一种用于检测致病性大肠杆菌O157:H7的RPA-LFD引物对和探针及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测致病性大肠杆菌O157:H7的RPA‑LFD引物对和探针及其应用，引物对和探针序列如下：上游引物EOF4的核苷酸序列为SEQ ID NO.6；下游引物EOR3的核苷酸序列为SEQ ID NO.7；探针EOProb的核苷酸序列为SEQ ID NO.9。本发明专利技术的方法安全、特异、快速、灵敏、简便的现场检测，弥补了现有检测技术的不足。实验证明，本发明专利技术RPA‑LFD技术的最小反应体积为10μL，最适反应温度是40℃，最短检测时间15min，不仅极大地节约了反应成本，而且缩短了检测所需时间。由RPA反应筛选的最佳引物特异性强，RPA‑LFD灵敏度是PCR的100倍，具有很高的灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测致病性大肠杆菌O157:H7的RPA-LFD引物对和探针及其应用
本专利技术涉及一种用于检测致病性大肠杆菌O157:H7的RPA-LFD引物对和探针及其应用，属于食品安全检测

技术介绍
近年来，国内外食品安全事件层出不穷，食源性致病菌在全世界广泛分布并每年造成成千上万例的人类疾病，是世界头号食品安全问题。据世界卫生组织(WHO)最新发布的报告显示，全球每年发生食源性疾病达数10亿起，即使在发达国家也至少1/3人患食源性疾病。如美国估计每年约有4,800万例食源性疾病患者，其中12.8万人入院治疗，3000人死亡。在我国，威胁食品安全的最大问题同样是致病性微生物引起的食品污染。据国家卫计委通报，2015年度，我国微生物性食物中毒人数高达3181人，占全年食物中毒总人数的53.7％，为食物中毒人数之最。充分的数据表明，食源性致病菌是导致食源性疾病的主要致病微生物，常伴随食品原料的生产、加工、包装与贮运过程中污染食品，引起食源性疾病，对公众的身心健康造成了严重危害，已成为世界性的公共卫生问题，引起政府部门、食品企业、餐饮单位、研究人员以及消费者的高度关注。在整个细菌性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测致病性大肠杆菌O157:H7的RPA‑LFD引物对和探针，其特征在于，引物对和探针序列如下：上游引物EOF4的核苷酸序列为SEQ ID NO.6；下游引物EOR3的核苷酸序列为SEQ ID NO.7；探针EOProb的核苷酸序列为SEQ ID NO.9。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测致病性大肠杆菌O157:H7的RPA-LFD引物对和探针，其特征在于，引物对和探针序列如下：上游引物EOF4的核苷酸序列为SEQIDNO.6；下游引物EOR3的核苷酸序列为SEQIDNO.7；探针EOProb的核苷酸序列为SEQIDNO.9。2.根据权利要求1所述的扩增引物对和探针，其特征在于，所述下游引物EOR3的5’端应用生物素Biotin标记。3.根据权利要求1所述的扩增引物对和探针，其特征在于，所述探针EOProb的5’端应用羧基荧光素FAM标记。4.根据权利要求1所述的扩增引物对和探针，其特征在于，所述探针EOProb的3’端应用C3-Spacer封闭，且离5’端第33位的碱基A为四氢呋喃所替代。5.一种如权利要求1所述的扩增引物对和探针在制备检测致病性大肠杆菌O157:H7的试剂、试剂盒中的应用。6.一种如权利要求1所述的扩增引物对和探针在非疾病诊断或治疗领域的致病性大肠杆菌O157:H7检测中的应用。7.根据权利要求6所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡金强，王一，赵卫东，魏向珂，黄润娜，孙新城，王章存，景建洲，耿尧，高辉，姜春鹏，董彩文，
申请(专利权)人：郑州轻工业学院，
类型：发明
国别省市：河南,41