乳酸脱氢酶的治疗性抑制及其试剂制造技术
Therapeutic inhibition of lactate dehydrogenase and its reagent
The present invention relates to compounds, compositions and methods for reducing lactate dehydrogenase target RNA and protein levels by using dsRNAs, such as Dicer substrate siRNA (DsiRNA) reagents.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】乳酸脱氢酶的治疗性抑制及其试剂相关申请的交叉引用本申请与下述美国临时申请相关：2014年10月10日提交的、序号为62/062,424、名称为“双链RNA特异性抑制乳酸脱氢酶的方法和组合物”的美国临时专利申请，和2015年7月30日提交的、序号为62/199,056、名称为“乳酸脱氢酶的治疗性抑制及其制剂”的美国临时专利申请。前述专利申请的全部内容通过引用的方式并入本文中。
本专利技术涉及用于研究、诊断和治疗响应乳酸脱氢酶基因表达和/或活性调控的性质、疾病和症状(condition)的化合物、组合物和方法。序列提交本申请与电子形式的序列表一同提交。序列表的名称是“48292_514001WO_Seq_Listing_9OCT2015”，创建于2015年10月9日，大小是1.4MB。电子形式的序列表中的信息是本申请的一部分，并且通过引用其整体并入本申请中。
技术介绍
1型原发性高草酸尿症(PrimaryhyperoxaluriaType1)(“PH1”)是乙醛酸代谢的罕见的常染色体隐性遗传先天性缺陷，由于缺乏肝脏特异性酶丙氨酸：乙醛酸转氨酶(也称作丝氨酸-丙酮酸盐转...
【技术保护点】
一种治疗受试者中乳酸脱氢酶敲低可治疗的疾病或病症的方法，包括：向患有乳酸脱氢酶敲低可治疗的疾病或病症的受试者施用降低受试者的一种或多种组织中LDHA基因表达的试剂，从而治疗受试者的乳酸脱氢酶敲低可治疗的疾病或病症。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.10 US 62/062,424;2015.07.30 US 62/199,0561.一种治疗受试者中乳酸脱氢酶敲低可治疗的疾病或病症的方法，包括：向患有乳酸脱氢酶敲低可治疗的疾病或病症的受试者施用降低受试者的一种或多种组织中LDHA基因表达的试剂，从而治疗受试者的乳酸脱氢酶敲低可治疗的疾病或病症。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病或病症是慢性肾病或丙酮酸脱氢酶复合物缺乏症。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病或病症选自由PH1、PH2、PH3和特发性高草酸尿症构成的组。4.上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述试剂以脂质纳米颗粒来被施用。5.上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种组织包括肝脏。6.一种治疗有需要的受试者中瘤的方法，包括：向有瘤的受试者施用降低受试者的一种或多种组织中LDHA基因表达的试剂，其中所述试剂包装在脂质纳米颗粒中，从而治疗受试者的瘤。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述瘤是肝肿瘤。8.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述试剂的施用不会降低受试者肌肉组织中的LDHA基因表达。9.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中，与受试者中LDHB基因表达相比，所述试剂优先降低LDHA基因表达，可选地，其中，受试者中LDHB基因表达不降低。10.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中降低LDHA基因表达的所述试剂是RNAi分子，可选地是双链核酸(“dsNA”)。11.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中降低LDHA基因表达的所述试剂是包括发夹或四核苷酸环结构的RNAi分子。