本发明专利技术涉及siRNA分子及其在用于抑制ORAI1基因表达的方法和药物组合物中的应用。本发明专利技术还涉及所述siRNAs分子在治疗和/或预防以增加的ORAI1基因表达和/或活性为特征的眼病中的应用，优选地，所述眼病是结膜炎和/或眼睛变态反应，诸如季节性变应性结膜炎、常年性变应性结膜炎、春季角膜结膜炎、特应性角膜结膜炎和巨乳头状结膜炎。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】siRNA及其在用于抑制ORAI1基因表达的方法和组合物中的应用专利
本专利技术涉及这样的领域：siRNA产品及其在用于治疗和/或预防眼病的方法和组合物中的用途，所述方法和组合物更具体地用于治疗和/或预防诸如结膜炎和/或眼睛变态反应的眼病，所述眼病与高水平的ORAI1表达和或活性相关。专利技术背景RNA干扰(RNAi)是存在于大多数真核细胞中的天然存在的转录后调控机制，其使用小双链RNA(dsRNA)分子以指引依赖于同源性的基因沉默。Fire和Mello在蠕虫线虫(C.elegans)中的该发现{Fire，1998}获得了2006年的诺贝尔奖。在对其首次描述后不久，也显示RNAi发生在哺乳动物细胞中，不是通过长的dsRNAs而是通过21个核苷酸长的双链小干扰RNA(siRNAs)进行{Elbashir，2001}。据信RNA干扰的过程是在进化上保守的细胞防御机制，用于防止外源基因的表达，并且为不同门(phyla)和区系(flora)所共有，其中它被称为转录后基因沉默。自从发现RNAi机制，已经进行了大量研究，用于发现能够选择性地改变基因表达的新的化合物，其通过处理这样的靶标而作为治疗人类疾病的新途径，所述靶标是利用涉及小分子或蛋白质的常规药物方法“不能用药”的。根据现有知识，RNAi的机制始于由称为切酶(Dicer)的RNA酶III样蛋白质处理长的双链RNAs之时。蛋白质切酶通常包含N端RNA解旋酶结构域，结合RNA的所谓Piwi/Argonaute/Zwille(PAZ)结构域，两个RNA酶III结构域和双链RNA结合结构域(dsRBD){Collins，2005}，并且它的活性导致长的双链RNAs被加工为21-24个核苷酸的双链siRNAs，该双链siRNAs具有2个碱基的3'突出端和5'磷酸和3'羟基。所得的siRNA双链体然后结合到称为RNA诱导的沉默复合物(RISC)的效应物复合物中，其中在双链siRNA分子通过RNA解旋酶活性的三磷酸腺苷(ATP)依赖性解旋时{Nykanen，2001}，siRNA的反义或导引链指导RISC识别并切割目标mRNA序列{Elbashir，2001}。导致mRNA降解的RISC的催化活性由核酸内切酶Argonaute2(AGO2)介导{Liu，2004；Song，2004}。AGO2属于高度保守的Argonaute蛋白质家族。Argonaute蛋白质是～100KDa的高碱性蛋白质，其包含两个共同的结构域，即PIWI和PAZ结构域{Cerutti，2000}。PIWI结构域对于与切酶的相互作用是关键的，并且包含负责切割mRNAs的核酸酶活性{Song，2004}。AGO2使用siRNA双链体中的一条链作为指导去找到含互补序列的信使RNAs并在相对于指导链的5'端的第10和第11个碱基之间切割磷酸二酯骨架{Elbashir，2001}。RISC活化期间的一个重要步骤是由AGO2切割正义或信使链，将此链从复合物中去除{Rand，2005}。分析siRNA指导链和PIWI结构域之间相互作用的晶体学研究表明仅第2至第8个核苷酸构成指导RISC识别目标mRNA的“种子序列(seedsequence)”，并且此序列中单个核苷酸的错匹配可以显著影响所述分子的沉默能力{Ma，2005；Doench2004；Lewis，2003}。一旦mRNA已经被切割，由于片段中不受保护的RNA末端的出现，mRNA被细胞内的核酸酶进一步切割和降解，并且将不再被翻译为蛋白质{Orban，2005}，同时RISC将再循环用于随后的若干轮{Hutvagner，2002}。这构成了导致特定mRNA分子及相应的蛋白质的选择性减少的催化过程。可能利用基因沉默的这种天然机制从而通过直接将siRNA效应物递送到细胞或组织中来调控任何所选的基因，在所述细胞或组织中它们将活化RISC并且产生被靶向的mRNA的有效且特异性的沉默。RNAi已经用于生物医学研究，诸如HIV、病毒性肝炎、心血管病和脑血管病、代谢病、神经变性病症和癌症的治疗{AngajiSA等2010}。已经发表了许多研究，其描述了为获得最大有效性siRNA应当具有的理想特征，即，有关长度、结构、化学组成和序列。siRNA设计的初始参数由Tuschl及同事在WO02/44321中阐述，但是自此之后已经发表了许多后续研究、算法和/或改进。