常温保存核酸标本的方法及其产品与使用方法技术

本发明专利技术涉及一种常温保存核酸标本的方法及其产品与使用方法，常温保存核酸标本的方法包括如下步骤：将二氧化硅微珠、氧化锆微珠和碳钢微珠用酸清洗，然后等个数混合，放在容器中；将核酸标本溶液加入容器中，混匀后干浴或干燥；将得到的样本室温干燥保存，即可。本发明专利技术提供的常温保存核酸标本的方法，以二氧化硅材质、氧化锆材质和和碳钢的微珠的表面为载体，利用核酸在高盐状态下，能与二氧化硅类物质亲和吸附，以及在干燥状态下能长期保存的特点，常温长期保存核酸；直接保存DNA、新鲜或固定液处理过的细胞，均可以实现对核酸的长期保存，且保存效果好，保存方法简单。

Method for preserving nucleic acid sample at normal temperature and its product and using method

The invention relates to a method for preserving specimens at room temperature and its nucleic acid products and the use of methods, methods of preservation of nucleic acid samples at room temperature comprises the following steps: the silica bead, zirconia beads and beads with acid cleaning of carbon steel, and the number of mixed in the container; the nuclear acid solution were added to the container. Bath or dry mixing; the sample drying at room temperature can be saved. The present invention provides a method for the preservation of nucleic acid samples, the surface of silica material, made of zirconium oxide and carbon steel beads as the carrier, the use of nucleic acid in high salt conditions, and silica based substances affinity adsorption characteristics, and can be preserved for a long time in dry conditions, long-term preservation of nucleic acid at room temperature; directly saved DNA fresh or fixed liquid treated cells, can achieve long-term preservation of nucleic acid, and good preservation effect, simple preservation method.