12.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其中降低LDHA基因表达的所述试剂选自由RNAi分子和单链反义寡核苷酸构成的组。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述试剂是经过修饰的寡核苷酸，可选地包括选自由如下修饰构成的组的一种修饰：2′-氟(2′-F)，2′-O甲基(2′-OMe)和2′-甲氧基乙氧基(2′-MOE)糖修饰，反向脱碱基帽，脱氧核碱基，和二环碱基类似物诸如锁核酸(包括LNA)和ENA。14.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述试剂包括长度是12至80或更多个核苷酸的寡核苷酸。15.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中降低LDHA基因表达的所述试剂是RNAi试剂，所述RNAi试剂包括选自由如下dsNA构成的组的结构：具有第一寡核苷酸链和第二寡核苷酸链的dsNA，第一寡核苷酸链具有5′末端和3′末端，第二寡核苷酸链具有5′末端和3′末端，其中每个5′末端具有5′末端核苷酸且每个3′末端具有3′末端核苷酸，其中第一链的长度是15-30个核苷酸残基，其中从5′末端核苷酸(1位)开始，第一链的1至15位包括至少8个核糖核苷酸；第二链的长度是36-80个核苷酸残基，从3′末端核苷酸开始在与第一链的1至15位配对的位置包括至少8个核糖核苷酸以形成双链体；其中至少第二链的3′末端核苷酸与第一链不配对，并且多至6个连续的3′末端核苷酸与第一链不配对，从而形成1-6个核苷酸的3′单链突出；其中第二链的5′末端包括不与第一链配对的5-64个连续的核苷酸，从而形成5-64个核苷酸的单链5′突出；其中，当为了最大互补而对第一链和第二链进行比对时，至少第一链5′末端和3′末端核苷酸是与第二链的核苷酸配对的碱基，从而在第一链和第二链之间形成基本地双链体区；并且，当将双链核酸引入哺乳动物细胞时，第二链沿第二链长度的至少19个核糖核苷酸与靶RNA充分互补以降低靶基因表达；具有第一寡核苷酸链和第二寡核苷酸链的dsNA，第一寡核苷酸链具有5′末端和3′末端，第二寡核苷酸链具有5′末端和3′末端，其中每个5′末端具有5′末端核苷酸且每个3′末端具有3′末端核苷酸，其中第二链的长度是19-30个核苷酸残基，其中从5′末端核苷酸(1位)开始，第二链的1至19位包括至少8个核糖核苷酸；第一链的长度是25-80个核苷酸残基并且在与第二链的1-19位配对的位置包括至少8个核糖核苷酸以形成双链体；其中第一链的3′末端核苷酸与第二链配对，形成平末端，或者多至6个连续的3′末端核苷酸与第二链不配对，从而形成1-6个核苷酸的3′单链突出；其中第一链的5′末端包括不与第二链配对的5-61个连续的核苷酸，从而形成5-61个核苷酸的单链5′突出；其中，当为了最大互补而对第一链和第二链进行比对时，至少第二链5′末端和3′末端核苷酸是与第一链的核苷酸配对的碱基，从而在第一链和第二链之间形成基本地双链体区；并且，当将双链核酸引入哺乳动物细胞时，第二链沿第二链长度的至少19个核糖核苷酸与靶RNA充分互补以降低靶基因表达；或者具有第一链和第二链的dsNA，其中第一链和第二链形成长度是19-25个核苷酸的双链体区，其中第一链具有延伸到第一链-第二链双链体区之外的3’区域并且包括核苷酸连接子，并且dsNA进一步包括第一链的3’末端和第二链的5’末端之间的不连续性，并且，当将dsNA引入哺乳动物细胞时，第一链或第二链沿第一链或第二链长度的至少15个核苷酸与选自SEQIDNOs：361-432的靶标乳酸脱氢酶mRNA序列充分互补以降低乳酸脱氢酶靶mRNA表达。16.根据权利要求15所述的方法，其中所述核苷酸连接子包括四核苷酸环，可选地，其中，所述核苷酸连接子是四核苷酸环。17.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中降低LDHA基因表达的所述试剂包括选自由动态聚缀合物和GalNAc缀合物构成的组的一种或多种部分。18.一种核酸，其包括长度是15-80个核苷酸的寡核苷酸链，其中，当将所述核酸引入哺乳动物细胞时，沿所述寡核苷酸链长度的至少15个核苷酸与选自SEQIDNOs：361-432的靶标乳酸脱氢酶mRNA序列充分互补，以便降低乳酸脱氢酶靶mRNA表达。