The invention discloses a probe, a reagent kit and a detection method for rapid detection of Staphylococcus aureus sandwich DNA hybridization. The probe consists of a capture probe and a detection probe. The kit consists of a 96-well plate coated with poly dT, a pretreatment solution, a bacterial lysate, a lysis buffer, a nucleic acid hybridization solution, a probe solution, a washing solution, a chromogenic solution, a terminating solution, a positive control solution and a negative control solution. The kit can complete the whole process within 2 hours, and observe the color change by adding TMB color solution or determine the OD value by multi-functional enzyme marker. The invention can detect target sequence quickly, in large quantities and in specificity, and the operation is simple and convenient. It does not need expensive instruments and reagents, can judge the result by naked eyes, has no technical requirements for operators, and has short detection time.
【技术实现步骤摘要】
金黄色葡萄球菌夹心DNA杂交快速检测用探针、试剂盒和检测方法
本专利技术属于生物芯片领域,具体涉及一种SA夹心DNA杂交技术快速检测用探针、试剂及其检测方法。
技术介绍
金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,SA)是一种常见的革兰氏阳性菌,广泛分布于环境、动物和人体的表面,很难被清除。常引起皮肤、组织、器官的化脓性炎症,还可在食品如乳制品、肉制品、鱼类、罐头食品中生长和繁殖,分泌与毒力和致病力有关的肠毒素(staphylococcalenterotoxins,SETs),导致食物中毒发生,可造成人和多种动物的感染、死亡。除此之外,金黄色葡萄球菌其还与川崎病、中毒性休克综合征(toxicshocksyndrome)密切相关。随着抗生素的不规范使用甚至滥用,已经出现了许多金黄色葡萄球菌耐药性菌株,尤其甲氧西林抗性菌株(MRSA,Methicillin-ResistantS.aureus)已经在全世界范围内流行。根据全国耐药细菌监测网2015年全国细菌耐药监测报告,2012~2015,MRSA检出率均在35%以上,耐药菌株的出现使得抗生素作为医疗手段的效果大大降低。目前,金黄色葡萄球菌的检测方法主要有生化鉴定方法、免疫学方法、PCR技术和基因芯片技术等。传统生化检测方法应用最广泛,结果准确可靠,但操作耗时费力,不适合大批量样品的检验;酶联免疫吸附试验(ELISA)不稳定,具有可变性和易变形性;PCR易受到样品种类干扰,影响检测灵敏度;基因芯片技术在检测中敏感性高、特异性强,但操作复杂,对于低浓度菌检测效果较差,假阳性率也较高,而且需要需要昂贵 ...
【技术保护点】
1.金黄色葡萄球菌夹心DNA杂交快速检测用探针,其特征在于:包括SA捕获探针和SA检测探针,其中SA捕获探针的DNA序列为SEQ ID NO.1,SA检测探针的DNA序列为SEQ ID NO.2。
【技术特征摘要】
1.金黄色葡萄球菌夹心DNA杂交快速检测用探针,其特征在于:包括SA捕获探针和SA检测探针,其中SA捕获探针的DNA序列为SEQIDNO.1,SA检测探针的DNA序列为SEQIDNO.2。2.一种金黄色葡萄球菌夹心DNA杂交快速检测用试剂盒,其特征在于:包括包被了polydT的96孔板、前处理液、菌液裂解液、裂解缓冲液、核酸杂交液、探针液、洗涤液、显色液、终止液、阳性对照液和阴性对照液,其中一个微孔反应的用量为:所述探针液由以下成分组成:DNA序列为SEQIDNO.1的6μmol/L的SA捕获探针16μL;DNA序列为SEQIDNO.2的6μmol/L的SA检测探针16μL;合计32μL;所述前处理液,体积为30μL;裂解液,体积为30μL,由菌液裂解液和裂解缓冲液混合配制而成;所述核酸杂交液,体积为96μL;所述洗涤液,需10倍稀释后使用,体积为750μL;所述显色液,体积为150μL;所述终止液,体积为100μL。3.根据权利要求2所述金黄色葡萄球菌夹心DNA杂交快速检测用试剂盒,其特征在于:所述阳性对照液为SA菌液;所述阴性对照液为非SA菌液。4...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨俊,聂福平,王昱,王国民,李贤良,吴蕊,
申请(专利权)人:重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心,
类型:发明
国别省市:重庆,50
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