随着机制详细信息的出现，siRNA选择方法已经变得更加精细，除此之外，对现有和新的数据进一步分析可以提供关于进一步精细这些方法的另外的了解{WaltonSP等2010}。备选地，一些最近的研究报道了新型RNAi-引发结构的设计与分析与经典的19+2siRNA结构不同，并且其在突出端、长度或对称性方面不符合经典siRNA的关键特征，这讨论了RNAi机制在哺乳动物细胞中的灵活性{ChangCI等2011}。此外，已经投入了大量努力来增强siRNA的稳定性，原因在于，考虑到RNA酶在生物流体中的普遍存在的性质，这被认为是基于siRNA的治疗的主要障碍之一。siRNA分子的另一个固有的问题是其免疫原性，由此已发现siRNAs诱导先天性免疫系统的非特异性的激活。非目标基因(mRNAs)的敲减是siRNA-介导的基因沉默的公知的副作用。其由于siRNA与不同于目的靶标的mRNAs之间的部分互补性引起，并且由与任一siRNA链具有序列互补性的基因引起脱靶效应(OTEs)。用于稳定性增强和OTE减少所遵循的主要策略之一是使用修饰的核苷酸，如2’-O-甲基核苷酸，2’-氨基核苷酸，或含有2’-O或4’-C亚甲基键的核苷酸。此外，已经描述了对连接相邻的核苷酸的核糖核苷酸骨架的修饰，即，主要通过引入硫代磷酸酯修饰的核苷酸进行。似乎增强的稳定性和/或免疫原性降低通常与功效成反比{Parrish,2000}，并且仅有特定数量的、位置和/或修饰的核苷酸的组合才能导致稳定的且无免疫原性的沉默化合物。由于这是基于siRNA的治疗的主要障碍，所以已经公开了不同的研究，其描述了表现出良好的结果的特定的修饰模式，这些的实例包括EP1527176,WO2008/050329,WO2008/104978或WO2009/044392，尽管在参考文献中可以找到许多更多实例{SanghviYS.2011；Deleavey等2012}。变应性疾病的特征在于人免疫系统对食用、吸入肺中、注射或接触到的外源蛋白质物质(“变应原”)的过度反应。变态反应(allergy)具有遗传成分。如果父母亲中仅有一方具有任意类型的变态反应，那么，每个孩子将具有变态反应的机会是1/3。如果父母双方都具有变态反应，那么他们的孩子具有变态反应的可能性要大得多(7/10)。对于变态反应无法治愈；然而，可以用正确的预防和治疗来管理它们。全世界大约有30％的人患有变态反应症状，并且他们中有40-80％具有眼部症状{KeyB.2001}。影响眼睛的变应性疾病或眼睛变态反应组成异质(heterogenic)疾病组，其具有非常广谱的临床表现。眼睛变态反应通常在结膜(覆盖眼睛的膜和眼睑的内层)与变应原反应时发生。眼睛变态反应可以独立发生或与其他变态反应症状(诸如鼻炎或哮喘)联合发本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于治疗和/或预防以增加的ORAI1表达和/或活性为特征的眼病的siRNA分子，其中所述分子特异性靶向选自由SEQ ID NO.1–SEQ ID NO.111组成的组的至少一种序列。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.10.22 EP 13382415.11.用于治疗和/或预防以增加的ORAI1表达和/或活性为特征的眼病的siRNA分子，其中所述分子特异性靶向选自由SEQIDNO.1–SEQIDNO.111组成的组的至少一种序列。2.根据权利要求1所述的siRNA分子，其中所述眼病是眼睛变态反应和/或结膜炎。3.根据权利要求1或2所述的siRNA分子，其中所述眼病选自季节性变应性结膜炎、常年性变应性结膜炎、春季角膜结膜炎、特应性角膜结膜炎、巨乳头状结膜炎、干眼综合征和它们的组合。4.根据前述权利要求中任一项所述的siRNA分子，其中所述siRNA包含19个核苷酸的双链区域。5.根据权利要求4所述的siRNA分子，其中所述siRNA是平端的。6.一种siRNA分子，其中所述分子特异性靶向选自由SEQIDNO.1–SEQIDNO.111组成的组的至少一种序列，并且在引入到细胞时减少ORAI1基因的表达，并且其中所述siRNA包含19个核苷酸的平端双链结构。7.根据前述权利要求中任一项所述的siRNA分子，其中所述siRNA包含选自由SEQIDNO.112–SEQIDNO.229组成的组的至...
【专利技术属性】
技术研发人员：安娜·伊莎贝尔·希门尼斯，库瓦东加·帕内达，塔玛拉·马丁内斯，
申请(专利权)人：西伦蒂斯私人股份公司，
类型：发明
国别省市：西班牙,ES
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。