19.根据权利要求18所述的核酸，其中所述寡核苷酸链长度是19-35个核苷酸。20.一种双链核酸(dsNA)，包括包含RNA的第一链和第二链，其中，所述第一链的长度是15-80个核苷酸且所述dsNA的所述第二链的长度是19-80个核苷酸，其中，当将所述双链核酸引入哺乳动物细胞时，所述第二寡核苷酸链沿所述第二寡核苷酸链长度的至少15个核苷酸与选自SEQIDNOs：361-432的靶标乳酸脱氢酶mRNA序列充分互补，以便降低乳酸脱氢酶靶mRNA表达。21.根据权利要求20所述的dsNA，其中所述第一链长度是15-35个核苷酸。22.根据权利要求20或21所述的dsNA，其中所述第二链长度是19-35个核苷酸。23.根据权利要求10、15、20-22或64任一项所述的dsNA，包括选自由至少25个碱基对；19-21个碱基对和21-25个碱基对构成的组的双链体区。24.根据权利要求10、15、20-23或64任一项所述的dsNA，其中所述第二寡核苷酸链在其3′末端包括1-5个单链核苷酸，可选地长度是1-3个核苷酸，包括可选地长度是核苷酸。25.根据权利要求24所述的dsNA，其中所述第二链的所述3′末端的所述1-5个单链核苷酸的所述核苷酸包括经过修饰的核苷酸。26.根据权利要求25所述的dsNA，其中所述第二链的所述3′末端的所述1-5个单链核苷酸的所述经过修饰的核苷酸是2’-O-甲基核糖核苷酸。27.根据权利要求25所述的dsNA，其中所述第二链的所述3′末端的所述1-5个单链核苷酸的所有核苷酸是经过修饰的核苷酸。28.根据权利要求25所述的dsNA，其中所述第二链的所述3′末端的所述1-5个单链核苷酸是2个核苷酸的长度并且包括2’-O-甲基修饰的核糖核苷酸。29.根据权利要求10、15、20-23或64任一项所述的dsNA，其中所述第二寡核苷酸链在其3′末端包括5-35个单链核苷酸。30.根据权利要求29所述的dsNA，其中所述单链核苷酸包括经过修饰的核苷酸。31.根据权利要求29所述的dsNA，其中所述单链核苷酸包括选自由2’-O-甲基、2’-甲氧基乙氧基、2’-氟、2’-烯丙基、2’-O-[2-(甲胺基)-2-乙氧基]、4’-硫代、4’-CH2-O-2’-桥、4’-(CH2)2-O-2’-桥、2’-LNA、2’-氨基和2’-O-(N-甲基氨基甲酸酯)构成的组的经过修饰的核苷酸。32.根据权利要求29所述的dsNA，其中所述单链核苷酸包括核糖核苷酸。33.根据权利要求29所述的dsNA，其中所述单链核苷酸包括脱氧核糖核苷酸。34.根据权利要求18-33或权利要求64任一项所述的核酸或dsNA，其中所述核酸或dsNA还降低选自由LDHB和LDHC构成的组的一种或多种靶基因的mRNA表达。35.根据权利要求18-33或权利要求64任一项所述的核酸或dsNA，其中所述核酸或dsNA降低LDHAmRNA表达但是不降低选自由受试者中LDHB和LDHC构成的组的一种或多种基因的mRNA表达。36.根据权利要求20-35或64任一项所述的dsNA，其中所述第一链的长度是25-35个核苷酸。37.根据权利要求20-36或64任一项所述的dsNA，其中所述第二链的长度是25-35个核苷酸。38.根据权利要求20-37或64任一项所述的dsNA，其中所述第二寡核苷酸链沿所述第二寡核苷酸链长度的至多27个核苷酸与GenBank登录号是NM_005566.3的靶标乳酸脱氢酶cDNA序列互补。39.根据权利要求20-38或64任一项所述的dsNA，其中从所述第一寡核苷酸链的3’末端的第一个核苷酸(1位)开始，用经过修饰的核苷酸取代1位、2位或3位。40.根据权利要求39所述的dsNA，其中所述第一链的所述3’末端的所述经过修饰的核苷酸残基选自由脱氧核糖核苷酸、非环核苷酸和荧光分子构成的组。41.根据权利要求40所述的dsNA，其中所述第一寡核苷酸链的所述3’末端的1位是脱氧核糖核苷酸。42.根据权利要求20-41或64任一项所述的dsNA，其中所述第一链的所述3’末端和所述第二链的所述5’末端形成平末端。43.根据权利要求20-42或64任一项所述的dsNA，其中所述第一链的长度是25个核苷酸且所述第二链的长度是27个核苷酸。44.根据权利要求20-43或64任一项所述的dsNA，其中，当将所述双链核酸引入哺乳动物细胞时，从选自SEQIDNOs：361-432的乳酸脱氢酶mRNA序列的5’端(1位)开始，哺乳动物Ago2在所述序列的9位和10位之间的位点裂解所述mRNA，从而降低乳酸脱氢酶靶mRNA表达。