siRNA及其在抑制NRARP基因表达的方法和组合物中的用途技术

本发明专利技术涉及siRNA分子及其在用于抑制NRARP基因表达的方法和药物组合物中的用途。本发明专利技术还涉及所述siRNA分子在治疗和/或预防特征为增加的NRARP基因表达和/或活性的与新血管形成相关的疾病或病症中的用途，所述眼部病症选自包含以下各项的组：年龄相关性黄斑变性(AMD)，缺血性视网膜病变，糖尿病黄斑水肿(DME)，增生性糖尿病视网膜病变(PDR)，糖尿病视网膜缺血(DRI)，糖尿病视网膜水肿(DRE)和早产儿视网膜病变(ROP)及其组合。产儿视网膜病变(ROP)及其组合。产儿视网膜病变(ROP)及其组合。

【技术实现步骤摘要】
siRNA及其在抑制NRARP基因表达的方法和组合物中的用途
[0001]本申请是国际申请日为2016年9月7日、国际申请号为PCT/EP2016/071122于2018年3月8日进入中国国家阶段、申请号201680052073.2、专利技术名称“siRNA及其在抑制NRARP基因表达的方法和组合物中的用途”的申请的分案申请。
专利

[0002]本专利技术涉及以下领域：siRNA产品及其在用于治疗和/或预防与新血管形成相关的视网膜病变，并且更特别地用于治疗和/或预防与NRARP基因的高水平表达和/或活性相关的与新血管形成相关的视网膜病变的方法和组合物中的用途。
[0003]专利技术背景
[0004]健康的视网膜是好的视力所必需的。视网膜病变症可以导致视力的部分或全部丧失。许多视网膜疾病具有共同的症状和治疗，但是各自具有独特的特性。视网膜疾病治疗的目标是停止或减缓疾病进展和保护或恢复丧失的视力。
[0005]神经视网膜是复杂的神经组织，其由八个互连的细胞层的网络组成，负责将视觉光转化为机电信息，所述机电信息通过视神经被发送至脑并由其解释。视网膜内的神经细胞的布置需要光通过大多数细胞层以到达位于视网膜后部的光感受器；之后光感受器将信息传输至视网膜神经元用于视觉信息的本地处理和向视皮层的传输。有两种类型的光感受器，视杆和视锥。两种类型的光感受器存在于整个视网膜中，但是视杆在外围占优而视锥在视网膜中心最密集。视网膜的中心，也被称为黄斑黄斑，是视网膜的专门化的区域，其具有密集的视锥和高浓度的色素，此处的视力最为敏锐。视网膜的主要特性之一是它的透明性。透明性允许光到达视网膜的最外层(光感受器位于其中)。该透明性要求暗示了滋养和支持视网膜所需的血管系统是极端专门化的。向视网膜的供血由两个主要来源提供：视网膜血管系统和脉络膜。脉络膜是高度血管化的、具有色素的组织，其位于视网膜和巩膜之间。脉络膜通过经由脉络膜毛细血管的扩散向视网膜提供营养物，代谢物和气体交换。视网膜色素上皮(RPE)是位于神经视网膜和脉络膜之间的单层的色素细胞。RPE细胞保护，支持并且饲养对光敏感的视网膜。神经视网膜的特殊环境由血液
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视网膜屏障(BRB，也被称为血
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视网膜屏障)保持。BRB由内部血液
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视网膜屏障和外部血液
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视网膜屏障组成。内部血液
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视网膜屏障由视网膜血管系统的毛细血管内皮细胞间的紧密连接形成。外部血液
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视网膜屏障由RPE细胞的紧密连接组成。RPE细胞间的紧密连接对于控制通过BRB的液体和可溶性化合物的运输以及避免毒性物质进入视网膜是必要的。
[0006]血管主要通过两个过程在视网膜中形成：血管化或血管发生。血管化因为已经存在于组织中的前体细胞分化成有助于血管形成的内皮细胞而发生。血管发生的不同之处在于通过从已经存在的血管系统中萌发而产生新的血管。血管发生需要内皮细胞的增殖，迁移和分化；以及新形成的血管的成熟。生物成体中的内皮细胞数目通常稳定；内皮中的稳定性由血管生成和抗
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血管生成因子的浓度的平衡来控制。因子平衡的改变导致引起或抑制血管发生。血管化和血管发生是在发育及其他事件如愈合期间发生的自然过程；但是这些过程也参与某些疾病的发病。病理性新血管形成通常暗示血管化和血管发生两者的组合。
有两种类型的新血管形成在视网膜中发生，并且两者都可能导致视力丧失：视网膜新血管形成(RNV)，其中新的血管自视网膜毛细血管萌出并且侵入玻璃体和神经视网膜层，以及脉络膜新血管形成(CNV)，其中新的血管自脉络膜血管系统萌出并且侵入视网膜下空间。虽然RNV和CNV源于不同的血管网络并且侵入视网膜的不同层，但是共有的分子机制促进两者的进展。RNV和CNV是发达国家中严重视力丧失的最常见病因并且需要新的治疗。
[0007]血管内皮生长因子(VEGF)，是最重要的血管发生介质之一，其在RNV和CNV期间被上调。在过去十年，科学家们已经开发出了若干种新的
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抗
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VEGF
″
药物。其有助于阻断异常血管，减缓其渗漏，并且有助于减小视力丧失。利用抗
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VEGF药物的治疗通过玻璃体内注射进行。
[0008]玻璃体内(IVT)注射是最常用的将药物递送至眼睛后部的方法，其可用于所有目前被批准用于治疗视网膜疾病的药物，除了维替泊芬(verteporfin)。维替泊芬通过静脉内注射给药，之后是激光治疗，但是用于现代抗
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VEGF治疗的上市其使用显著减少。IVT注射扩大使用的原因在于递送药物的效率，视网膜医生的熟悉水平和医生控制治疗依从性的能力(Rowe
