用于IVT后RNA纯化的方法和试剂盒技术

本文涉及核酸纯化的方法，该方法包括：(a)将包含至少一种核酸的样品与结合缓冲液相组合以形成溶液，所述结合缓冲液包含至少一种磁性颗粒且具有约为4‑10的pH；(b)用结合缓冲液孵育样品，持续的时间足以使得所述至少一种核酸与所述至少一种磁性颗粒可逆结合，以形成至少一种经修饰的磁性颗粒；(c)从溶液分离所述至少一种经修饰的磁性颗粒；(d)用至少一种清洗缓冲液清洗所述至少一种经修饰的磁性颗粒；以及(e)使所述至少一种经修饰的磁性颗粒与洗脱缓冲液相结合。本文还揭示了包含这些缓冲液和磁性颗粒的试剂盒。

Method and kit for purification of RNA after IVT

This paper relates to a method for purification of nucleic acids, the method includes: (a) will contain at least one nucleic acid samples in combination with binding buffer to form a solution, the binding buffer containing at least one magnetic particles and has about 4 10 pH; (b) with binding buffer incubated samples. The duration to the at least one nucleic acid and the at least one reversible magnetic particles combine to form at least one of the magnetic particles modified; (c) separation from the solution of the at least one modified magnetic particles; (d) with at least one cleaning liquid and cleaning the buffer at least one of the magnetic particles modified; and (E) to the at least one magnetic particles modified with elution buffer combination. Kits containing these buffers and magnetic particles are also disclosed.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于IVT后RNA纯化的方法和试剂盒本申请根据34U.S.C.§119，要求2014年11月14日提交的美国临时申请系列第62/079854号的优先权，本文以该申请为基础并将其全文通过引用结合于此。
本文一般地涉及用于核酸纯化的方法和试剂盒，更具体地，涉及用于含RNA样品在体外转录之后的纯化的基于磁性颗粒的试剂盒和方法。技术背景核酸纯化(例如DNA或RNA的分离)对于各种生物化学和诊断过程会是重要的步骤。RNA可用于许多应用，例如，基因表达研究，分子研究和/或生物化学研究，例如RNA干扰、显微注射、感染、体外转录和/或核酸酶保护测定程序。转录是基因表达中的第一个步骤，其中，采用RNA聚合酶从DNA模板合成互补和反平行RNA链。体外转录(IVT)可以提供一种从DNA中体外转录具有所需序列或修饰(例如封端或放射标签)的核苷酸的方法。存在各种设计成驱动转录的IVT试剂盒，例如，T7、T3或SP6促进剂。但是，在继续开展下游应用之前，可能需要对IVT后样品进行纯化，以去除一种或多种污染物，例如，盐、蛋白质、酶和寡核苷酸等。存在此类污染材料会阻碍或阻止许多下游工艺。因此，从IVT后混合物有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对核酸进行纯化的方法，所述方法包括：(a)将包含至少一种核酸的样品与pH约为4‑10的结合缓冲液相组合，以形成溶液；其中，所述结合缓冲液包含至少一种磁性颗粒，存在的浓度约为0.2‑6M的至少一种离液剂，存在的浓度约为0.1‑5M的至少一种第一醇，以及任选的存在的浓度约为10‑100mM的至少一种第一盐；(b)使所述溶液孵育一段时间，其足以使得所述至少一种核酸与所述至少一种磁性颗粒可逆结合，以形成至少一种经修饰的磁性颗粒；(c)从经组合的溶液分离所述至少一种经修饰的磁性颗粒；(d)用至少一种清洗缓冲液清洗所述至少一种经修饰的磁性颗粒，所述清洗缓冲液包含至少一种第二醇和任选的至少一种第二盐；以...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.11.14 US 62/079,8541.一种对核酸进行纯化的方法，所述方法包括：(a)将包含至少一种核酸的样品与pH约为4-10的结合缓冲液相组合，以形成溶液；其中，所述结合缓冲液包含至少一种磁性颗粒，存在的浓度约为0.2-6M的至少一种离液剂，存在的浓度约为0.1-5M的至少一种第一醇，以及任选的存在的浓度约为10-100mM的至少一种第一盐；(b)使所述溶液孵育一段时间，其足以使得所述至少一种核酸与所述至少一种磁性颗粒可逆结合，以形成至少一种经修饰的磁性颗粒；(c)从经组合的溶液分离所述至少一种经修饰的磁性颗粒；(d)用至少一种清洗缓冲液清洗所述至少一种经修饰的磁性颗粒，所述清洗缓冲液包含至少一种第二醇和任选的至少一种第二盐；以及(e)使所述至少一种经修饰的磁性颗粒与洗脱缓冲液相组合。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，包含所述至少一种核酸的样品是包含RNA的IVT样品。3.如前述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述至少一种第一离液剂选自：盐酸盐胍(GuHCl)、硫氰酸胍(GuSCN))、锂盐，及其组合，其中，所述至少一种第一醇选自异丙醇、甲醇、乙醇、丁醇，及其组合；以及其中，所述至少一种第一盐选自磷酸二氢钠、磷酸氢二钠，及其组合。4.如前述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述至少一种第二醇选自异丙醇、甲醇、乙醇、丁醇，及其组合；以及其中，所述至少一种第二盐选自硫酸铵((NH4)2SO4)、乙酸铵(NH4Ac)、乙酸锂(LiAc)、乙酸钾(KAc)、乙酸钠(NaAc)、氯化钠(NaCl)，及其组合。5.如前述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述清洗缓冲液包含至少约70体积％的所述至少一种第二醇。6.如前述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述至少一种磁性颗粒选自羧基涂覆的顺磁性颗粒、基于二氧化硅的顺磁性颗粒，及其组合。7.如前述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述结合缓冲液中存在的所述至少一种磁性颗粒的浓度约为0.5-60μg/μL。8.如前述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，孵育时间段范围约为1-30分钟。9.如前述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，含有所述至少一种核酸的样品与所述结合缓冲液的体积比约为1:1.5至约为1:3。10.如前述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述洗脱缓冲液选自水和包含至少一种缓冲化合物和/或至少一种离子螯合剂的溶液。11.如前述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述至少一种经修饰的磁性颗粒用所述洗脱缓冲液孵育，持续的时间段约为30秒...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢宜铮，许正宜，CL·吴，H·J·严，
申请(专利权)人：康宁股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US