45.根据权利要求20-44或61任一项所述的dsNA，其中所述第二链包括选自由SEQIDNOs：73-144构成的组的序列。46.根据权利要求20-45或64任一项所述的dsNA，其中所述第一链包括选自由SEQIDNOs：1-72构成的组的序列。47.根据权利要求20-46或64任一项所述的dsNA，包括选自表2的一对第一链/第二链序列。48.根据权利要求18-47或64任一项所述的核酸或dsNA，其中所述核酸或dsNA包括经过修饰的核苷酸。49.根据权利要求48所述的dsNA，其中所述经过修饰的核苷酸残基选自由：2’-O-甲基、2’-甲氧基乙氧基、2’-氟、2’-烯丙基、2’-O-[2-(甲胺基)-2-乙氧基]、4’-硫代、4’-CH2-O-2’-桥、4’-(CH2)2-O-2’-桥、2’-LNA、2’-氨基和2’-O-(N-甲基氨基甲酸酯)构成的组。50.根据权利要求20-49或61任一项所述的dsNA，其中所述第二寡核苷酸链包括选自由AS-M1至AS-M84，AS-M88至AS-M96，AS-M210，AS-M1*至AS-M84*，AS-M88*至AS-M96*和AS-M210*构成的组的修饰模式。51.根据权利要求20-50或64任一项所述的dsNA，其中所述第一寡核苷酸链包括选自由SM1至SM119和SM250至SM252构成的组的修饰模式。52.根据权利要求20-51或64任一项所述的dsNA，其中在所述细胞内由Dicer内源裂解所述dsNA。53.根据权利要求18-52或61任一项所述的核酸、dsNA或杂交复合物，其中选自由如下量构成的组的所述dsNA、核酸或杂交复合物的量足以降低靶基因的表达：在所述细胞环境中1纳摩尔或更少，200皮摩尔或更少，100皮摩尔或更少，50皮摩尔或更少，20皮摩尔或更少，10皮摩尔或更少，5皮摩尔或更少，2皮摩尔或更少，或1皮摩尔或更少。54.根据权利要求18-53或64任一项所述的核酸或dsNA，其中，当将所述双链核酸引入哺乳动物细胞时，所述核酸或dsNA与靶标乳酸脱氢酶mRNA序列充分互补以便以选自由如下量构成的组的量(用％表示)来降低乳酸脱氢酶靶mRNA表达：至少10％、至少50％、至少80-90％、至少95％、至少98％和至少99％。55.根据权利要求20-54或64任一项所述的dsNA，其中第一链和第二链通过化学键连接。56.根据权利要求20-55或64任一项所述的dsNA，其中所述第一链的所述3’和所述第二链的所述5’末端通过化学键连接。57.根据权利要求20-56或64任一项所述的dsNA，其中所述第二链或第一链的核苷酸由指向Dicer裂解的方向的经过修饰的核苷酸取代。58.根据权利要求18-57或64任一项所述的试剂、核酸、dsNA或杂交复合物，包括选自由如下构成的组的经过修饰的核苷酸：2’-O-甲基核糖核苷酸、2’-甲氧基乙氧基、2′-氟核糖核苷酸、2’-烯丙基、2’-O-[2-(甲胺基)-2-乙氧基]、4’-硫代、4’-CH2-O-2’-桥、4’-(CH2)2-O-2’-桥、2’-LNA、2’-氨基、2’-O-(N-甲基氨基甲酸酯)、脱氧核糖核苷酸、双脱氧核糖核苷酸、无环核苷酸、3′-脱氧腺苷(虫草素)、3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷(AZT)、2′，3′-双脱氧肌苷(ddI)、2′，3′-双脱氧-3′-硫代胞苷(3TC)、2′，3′-双脱氢-2′，3′-双脱氧胸苷(d4T)、3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷(AZT)的单磷酸核苷酸、2′，3′-双脱氧-3′-硫代胞苷(3TC)、2′，3′-双脱氢-2′，3′-双脱氧胸苷(d4T)的单磷酸核苷酸、4-硫代尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、5-(3-氨基烯丙基)-尿嘧啶、2′-O-烷基核糖核苷酸、2′-氨基核糖核苷酸、锁核酸和解锁核酸(UNA)。59.根据权利要求18-58或64任一项所述的试剂、核酸、dsNA或杂交复合物，包括选自由膦酸、硫代磷酸和磷酸三酯构成的组的磷酸骨架修饰。60.根据权利要求18-59或64任一项所述的试剂、核酸、dsNA或杂交复合物，包括选自由吗啉代核酸和肽核酸(PNA)构成的组的修饰。61.根据权利要求18-60或64任一项所述的试剂、核酸、dsNA或杂交复合物，其中所述试剂、dsNA、核酸或杂交复合物连接于动态聚缀合物(DPC)。