【技术实现步骤摘要】
常温保存核酸标本的方法及其产品与使用方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种常温保存核酸标本的方法及其产品与使用方法。
技术介绍
随着分子生物学检测技术的飞速发展，核酸的检测在各种领域发挥会着重要的作用。在检测的同时，也有大量的核酸标本需要被保存。这些保存下来的核酸有可能用于科学研究，或者随着科技的进步发挥更大的作用。常见的核酸包括DNA和RNA，其中DNA比较稳定，可长期保存；RNA极不稳定，若想长期保存需逆转录成cDNA，多数实验室只保存3～6个月。目前，保存核酸样本多采用低温冻存的方法，比如低温冰箱(多为-30℃或-80℃)、冷库或者液氮保存，这样做看似顺理成章，但是实际中还是存在一些可探讨的问题：第一，低温保存首先需要占用大量的冰箱，很占空间，其次不管是冰箱还是冷库，都需要大量的耗电，这既是经济负担，又是能源负担，还是环保负担；第二，用液氮保存核酸的报道比较少，因为液氮属于消耗品，需要经常补充，这就使得这种保存方法的价格相对昂贵，而且还存在一定的安全隐患；第三，DNA虽然很稳定，但是随着时间的推移其自身也在不断发生着降解，多数报道的理论上限是十年。RNA则更加明显，提取操作中稍有不慎，保存3个月都很困难。但是，如果分析核酸的理化性质和降解酶的活性就不难发现，其在完全被干燥的状态下，可以延长核酸的保存时间，甚至被长期保存。比如有文献报道，在70年代用FTA卡保存的人的全血样本中(干血片)，有人提取了RNA并成功进行了下游实验；还有报道，由于条件的限制，在非洲检测HIV病毒(一种RNA病毒)的常规方法是用FTA卡保存血液样本，干燥后运输到本地实验室检测进行检测；DNA效果更佳，尼安德特人基因的提取并测序，甚至是从恐龙化石中提取DNA都已经不是新闻。类似的报道很多，这些都说明一个问题，即使是不纯(和其它物质混合在一起的状态)，只要是在完全被干燥的状态下，核酸就能被长期常温保存。那么如果是比较纯的核酸呢，则结果未知。因此，还需要开发新型的保存核酸的方法。
技术实现思路
针对现有技术中的缺陷，本专利技术目的在于提供一种常温保存核酸标本的方法及其产品与使用方法，以通过采用二氧化硅材质、氧化锆材质和和碳钢的微珠的表面为载体，利用核酸在高盐状态下，能与二氧化硅类物质亲和吸附，以及在干燥状态下能长期保存的特点，常温长期保存核酸；直接保存DNA、新鲜或固定液处理过的细胞，均可以实现对核酸的长期保存，且保存效果好，保存方法简单。为实现上述目的，本专利技术提供的技术方案为：本专利技术提供了一种常温保存核酸标本的方法，包括如下步骤：S1：将二氧化硅微珠、氧化锆微珠和碳钢微珠用酸清洗，然后等个数混合，放在容器中；S2：将核酸标本溶液加入容器中，混匀后干浴或干燥；S3：将S2得到的样本室温干燥保存，即可。需要说明的是，三种微珠均要进行酸洗，这样做的目的有三：(1)可以去除珠子表面的核酸，实现无核酸；(2)增加表面的粗糙感，增加附着力；(3)先使玻璃珠带上正电荷，抵消随后的负电，增强吸附性。在本专利技术的进一步实施方式中，S1中，二氧化硅微珠、氧化锆微珠和碳钢微珠的个数均为10个，容器为1.5mL离心管或形状相似的容器。需要说明的是，将三种微珠共30个(1:1:1)，放在1.5ml离心管或形状相似的容器中，这样珠子数量和体积刚好，有利于水分的蒸发。在本专利技术的进一步实施方式中，S2中，干浴为在生物安全柜中45～55℃干浴，中间混匀2～3次。在本专利技术的进一步实施方式中，S2中，干燥为在真空干燥箱中干燥，干燥时间为6～30h。需要说明的是，干燥时间优选为24h。在本专利技术的进一步实施方式中，S2中，核酸标本溶液的体积不少于100μl。需要说明的是，加入的核酸标本溶液的体积应该不少于微球的总体积。在本专利技术的进一步实施方式中，S2中，核酸标本溶液为DNA溶液或细胞悬液。需要说明的是，如果是固定液处理的细胞，应该先用PBS洗涤后再重悬。在本专利技术的进一步实施方式中，DNA溶液中，DNA的量大于300ng；细胞悬液中，细胞数为(1～10)×107个。在本专利技术的进一步实施方式中，DNA溶液的溶剂为TE缓冲液；细胞悬液是采用PBS重悬细胞制备而成。本专利技术还保护同时上述常温保存核酸标本的方法保存得到的核酸标本。需要说明的是，完成后将核酸标本室温干燥保存，最好是阴凉通风处。本专利技术还提供了保存得到的核酸标本的使用方法，包括如下步骤：将保存的附有DNA样本的微珠直接扩增；或将保存的附有细胞样本的微珠用DNA提取试剂盒进行DNA提取，然后进行扩增；或将保存的附有细胞样本的微珠用RNA提取试剂盒进行RNA提取，将提取得到的RNA反转录成cDNA，然后进行下游实验。需要说明的是，对于DNA保存标本，可以取出一粒微珠直接扩增，也可以取出几粒微珠进行预混液的制备(根据浓度)；对于细胞或固定液处理后的细胞保存的标本，需要gDNA时可以用试剂盒提取或取出微珠，直接扩增，方法与DNA样本大致相同；需要RNA时则需要试剂盒提取，并且反转录成cDNA并进行下游实验。本专利技术提供的技术方案，具有如下的有益效果：(1)本专利技术提供的常温保存核酸标本的方法，以二氧化硅(玻璃)材质、氧化锆(陶瓷)材质和碳钢材质的微珠的表面为载体(三种微珠单独或者混合均可)，利用核酸在高盐状态下，能与二氧化硅类物质亲和吸附，以及在干燥状态下能长期保存的特点，常温长期保存核酸；(2)本专利技术提供的常温保存核酸标本的方法，直接保存DNA效果很好，而且保存后的DNA可以直接进行PCR扩增；直接保存RNA并反转录所得到cDNA的扩增效果一般，但可以通过干燥新鲜或固定液处理过的细胞，实现对RNA的长期保存，需要时重新提取并且逆转录即可，下游实验效果也很理想；当然从干燥后的新鲜细胞或固定液处理过的细胞中也可以提取DNA，而且得率同样很佳；(3)本专利技术提供的常温保存核酸标本的方法，保存方法简单，成本低。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。附图说明图1为本专利技术实施例一中常温保存DNA的琼脂糖凝胶电泳图；图2为本专利技术实施例一中常温保存DNA一年后的琼脂糖凝胶电泳图；图3为本专利技术实施例二中氧化锆微珠常温保存新鲜的细胞的琼脂糖凝胶电泳图；图4为本专利技术实施例二中二氧化硅微珠常温保存新鲜的细胞的琼脂糖凝胶电泳图；图5为本专利技术实施例三中氧化锆微珠常温保存固定液处理过的细胞的琼脂糖凝胶电泳图；图6为本专利技术实施例三中二氧化硅微珠常温保存固定液处理过的细胞的琼脂糖凝胶电泳图；图7为本专利技术实施例四中提取常温保存新鲜的细胞的基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，因此只是作为示例，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，数据为三次重复实验的平均值或平均值±标准差。实施例一：常温保存DNA本实施例提供一种常温保存核酸标本的方法，包括步骤具体如下。S1：将二氧化硅微珠、氧化锆微珠和碳钢微珠用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种常温保存核酸标本的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：将二氧化硅微珠、氧化锆微珠和碳钢微珠用酸清洗，然后等个数混合，放在容器中；S2：将核酸标本溶液加入容器中，混匀后干浴或干燥；S3：将所述S2得到的样本室温干燥保存，即可。

【技术特征摘要】
1.一种常温保存核酸标本的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：将二氧化硅微珠、氧化锆微珠和碳钢微珠用酸清洗，然后等个数混合，放在容器中；S2：将核酸标本溶液加入容器中，混匀后干浴或干燥；S3：将所述S2得到的样本室温干燥保存，即可。2.根据权利要求1所述的常温保存核酸标本的方法，其特征在于：所述S1中，所述二氧化硅微珠、所述氧化锆微珠和所述碳钢微珠的个数均为10个，所述容器为1.5mL离心管。3.根据权利要求1所述的常温保存核酸标本的方法，其特征在于：所述S2中，所述干浴为在生物安全柜中45～55℃干浴，中间混匀2～3次。4.根据权利要求1所述的常温保存核酸标本的方法，其特征在于：所述S2中，所述干燥为在真空干燥箱中干燥，干燥时间为6～30h。5.根据权利要求1所述的常温保存核酸标本的方法，其特征在于：所述S2中，所述核酸标本溶液的体积不少于1...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘思远，李坤，
申请(专利权)人：北京碳元科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11