剂起作用， 任选地所述dsRNA具有延长的抑制作用持续时间。在一个实施方案中，本专利技术提供一种分离的双链核糖核酸(dsRNA)组合物，该组合物包含具有5'端和3'端的第一寡核苷酸链和具有5'端和3'端的第二寡核苷酸链以及肽，其中所述第一链和所述第二链的长度为至少16个和至多50个核苷酸，其中所述肽带有约+5或更少的净电荷，并且其中肽与所述dsRNA缀合。在另一个实施方案中，本专利技术提供一种分离的双链核糖核酸(dsRNA)组合物，该组合物包含具有5'端和3'端的第一寡核苷酸链和具有5'端和3'端的第二寡核苷酸链以及肽，其中所述第一链和所述第二链的长度为至少16个和至多50个核苷酸，其中肽不带有净电荷，并且其中所述肽与所述dsRNA缀合。在另一个实施方案中，本专利技术提供一种分离的双链核糖核酸(dsRNA)组合物，该组合物包含具有5'端和3'端的第一寡核苷酸链和具有5'端和3'端的第二寡核苷酸链以及肽，其中所述第一链和所述第二链的长度为至少16个和至多50个核苷酸，其中所述肽带有约+4或更少的净电荷及其中所述肽具有至少一个阴离子氨基酸残基，并且其中所述肽与所述dsRNA缀合。在一个方面，阴离子氨基酸为谷氨酸或天冬氨酸。在另一个实施方案中，本专利技术提供一种分离的双链核糖核酸(dsRNA)组合物，该组合物包含具有5'端和3'端的第一寡核苷酸链和具有5'端和3'端的第二寡核苷酸链以及肽，其中所述第一链和所述第二链的长度为具有至少6个和至多19个核苷酸，其中所述肽带有约+4或更少的净电荷，并且其中所述肽与所述dsRNA缀合。在另一个方面，所述第一链和所述第二链的长度为至少25个和至多35个核苷酸、 至少19个和至多35个核苷酸、至少19个和至多M个核苷酸、至少25个和至多30个核苷酸、至少沈个和至多30个核苷酸或至少21个和至多23个核苷酸。在另一个方面，第二链在3'端包含突出。在另一个方面，第一链在3'端包含突出。在另一个方面，所述第二链和所述第一链中的至少一个在3'端包含突出。在另一个方面，所述第一链和/或所述第二链的所述3'突出的核苷酸包括经过修饰的核苷酸。在另一个方面，3'突出的长度为1-5个核苷酸。在另一个方面，所述第一链和所述第二链中的每一条链由相同数目的核苷酸残基组成。在另一个方面，所述第一链的所述5'端的最后一个残基与所述第二链的所述 3'端的最后一个残基形成错配碱基对。在另一个方面，所述第一链的所述3'端的最后一个残基与所述第二链的所述 5'端的最后一个残基形成错配碱基对。在另一个方面，所述第一链的所述5'端的最后一个残基和倒数第二个残基与所述第二链的所述3'端的最后一个残基和倒数第二个残基形成两个错配碱基对。在另一个方面，所述第一链的所述3'端的最后一个残基和倒数第二个残基与所述第二链的所述5'端的最后一个残基和倒数第二个残基形成两个错配碱基对。在另一个方面，肽包含6-50个氨基酸。在另一个方面，肽包含10-50个氨基酸。在另一个方面，肽包含15-30个氨基酸。在另一个方面，肽包含多达10个氨基酸。在另一个方面，肽带有约+2或更少的净电荷。在另一个方面，肽带有约+1或更少的净电荷。在另一个方面，肽包含一个或多个脯氨酸残基。在另一个方面，肽包含一个或多个疏水氨基酸残基。在另一个方面，肽包含五个或更多个阳离子氨基酸残基。在另一个方面，肽包含四个阳离子氨基酸残基。在另一个方面，肽包含三个阳离子氨基酸残基。在另一个方面，肽包含两个阳离子氨基酸残基。在另一个方面，肽包含一个阳离子氨基酸残基。在另一个方面，肽不具有阳离子氨基酸残基。在另一个方面，用稳定的连接子将肽与所述dsRNA缀合。在另一个方面，稳定的连接子包括同型双功能交联剂。在另一个方面，稳定的连接子包括异型双功能交联剂。在另一个方面，用可裂解的连接子将肽与所述dsRNA缀合。在另一个方面，可裂解的连接子包括二硫化物连接子。在另一个方面，用碳连接子将肽与所述dsRNA缀合。在另一个方面，碳连接子包含至多十八个碳。在另一个方面，碳连接子包含6个碳。在另一个方面，在无连接子的情况下将肽与所述dsRNA缀合。在另一个方面，将肽与所述dsRNA的第一链的3'端缀合。在另一个方面，将肽与所述dsRNA的所述第二链的3'端缀合。在另一个方面，将肽与所述dsRNA的第一链的5'端缀合。在另一个方面，将肽与所述dsRNA的所述第二链的5'端缀合。在另一个方面，将肽与所述dsRNA的第一链的5'端和所述第二链的5'端缀合。在另一个方面，将肽与所述dsRNA的所述第一链的5'端和所述第二链的所述3' 端缀合ο在另一个方面，将肽与所述dsRNA的第一链的3'端和所述第二链的3'端缀合。在另一个方面，将肽与所述dsRNA的所述第一链的3'端和所述第二链的所述5'端缀合ο在另一个方面，将至少一个肽与所述dsRNA的所述第一链内部缀合。在另一个方面，将至少一个肽与所述dsRNA的所述第二链内部缀合。在另一个方面，将至少一个肽与所述dsRNA的所述第一链内部缀合且将至少一个肽与所述dsRNA的所述第二链内部缀合。在另一个方面，将至少两个肽与所述dsRNA缀合。在另一个方面，至少两个肽是相同的。在另一个方面，至少两个肽是不相同的。在另一个方面，分离的组合物还包含至少一个染料分子，且其中所述染料分子与所述dsRNA和所述肽中的至少一个缀合。在另一个方面，染料分子为聚芳烃。在另一个方面，染料为荧光染料。在另一个方面，分离的组合物还包含治疗剂。在另一个方面，治疗剂为抗癌药物。在另一个方面，抗癌药物选自紫杉醇、三苯氧胺、顺钼、阿霉素和长春碱。在另一个方面，治疗剂为用于治疗代谢疾病或病症的药物。在另一个方面，分离的组合物还包含至少一个靶向肽。在另一个方面，肽包含毒素的转位结构域的一部分。在另一个方面，神经毒素为梭菌神经毒素。在另一个方面，其中从所述dsRNA的第一寡核苷酸链的3'端的第一个核苷酸(位置1)开始，用经过修饰的核苷酸取代位置1、2和/或3。在另一个方面，经过修饰的核苷酸为脱氧核糖核苷酸。在另一个方面，第一寡核苷酸链和第二寡核苷酸链中的一个或两个包含5'磷酸。在另一个方面，所述第一链或所述第二链的至少一个核苷酸是经过修饰的。在另一个方面，经过修饰的核苷酸残基选自2' -0-甲基、2'-甲氧基乙氧基、2'-氟、2'-烯丙基、2' -0-、4'-硫代、 4' -CH2-0-2‘-桥、4' -(CH2) 2-0-2‘-桥、2' -LNA本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：苏杰特·库马尔·巴苏，鲍勃·戴尔·布朗，
申请(专利权)人：戴瑟纳制药公司，
类型：发明
国别省市：
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