62.根据权利要求18-61或64任一项所述的试剂、核酸、dsNA或杂交复合物，其中所述试剂、dsNA、核酸或杂交复合物与DPC一起被施用，其中可选地dsNA与DPC未连接。63.根据权利要求18-62或64任一项所述的试剂、核酸、dsNA或杂交复合物，其中所述试剂、dsNA、核酸或杂交复合物连接于选自由GalNAc部分、胆固醇和胆固醇靶向配体构成的组的部分。64.一种组合物，选自由如下dsNA构成的组：具有第一和第二核酸链的dsNA，其中所述第一链长度是15-35个核苷酸且所述dsNA的所述第二链的长度是19-35个核苷酸，其中，当将所述双链核酸引入哺乳动物细胞时，所述第二寡核苷酸链沿所述第二寡核苷酸链长度的至少19个核苷酸与选自SEQIDNOs：361-432的靶标乳酸脱氢酶mRNA序列充分互补以便降低乳酸脱氢酶靶mRNA表达；具有第一和第二核酸链的dsNA，其中所述第一链长度是15-35个核苷酸且所述dsNA的所述第二链的长度是19-35个核苷酸，其中所述第二寡核苷酸链沿所述第二寡核苷酸链长度的至少19个核苷酸与选自SEQIDNOs：361-432的靶标乳酸脱氢酶mRNA序列充分互补以便降低乳酸脱氢酶靶mRNA表达，并且，其中，当将所述双链核酸引入哺乳动物细胞时，从选自SEQIDNOs：361-432的乳酸脱氢酶mRNA序列的5’端(1位)开始，哺乳动物Ago2裂解所述序列9位和10位之间的位点的所述mRNA；一种dsNA分子，由如下组成：(a)有义区和反义区，其中，所述有义区和所述反义区共同形成由25-35个碱基对构成的双链体区，所述反义区包括与选自SEQIDNOs：361-432的序列互补的序列；和(b)0至2个3’突出区域，其中每个突出区域的长度是6个或更少个核苷酸，并且其中，当将所述双链核酸引入哺乳动物细胞时，从选自SEQIDNOs：361-432的乳酸脱氢酶mRNA序列的5’端(1位)开始，哺乳动物Ago2在所述序列的9位和10位之间的位点裂解mRNA；具有第一和第二核酸链以及至少25个碱基对的双链体区的dsNA，其中所述第一链的长度是25-34个核苷酸且所述dsNA的所述第二链的长度是26-35个核苷酸并且在其3′末端包括1-5个单链核苷酸，其中，当将所述双链核酸引入哺乳动物细胞时，所述第二寡核苷酸链沿所述第二寡核苷酸链长度的至少19个核苷酸与选自SEQIDNOs：361-432的靶标乳酸脱氢酶mRNA序列充分互补，以便降低乳酸脱氢酶靶基因的表达；具有第一和第二核酸链以及至少25个碱基对的双链体区的dsNA，其中所述第一链的长度是25-34个核苷酸且所述dsNA的所述第二链的长度是26-35个核苷酸并且在其3′末端包括1-5个单链核苷酸，其中所述第一寡核苷酸链的3’末端和所述第二寡核苷酸链的5’末端形成平末端，并且当将所述双链核酸引入哺乳动物细胞时，所述第二寡核苷酸链沿所述第二寡核苷酸链长度的至少19个核苷酸与选自SEQIDNOs：361-432或5109-7122的靶标乳酸脱氢酶序列充分互补以便降低乳酸脱氢酶mRNA表达；具有长度是19-35个核苷酸的寡核苷酸链的核酸，其中，当将所述双链核酸引入哺乳动物细胞时，所述寡核苷酸链沿所述寡核苷酸链长度的至少19个核苷酸与选自SEQIDNOs：361-432的靶标乳酸脱氢酶mRNA序列充分互补以便降低乳酸脱氢酶靶mRNA表达；具有长度是15-35个核苷酸的寡核苷酸链的核酸，其中所述寡核苷酸链沿所述寡核苷酸链长度的至少15个核苷酸杂交至选自SEQIDNOs：361-432的靶标乳酸脱氢酶mRNA序列；具有包括RNA的第一和第二核酸链的dsNA，其中所述第一链的长度是15-35个核苷酸且所述dsNA的所述第二链的长度是19-35个核苷酸，其中所述第二寡核苷酸链沿所述第二寡核苷酸链长度的至少15个核苷酸杂交选自由至SEQIDNOs：361-432构成的组的靶标乳酸脱氢酶mRNA序列；具有包括RNA的第一和第二核酸链的dsNA，其中所述第一链长度是15-35个核苷酸且所述dsNA的所述第二链的长度是至少35个核苷酸并且可选地包括SEQIDNOs：3493-3499的长度是至少25个核苷酸的序列，其中，当将所述双链核酸引入哺...
【专利技术属性】
技术研发人员：B·D·布朗，H·T·杜德克，赖程，
申请(专利权)人：戴瑟纳制药公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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