本发明专利技术提供了一种牛奶制品中青霉素酶的AlphaLISA检测试剂盒，其包括青霉素酶标准品、生物素化青霉素酶、抗青霉素酶单克隆抗体、抗鼠IgG包被受体磁珠、链亲和素供体磁珠、检测缓冲液、白色反应板、封口膜、操作说明书。其中抗鼠IgG包被受体磁珠包括100ug/mL受体磁珠，0.05%的Proclin-300和PH7.4的PBS溶液，链亲和素供体磁珠包括100ug/mL供体磁珠，25mM的HEPES、100mM的NaCl溶液和0.05%的Proclin-300。使用本发明专利技术的试剂盒建立了牛奶制品中青霉素酶的AlphaLISA检测方法，使具有样品用量少、灵敏度高、不需洗涤、检测周期短等优点。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了一种牛奶制品中青霉素酶的AlphaLISA检测试剂盒，其包括青霉素酶标准品、生物素化青霉素酶、抗青霉素酶单克隆抗体、抗鼠IgG包被受体磁珠、链亲和素供体磁珠、检测缓冲液、白色反应板、封口膜、操作说明书。其中抗鼠IgG包被受体磁珠包括100ug/mL受体磁珠，0.05%的Proclin-300和PH7.4的PBS溶液，链亲和素供体磁珠包括100ug/mL供体磁珠，25mM的HEPES、100mM的NaCl溶液和0.05%的Proclin-300。使用本专利技术的试剂盒建立了牛奶制品中青霉素酶的AlphaLISA检测方法，使具有样品用量少、灵敏度高、不需洗涤、检测周期短等优点。【专利说明】牛奶制品中青霉素酶的AI phaL ISA检测试剂盒
本专利技术涉及牛奶制品中的青霉素酶的检测，具体涉及一种牛奶制品中青霉素酶的AlphaLISA检测试剂盒。
技术介绍
牛乳中抗生素的残留问题越来越多的引起国际社会的关注，随着国家对乳及乳制品抗生素残留监管力度的增加，一些不法商贩在牛奶中非法添加青霉素酶，使牛乳在检测中达到合格标准。青霉素酶的过度使用会使人体产生过敏反应，更可能引起抗生素的滥用。现有的青霉素酶的检测方法有碘量法、酸度法、高效液相色谱法、酶联免疫法、头孢硝噻吩显色法以及杯碟法等。但是这些方法都有着诸如操作繁琐，检测灵敏度不高等缺点。特别是作为确证方法的杯碟法，操作过程需要进行微生物培养，然后将系列浓度梯度的标准品加入牛津杯，检测时间不少于3?5天，通量性极低。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术通过AlphaLISA检测方法来检测牛奶制品中青霉素酶，提供了一种用于检测牛奶制品中青霉素酶的AlphaLISA检测试剂盒。本专利技术采用的技术方案是:牛奶制品中青霉素酶的AlphaLISA检测试剂盒，包括青霉素酶标准品、生物素化青霉素酶、抗鼠IgG包被受体磁珠、链亲和素供体磁珠、抗青霉素酶单克隆抗体和检测缓冲液；其中所述抗鼠IgG包被受体磁珠包括100ug/mL受体磁珠(终浓度)、0.05%的Proclin-300和pH7.4的PBS溶液，链亲和素供体磁珠包括100ug/mL供体磁珠(终浓度)、25mM 的 HEPESUOOmM 的 NaCl 溶液和 0.05% 的 Proclin-300。上述试剂盒中所述抗鼠IgG包被受体磁珠为I mg/mL,链亲和素供体磁珠为I mg/mL,抗青霉素酶单克隆抗体为I mg/mL,生物素化青霉素酶0.5mg/mL。使用时，以总体积25uL计:其中抗鼠IgG包被受体磁珠5uL、链亲和素供体磁珠5uL、抗青霉素酶单克隆抗体5uL、生物素化青霉素酶5uL、待测样品5uL。本专利技术的试剂盒封装时，包括青霉素酶标准品(5000 UI/mL, 100 uL/盒)、生物素化青霉素酶(0.5 mg/mL, 100 uL/盒)、抗青霉素酶单克隆抗体(I mg/mL, 20 uL/盒)、抗鼠IgG包被受体磁珠(I mg/mL, 50 uL/盒)、链亲和素供体磁珠(I mg/mL, 50 uL/盒)、检测缓冲液(100 mL/盒)、白色反应板(96T，I块/盒)、封口膜(I块/盒)、操作说明书(I份/盒)。借由上述技术方案，本专利技术至少有一下优点和有益效果:利用本专利技术检测牛奶中的青霉素酶，样品用量少仅使用5uL即可、灵敏度高、不需洗涤、检测周期短等优点。【专利附图】【附图说明】图1为青霉素酶标准曲线示意图； 图2为AlphaLISA检测反应过程示意图； 图中:1-链亲和素供体磁珠，2-生物素化青霉素酶，3-抗青霉素酶单克隆抗体，4-青霉素酶，5-抗鼠IgG包被受体磁珠。