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Rendleman等2014)。然而，该方法也具有其自身的一系列非常明确的缺点，包括患者不适，眼内炎的风险，白内障形成和视网膜脱离以及由于基于诊室的施用所致的高昂的相关费用。其他施用方法包括眼周注射，脉络膜上注射，筋膜下(sub
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tenon)注射并且还包括滴眼液。然而，对于利用滴眼液是否能够实现足够的效力以治疗视网膜病变症存在一定的怀疑，因为活性成分需要从角膜递送至其在视网膜中的作用位点。存在显著的障碍和排除途径阻碍将药物递送至眼睛后部。首先，施用的药物中仅有1
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7％被眼睛吸收；大部分作为滴眼液施用的药物从眼睛排出或经由鼻泪管被吸收至体循环。此外，药物被从玻璃体液快速清除。存在两种自后腔清除的途径，在前的和在后的。前者通过眼房水(AH)流动并且之后通过经由前房角的AH外流对前房进行清除。后者意味着通过血液
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视网膜屏障的排除。因此，能够轻易地渗透通过血液
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视网膜屏障的药物在玻璃体液中将具有非常短的半衰期。
[0009]用于治疗与新血管形成相关的视网膜疾病的抗
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VEGF药物的备选物是基于RNA干扰(RNAi)的药物。
[0010]RNAi是存在于大多数真核细胞中的天然发生的转录后调节机制，其使用小的双链RNA(dsRNA)分子来指引依赖于同源性的基因沉默。其由Fire和Mello在线虫(C.elegans)中发现{Fire等1998}，这在2006年被授予诺贝尔奖。在其被首次描述后，很快地证明借助于21个核苷酸长度的双链小干扰RNA(siRNA)，RNAi也发生在哺乳动物细胞中{Elbashir等2001}。
[0011]RNA干扰的过程被认为是用于阻止外源基因表达的在进化上保守的细胞防御机制并且为不同的门和植物群所共有，其中其被称为转录后基因沉默。因为RNAi机制的发现，爆发了揭示可通过寻靶选择性地改变基因表达以作为治疗人类疾病的新方式的在涉及小分子或蛋白质的常规药物方法的情况下是
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不可作为药物的
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新化合物的研究。
[0012]根据目前的知识，RNAi的机制始于被称为Dicer的RNA酶III样蛋白质加工长的双链RNA。Dicer蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.滴眼液形式的药物组合物，其包含特异性靶向选自由SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.9组成的组中的至少一个序列的siRNA分子。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述siRNA包含19个核苷酸的双链区。3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述siRNA是平端的。4.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中，所述siRNA包含选自由SEQ ID NO.10至SEQ ID NO.18组成的组的至少一个序列或由其组成。5.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中所述siRNA包含正义链和与所述正义链互补的反义链或由其组成，其中所述正义链包含选自由SEQ ID NO.10至SEQ ID NO.18组成的组的至少一个序列或由其组成。6.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中至少一个核苷酸包含化学修饰。7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中核苷酸的所述化学修饰选自：2
′‑
O
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甲基修饰，2
′‑
氟修饰，引入硫代磷酸酯修饰的核苷酸，用5
‑
丙炔基尿嘧啶置换尿嘧啶，用5
′‑
甲基尿苷置换尿嘧啶，用4
′‑
硫代核糖置换尿嘧啶核糖核苷酸和用脱氧胸苷核苷酸置换尿嘧啶核糖核苷酸，及其组合。8.根据权利要求6或7所述的药物组合物，其中所述化学修饰在正义链上，在反义链上或在两条链上。9.根据权利要求6至8中任一项所述的药物组合物，其中所述siRNA包含至少一个选自由SEQ ID NO.19至SEQ ID NO.66组成的组的序列。10.根据权利要求6至9中任一项所述的药物组合物，其中所述siRNA包含正义链和与所述正义链互补的反义链或由其组成，其中所述正义链包含至少一个选自由以下组成的组的序列或由其组成：SEQ ID NO.19，SEQ ID NO.21，SEQ ID NO.23，SEQ ID NO.25，SEQ ID NO.27，SEQ ID NO.29，SEQ ID NO.31，SEQ ID NO.33，SEQ ID NO.35，SEQ ID NO.37，SEQ ID NO.39，SEQ ID NO.41，SEQ ID NO.43，SEQ ID NO.45，SEQ ID NO.47，SEQ ID NO.49，SEQ ID NO.51，SEQ ID NO.53，SEQ ID N...

【专利技术属性】
技术研发人员：安娜，
申请(专利权)人：西伦蒂斯私人股份公司，
类型：发明
国别省市：