肠道病毒RNA提取试剂盒及相应提取纯化肠道病毒RNA的方法技术

本发明专利技术首先提供一种肠道病毒RNA提取试剂盒，它包含如下组分，①RNA提取溶液Ⅰ：含十二烷基硫酸钠、曲拉通、异硫氰酸胍和100~400μg/ml的磁珠；②RNA提取溶液Ⅱ：含4-羟乙基哌嗪乙磺酸和氯化钠；③RNA提取溶液Ⅲ：含曲拉通和氯化钠；和④RNA提取溶液Ⅳ：硅油。本发明专利技术提供的提取试剂盒能配合自动化仪器使用，进行肠道病毒RNA定量检测；该试剂盒RNA提取得率高、检测灵敏度高；能对各样本中的RNA浓度进行快速、准确测定，为早期诊断各类病原体感染提供可靠的实验依据。本发明专利技术还提供一种包含RNA洗脱液的磁珠法RNA提取试剂盒和一种一步法提取RNA的试剂盒。本发明专利技术提供的三种试剂盒都能有效提取含有各种抑制物的肛拭子、粪便、咽拭子等不同类型样本的肠道病毒RNA。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术提供一种肠道病毒(Enterovirus, EV) RNA提取试剂盒,具体是ー种磁珠法提取RNA的试剂盒，本专利技术还提供相应提取纯化肠道病毒RNA的方法。
技术介绍
目前，国内已有多种基于实时荧光定量PCR技术定量检测RNA的试剂盒应用于临床检测中，这些试剂盒所提供的RNA提取方法主要是酚-氯仿法和柱提取法。该类试剂盒具有一定的优点，但存在很多不足之处1)检测灵敏度低，约在50(Tl000COpies/ml左右；检测线性检测范围窄，一般在I. 00E+03copies/m广I. 00E+07copies/ml之间，对于临床高值 (大于5. 00E+07copies/ml)和低值(小于I. 00E+03copies/ml)的样本无法检测；2)酚-氯仿法是最经典的RNA提取方法，但是操作繁琐，对于设备和人员操作要求高，低病毒载量的标本检出率低，且所用试剂具有一定的毒性；柱提取方法无需高速离心，但是需频繁更换离心管，用时长，特异性较差；3)现有试剂无法与自动化仪器配套使用，大大增加了检测成本；4)国外性能优异的试剂有QAGEN、PR0MEGA和OMEGA等公司产品，但试剂成本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于肠道病毒RNA的提取试剂盒，它包含如下组分，①RNA提取溶液Ⅰ：包含十二烷基硫酸钠、曲拉通、异硫氰酸胍和磁珠，且所述十二烷基硫酸钠可以以SDS、LLS、Chelex？100、Tween？20和NP？40中的任意一种或多种替代；②RNA提取溶液Ⅱ：含4？羟乙基哌嗪乙磺酸和氯化钠；③RNA提取溶液Ⅲ：含曲拉通和氯化钠，且所述氯化钠可以以氯化钾或氯化锂替代；④RNA提取溶液Ⅳ：硅油。

【技术特征摘要】
1.ー种用于肠道病毒RNA的提取试剂盒，它包含如下组分， ①RNA提取溶液I:包含十二烷基硫酸钠、曲拉通、异硫氰酸胍和磁珠，且所述十二烷基硫酸钠可以以SDS、LLS、Chelex-100, Tween 20和NP-40中的任意一种或多种替代； ②RNA提取溶液II:含4-羟こ基哌嗪こ磺酸和氯化钠； ③RNA提取溶液III:含曲拉通和氯化钠，且所述氯化钠可以以氯化钾或氯化锂替代； ④RNA提取溶液IV:硅油。2.根据权利要求I所述的提取试剂盒，其特征在于，它包含如下组分， ①RNA提取溶液I:由十二烷基硫酸钠O. 2^1. 0% (质量/体积)、曲拉通I. (Γ4. 0% (体积/体积)，异硫氰酸胍O. 2l. Omol/L和10(Γ400 μ g/ml的磁珠组成； ②RNA提取溶液II:包括4-羟こ基哌嗪こ磺酸10(T300mmol/L、氯化钠10(T300mmol/し溶液II的pH值为6·5±0·2; ③RNA提取溶液III:含曲拉通O. Γ1. 0% (体积/体积)和氯化钠10(T300mmol/L ； ④RNA提取溶液IV:硅油。3.根据权利要求I或2所述的提取试剂盒，其特征在干，该试剂盒中还包括RNA洗脱液，所述RNA洗脱液包含Tris-HCl和EDTA。4.根据权利要求I至3中任意一项所述的提取试剂盒，其特征在干，该试剂盒中还包括用于快速提取RNA的核酸释放剂水溶液,所述核酸释放剂包括莎梵婦(surfactin)O.OI O. 2mM/L，氯化钾 2(T30...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴立忠，
申请(专利权)人：戴立忠，
类型：发明
国别省市：