【具体实施方式】以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。试剂盒中的抗青霉素酶单克隆抗体可选用市购的，也可用常规制备单克隆抗体的方法制备。链亲和素供体磁珠包括100ug/mL供体磁珠、25mM的HEPESUOOmM的NaCl溶液和0.05%的Proclin-300。检测缓冲液选用常规检测试剂盒中的缓冲液。一、抗鼠IgG包被受体磁珠的制备 1.洗涤受体磁珠:取5~5(^1^(2011^/1^)的受体磁珠于1.51^的离心管中，加入5(^1^的 PBS (pH=7.4), 14000r/min 离心 15min,去上清。2.偶联:(400mM 的 NaBH3CN，现配:25mg NaBH3CN+lmL 水)配制如下体系(20 μ L):5 μ L 受体磁珠(20mg/mL) +10 μ L 抗鼠 IgG 抗体(lmg/mL) +IyL NaBH3CN+0.125 μ L 的10%TW20+3.875 μ L 的 HEPES Buffer。在37°C条件下,6~10r/min振荡反应18~24h。3.封闭:(用800mM的NaOH配制65mg/mL的CMO,现配:5mL ^ 325mg)向管中加入10μ L的CMO Buffer，在37°C条件下，6~10r/min振荡反应lh。4.洗涤和保存:在41:条件下，1400017/1^11离心151^11，去上清，然后加入20(^1^的 Tirs-HCl (pH=8.0, IOOmM)。进行 10 次超声振荡(每次 ls)，在 4°C 条件下，14000r/min离心15min,去上清。加入Tirs-HCl(pH=8.0),进行2次超声振荡,离心,去上清,加200 μ L的PBS和0.05%的Proclin，涡旋振荡，超声振荡，避光。使用之前再次进行涡旋振荡。二、青霉素酶的生物素化 第一步:将青霉素酶进行下述净化: 使用材料，Thermo Zeba Desalt Spin (5mL/ 支),15mL 收集管适合> 7000da 的蛋白，500~2000 μ L样品量，起始浓度≥20 μ g/mL。1.去掉柱子底端封口帽，打开盖子，将柱子放入15mL的收集管中。2.在4°C条件下，1500r/min离心2min，去除保护液。离心过程中，保持一个方向(向外)。3.向 5mL 的柱子中加入 2.5mL 的 I XPBS (ρΗ=7.4)，洗柱，在 4°C条件下，1000r/min离心2min，重复2~3次。4.将柱子放入新的收集管中，去掉盖子，慢慢将样品注入树脂模的中心位置。5mL的柱子的上样量为500~2000 μ L05.(低体积样品)为了保证少量样品的回收，可添加一层超纯水或缓冲液到树脂模上，当样品完全吸收后，可促进回收率。5mL的柱子中，若样品含量< 750 μ L，可添加100 μ L的缓冲液。6.在4°C条件下，1000r/min离心2min,收集待测样品。7.浓度测定。第二步:对青霉素酶进行下述的生物素修饰 使用试剂:Solulink chromalink。1.利用脱盐柱，将液体交换成IOOmM磷酸钠，150mM的NaCl以及MDB(修饰buffer，pH=8.0)。2.测定脱盐蛋白浓度。将MDB调整到I~2.5mg/mL。3.配制DMF (二甲基甲酰胺):1~4mg的link+100 μ L无水DMF，_20°C保存2周。4.计算本文档来自技高网...
【技术保护点】
牛奶制品中青霉素酶的AlphaLISA检测试剂盒，其特征在于：包括青霉素酶标准品、生物素化青霉素酶、抗鼠IgG包被受体磁珠、链亲和素供体磁珠、抗青霉素酶单克隆抗体和检测缓冲液；其中所述抗鼠IgG包被受体磁珠包括100ug/mL受体磁珠，0.05%的Proclin?300和PH7.4的PBS溶液，链亲和素供体磁珠包括100ug/mL供体磁珠，25mM的HEPES、100mM的NaCl溶液和0.05%的Proclin?300。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王昱，聂福平，杨俊，李应国，肖进文，袁曾壮，叶自霞，
申请(专利权)人：重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：
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