一种敲除野生型T细胞TCR alpha链的gRNA及方法技术

本发明专利技术公开一种敲除野生型T细胞TCR alpha链的gRNA及方法。所述gRNA的序列如SEQ ID NO：1所示，利用CRISPR/Cas9技术，所述gRNA和CRISPR/Cas9共感染T细胞，敲除野生型T细胞TCR alpha链，构建野生型TCR alpha链缺失的T细胞，可用于CAR‑T或者TCR‑T细胞免疫治疗。该gRNA敲除效率高，制备方法相对简易，可以快速、高效地为临床提供野生型TCR alpha链缺失的T细胞。

GRNA and method for knocking out TCR alpha chain of wild type T cell

The invention discloses a method and a knockout gRNA wild type T cells TCR alpha chain. Such as SEQ ID NO:1 shown in the sequence of gRNA, using CRISPR/Cas9 technology, the gRNA and CRISPR/Cas9 co infection of T cells, knockdown of wild-type T cells TCR alpha chain, construction of wild type TCR alpha chain deletion of T cells, CAR can be used for T or T cell immune TCR treatment. The gRNA knockdown efficiency is high, the preparation method is simple, fast and efficient delivery of wild type TCR alpha chain deletion of T cells for clinical.

【技术实现步骤摘要】
一种敲除野生型T细胞TCRalpha链的gRNA及方法
本专利技术涉及基因敲除
，尤其是涉及一种敲除野生型T细胞TCRalpha链的gRNA及方法。
技术介绍
肿瘤是目前人类健康的最大杀手，现有的治疗手段包括手术，化疗，放疗都无法彻底清除肿瘤，免疫T细胞治疗为肿瘤患者的康复带来了巨大希望。目前免疫T细胞治疗的方法主要有CAR-T和TCR-T细胞技术，这些T细胞治疗的原理是将肿瘤特异性的chimericantigenreceptor(CAR)或者Tcellreceptor(TCR)基因转染到正常T细胞上面，使之获得肿瘤特异性识别的能力，从而杀死肿瘤细胞。然而，由于正常T细胞含有自身的T细胞受体(野生型alpha和beta链)，这些野生型的alpha和beta链可以影响CAR-T或者TCR-T的表达，导致CAR-T或者TCR-T的活性降低；或者在受者体内攻击肿瘤外的靶器官和组织，导致供体对受体的移植免疫反应病(GVHD，graftverushostdisease)病；或者野生型的TCRalpha和beta链和肿瘤特异性的TCRalpha和beta链产生错配，导致T细胞获得新抗原识别本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种敲除野生型T细胞TCR alpha链的gRNA，其特征在于，所述gRNA的序列如SEQ ID NO：1所示。

【技术特征摘要】
1.一种敲除野生型T细胞TCRalpha链的gRNA，其特征在于，所述gRNA的序列如SEQIDNO：1所示。2.一种如权利要求1所述gRNA的编码DNA，其特征在于，所述gRNA的编码DNA序列如SEQIDNO：2所示。3.如权利要求1所述gRNA在敲除野生型T细胞TCRalpha链中的应用。4.一种敲除野生型T细胞TCRalpha链的方法，其特征在于：所述方法利用CRISPR/Cas9技术，通过如权利要求1所述gRNA和CRISPR/Cas9共感染T细胞，敲除野生型T细胞TCRalpha链，构建野生型TCRalpha链缺失的T细胞。5.根据权利要求4所述的敲除野生型T细胞TCRalpha链的方法，其特征在于，所述gRNA的启动子为U6启动子。6.根据权利要求4所述的敲除野生型T细胞TCRalpha链的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)gRNA靶位点的设计，合成编码gRNA的DNA序列；2)将步骤1)中合成的DNA片段和酶切过的CPRISPR/cas9表达载体进行连接，...

【专利技术属性】
技术研发人员：翁锦生，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第五医院，
类型：发明
国别省市：广东,44